胰腺癌细胞株和胰腺癌组织中miRNAs的表达检测

目的:探明miRNAs在胰腺癌细胞株及组织中的表达情况,证实miRNAs的差异表达与胰腺癌的发生有相关性.方法:对胰腺癌细胞株和胰腺癌组织进行总RNA的提取,通过Real-time PCR方法检测17种miRNAs(miR-16、miR-20a、miR-21、miR-26a、miR-142-3p、miR-155、miR-210、miR-181a、miR-181b、miR-196a、miR-939、miR-223、miR-1202、miR-1207-5p、miR-1825、miR-1228、miR-1915)在胰腺癌细胞株及胰腺癌组织中的表达,分析miRNAs的表达与胰腺癌患者临床表现之间有无相关性.结果:胰腺癌细胞株和胰腺癌组织中miRNAs的表达明显较正常胰腺组织高.癌组织及癌旁组织中miRNAs表达量在不同性别的胰腺癌患者中差异不大(P＞0.05),并且miRNAs的表达与患者年龄及其血清CA19-9关系不大.结论:经筛选的miRNAs可以作为胰腺癌的诊断标志.胰腺癌组织中的miRNAs表达并不是一成不变的,而是随着肿瘤的生长而不断发生变化.     

实时荧光定量RT-PCR对胃癌组织中hMLH1 mRNA的检测及其临床意义

目的:探讨DNA错配修复基因hMLH1在胃癌组织中的表达水平及其临床意义.方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对40例胃癌患者的癌组织、40例癌旁胃炎组织及21例慢性胃炎患者的慢性胃炎组织中hMLH1 mRNA进行定量检测,以三磷酸甘油醛脱氢酶基因(hGAPDH)为内参照.结果:胃癌组织、癌旁胃炎组织、慢性胃炎组织中hMLH1 mRNA的相对含量分别是7.23±1:11.91,3.80±5.13,2.01±1.25,三组相比差异有统计学意义(F=3.272,P=0.042),胃癌组织中hMLH1mRNA含量明显高于其他两组,癌旁胃炎组织中含量明显高于非胃癌惠者慢性胃炎组织中的含量(P＜0.05);除hMLH1 mRNA含量在有、无淋巴结转移的胃癌组织中有显著差异(P＜0.05)外,hMLH1 mRNA在胃癌组织中含量受肿瘤直径、浸润深度影响不大(P＞0.05).结论:胃癌组织和癌旁慢性胃炎组织与慢性胃炎组织相比存在hMLH1 mRNA转录差异,这种基因的转录差异可能与胃癌的发生有关,而与胃癌的发展关系不显著.     

结肠癌组织RASSF1A基因转录表达和启动子区甲基化研究

目的:研究Ras相关区域家族1A基因(ras association domain family 1A,RASSF1A)启动子区甲基化对结肠癌组织中该基因转录和表达的影响.方法:应用甲基化特异性PCR(Methylation-special PCR,MSP)、RT-PCR和Western blot方法检测30例结肠癌组织和癌旁组织中的RASSF1A基因启动子区甲基化状态、mRNA和蛋白表达水平.结果:①RASSF1A基因启动子区在结肠癌纽织和正常组织中的甲基化频率分别为57%(17/30)和20%(6/30),甲基化频率在两组具有统计学差异(p＜0.01),,结肠癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化频率显著高于癌旁正常组织(x2=8.531,p＜0.01);②结肠癌组织中RASSF1A基因mRNA和蛋白袁达均显著低于癌旁组织(癌组织和癌旁正常组织中mRNA相对表达量分别为0.2836±0.0493和0.5092±0.0433,P＜0.001;以上组织中蛋白相对表达量分别为0.3124±0.0472和0.5320±0.0440,P＜0.01);③在结肠癌组织中,甲基化组RASSF1A基因mRNA和蛋白表达明显低于非甲基化组(甲基化组和非甲基化组mRNA相对表达量分别为0.0686±0.0174和0.5511±0.0486,P＜0.0001;以上组中蛋白相对表达量分别为0.1219±0.0326和0.5614±0.0380,P＜0.0001).结论:结肠癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化明显增高,与该基因蛋白表达减少显著相关,这可能是导致结肠癌中RASSF1A抑癌基因失活的主要因为.     

NF2基因甲基化及其mRNA表达与乳腺癌发病的关系

目的:探讨乳腺癌中NF2基因启动子甲基化状态及其mRNA水平与乳腺癌发病的关系.方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测47例乳腺癌组织及相应的癌旁组织和15例乳腺良性病变组织,分析NF2基因的甲基化与某些临床参数及mRNA表达的关系.结果:NF2基因启动子区在乳腺癌、癌旁和乳腺良性病变组织中的甲基化频率分别为57.4%(27/47)、23.4%(23/47)和0%(0/15).且乳腺癌组明显高于其余两组(P＜0.05).NF2基因发生甲基化与发病年龄、组织分型、转移和组织分级无相关性.乳腺癌组NF2基因mRNA的相对表达量(0.16±0.11)明显低于相应的癌旁组(0.27±0.14)及乳腺良性病变组(0.64±0.17)(P＜0.05).NF2基因启动子区甲基化频率与其mRNA表达呈负相关(Spearman's r=-0.314,P＜0.05).结论:NF2基因发生甲基化与乳腺癌的发生密切相关,NF2mRNA表达与NF2基因启动子高甲基化呈负相关.     

miR-101抑制凋亡基因调控胰腺癌发生发展的初步研究

目的：研究miR-101在胰腺癌组织中的表达水平及其作用机制。方法：采用实时定量PCR的方法分别检测36例胰腺癌手术切除标本及对应癌旁组织中miR-101的表达水平;运用生物信息学的方法预测其可能的靶基因;通过双荧光素酶报告基因系统验证miR-101与可能靶基因之间的关系。结果：胰腺癌组织中miR-101的表达水平较癌旁组织明显降低（P〈0.01）。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因系统结果显示Mcl-1和Ezh2基因可能是miR-101的靶基因。结论：胰腺癌组织中miR-101表达降低,可能通过抑制胰腺癌细胞中Mcl-1和Ezh2基因的表达调控胰腺癌的发生发展。     

Notch受体在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨胰腺癌及癌旁组织中Notch1～4蛋白和mRNA表达及临床意义。方法:应用免疫组化方法检测40例胰腺癌组织及对应的癌旁组织石蜡标本中Notch1～4蛋白的表达情况;分析Notch1～4受体表达水平与胰腺癌临床病理特征关系;应用实时逆转录聚合酶链反应(Real-time RT PCR)检测冰冻胰腺癌组织及对应的癌旁组织手术标本中Notch1～4的mRNA表达情况。结果:免疫组化结果显示:Notch1、Notch2在胰腺癌组织中蛋白表达明显比胰腺癌旁组织低(P0.05);Notch3在胰腺癌组织中蛋白表达比胰腺癌旁组织高,但是差异无统计学意义(P0.05);Notch4在胰腺癌组织中蛋白表达比胰腺癌旁组织高(P0.05)。Notch1～4受体的表达与肿瘤分化程度和临床分期呈负相关(P0.05)。Real-time RT PCR结果显示:与胰腺癌旁组织相比,癌组织中Notch1,Notch2的mRNA相对表达水平显著下调;胰腺癌癌组织中Notch3,Notch4的mRNA相对表达水平显著上调。结论:Notch家族的Notch1～4受体在胰腺癌组织及其旁组织的蛋白和mRNA表达不同,Notch蛋白表达可以作为胰腺癌的风险预测因子。     

抑癌基因PTEN在胰腺癌组织中的表达及其意义

目的研究胰腺癌组织中PTEN蛋白及PTEN mRNA的表达及其临床病理意义.方法常规石蜡包埋切片SABC免疫组化法和原位杂交技术检测26例胰腺癌、12例癌旁组织及8例正常胰腺组织中PTEN蛋白和PTEN mRNA表达情况,同时结合病人的临床病理资料进行分析.结果 26例胰腺癌、12例癌旁组织及8例正常胰腺组织中,正常胰腺组织及癌旁组织PTEN蛋白阳性16例(75%),阳性物质位于胰腺腺细胞及胰岛细胞的胞质中,胰腺癌PTEN蛋白阳性10例,PTEN蛋白表达于癌细胞胞质,阳性率(38.4%)与正常组织存在显著差异(P<0.01).淋巴结未转移病例PTEN阳性率与淋巴结转移病例的阳性表达率无显著差异(P>0.05).PTEN mRNA表达结果与PTEN蛋白基本一致,胰腺癌PTEN mRNA阳性12例,阳性率(46.2%).结论 PTEN表达与胰腺癌临床病理特征和生物学行为存在密切关系.可能与胰腺癌的发生、发展及预后有关.     

miR-145、miR-186表达与非小细胞肺癌组织临床病理特征和PI3K/Akt/ mTOR信号通路的关系

摘要 目的：探讨微小核糖核酸（miR）-145、miR-186表达与非小细胞肺癌（NSCLC）临床病理特征和磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的关系。方法：选择2020年3月至2023年3月我院收治的128例行肺癌根治手术治疗的NSCLC患者,取其术中癌组织和癌旁组织（距离癌组织5 cm以上）,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测miR-145、miR-186以及PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA表达。分析miR-145、miR-186表达与NSCLC患者临床病理特征的关系;Pearson检验分析NSCLC患者癌组织miR-145、miR-186表达与PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA表达的相关性。结果：癌组织miR-145、miR-186表达低于癌旁组织（P＜0.05）,低分化、TNM ⅢA期、淋巴结转移的NSCLC组织miR-145、miR-186表达低于中高分化、TNM Ⅰ～Ⅱ期、未发生淋巴结转移的NSCLC组织（P＜0.05）。癌组织PI3K mRNA、Akt mRNA 、mTOR mRNA表达均高于癌旁组织（P＜0.05）,癌组织miR-145、miR-186表达与PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA表达均呈负相关（P＜0.05）。结论：NSCLC组织中miR-145、miR-186表达下调,miR-145、miR-186表达下调可能激活PI3K/ Akt/mTOR信号通路促使NSCLC进展,且与NSCLC患者癌组织低分化、TNM ⅢA期、淋巴结转移有关。     

骨桥蛋白在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究骨桥蛋白OPN在胰腺癌中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法:采用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测50例胰腺癌手术切除标本和20例癌旁正常胰腺组织中OPNmRNA及其蛋白水平的表达。结果:胰腺癌组织中OPNmRNA高表达率为90%(45/50)明显高于其在癌旁正常胰腺组织中的表达15%(3/20),差异有统计学意义(P<0.01);OPN蛋白的阳性率为86.0%(43/50),明显高于癌旁正常胰腺组织中的表达30%(6/20),差异有统计学意义(P<0.01);OPN在胰腺癌组织中表达与其淋巴结转移明显相关(P<0.05)。结论:OPN在胰腺癌中的过表达对胰腺癌的生长、浸润及转移起重要作用。     

NF-κB与Slug在非小细胞肺癌及其上皮间质转化中的作用

目的:研究核因子NF-κB与slug在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况、及二者与非小细胞肺癌上皮间质转化(EMT)的关系,为非小细胞肺癌的诊断治疗提供理论依据.方法:(1)采用免疫组化PV9000二步法测定50例NSCLC组织及20例相应正常肺组织中NF-κBP65、slug、E-cadherin及Vimentin蛋白表达情况.(2)采用RT-PCR测定其中25例NSCLC组织及10例相应正常肺组织中NF-κBP65、slug的mRNA表达情况.结果:NSCLC中NF-κBP65蛋白表达量高于癌旁正常肺组织(Z=-2.370,P＜0.05),NF-κBP65mRNA表达量明显高于癌旁正常肺组织(t=4.967,P＜0.01);Slug蛋白表达量明显高于癌旁正常肺组织(Z=-4.443,P＜0.01),SlugmRNA表达量明显高于癌旁正常肺组织(t=6.483,P＜0.01).在NF-kBP65阳性癌组织中,E-cadherin蛋白表达下降(x2=5.024,P＜0.05),Vimentin蛋白表达上升(x2=4.723,P＜0.05);Slug阳性癌组织中,E-cadherin蛋白表达下调(x2=5.984,P＜0.05),Vimentin表达上调(x2=5.028,P＜0.05).另外,NF-kBP65与Slug在蛋白水平呈极显著正相关(r=0.443,P＜0.01),在mRNA水平呈显著正相关(r=0.439,P＜0.05).NF-κB与分化程度(x2=5.024,P＜0.05)、有无淋巴结转移(x2=7.933,P＜0.01)及肿瘤的分期(x2=5.614,P＜0.05)有关,与性别、年龄、组织类型无明显相关性(P＞0.05);Slug与淋巴结转移(x2=6.174,P＜0.05)及肿瘤的分期(x2=7.317,P＜0.01)有关,与性别、年龄、组织类型、分化程度无明显相关性(P＞0.05).结论:NF-κB、slug在NSCLC中表达增强,可能与NSCLC的发生、发展、转移有关;并且NF-κB与Slug可能协同抑制E-cadherin表达,促进Vimentin表达,诱使NSCLC的EMT发生,从而为进一步研究NSCLC的EMT提供理论依据.     

国际植物基因组组织与计划概况及我国的应对策略

本文简要介绍了植物基因组领域主要的组织和计划,简单分析了国际植物基因组计划的特点和我国存在的问题,并初步提出我国的应对策略。     

Similarities and differences in the growth of the heart in situ and in transplants

Growth and ploidy of rat ventricular myocytes were studied during development in situ and in grafts (1 day old rat ventricle transplanted under kidney capsule of syngenic adult animals). Both in situ and in the transplants polyploidization occurred on days 4-14 of postnatal life, and the modal group of myocytes was represented by binucleate diploid (2c x 2) cells. Minor quantities of 4c, 4c x 2, 8c and 2c x 4 myocytes were detected as well. In ventricles of 14 and 28 days old rats and in the transplants of the corresponding age the portion of polyploid myocytes was 90-96% and 32-63% respectively. The intensity of postmitotic myocyte transplants was decreased as compared with in situ development, and cells that exit proliferation cycle did not grow until day 14. The data on thymidine label dilution suggest that diploid myocytes of the transplant can divide two or three times but the majority of labeled diploids divided only once. Labeled 2c x 2 myocytes originated from the first, and less frequently, the second cell generation or resulted from initial acytokinetic mitosis. Mononucleate tetraploids 4c originated from 2c x 2 and mostly from 2c cells. Octaploids were formed after 3d or 4th labeled mitosis. The conclusion about cardiac myocyte polyploidization as an intrinsic developmental program is supported, implying the programming of onset, mode, duration and termination of polyploidization and its prolongation during early postnatal life.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

Mitochondria and ischemic reperfusion damage in the adult and in the developing brain

The developing and the adult brain respond in similar ways to ischemia, but also display clear differences. For example, the relative contributions of necrosis and apoptosis to neuronal death may be different, such that apoptotic mechanisms would be more prevalent in the developing brain. During normal development, more than half of the neurons in some brain regions are removed through apoptosis, and effectors like caspase-3 are highly upregulated in the immature brain. Mitochondria are pivotal regulators of cell death through their role in energy production and calcium homeostasis, their capacity to release apoptogenic proteins and to produce reactive oxygen species. This review will summarize some of the current studies dealing with mitochondria-related mechanisms of ischemic brain damage, with special reference to developmental aspects.     

Variants in the CNR1 and the FAAH Genes and Adiposity Traits in the Community

Pharmacologic blockade of the endocannabinoid receptor 1 leads to weight loss and an improved metabolic risk profile in overweight and obese individuals. We hypothesize that common genetic variants in the CNR1 (encoding endocannabinoid receptor 1) and FAAH genes (encoding fatty acid amide hydrolase, a key enzyme hydrolyzing endocannabinoids) are associated with adiposity traits. We genotyped 18 single‐nucleotide polymorphisms (SNPs) in the CNR1 gene and 9 SNPs in the FAAH gene in 2,415 Framingham Offspring Study participants (mean age 61 ± 10 years; 52.6% women; mean BMI 28.2 ± 5.4 kg/m²; 30.3% obese) and studied them for association with cross‐sectional and longitudinal measures of adiposity (BMI, waist circumference, change over time in BMI and waist circumference, visceral and subcutaneous adipose tissue) using linear mixed‐effect models. The selected SNPs captured 85% (r² = 0.8) of the common variation (minor allele frequency >5%) at the CNR1 locus and 96% (r² = 0.8) of the common variation at the FAAH locus (defined as the genomic segment containing the gene +20 kb upstream and +10 kb downstream). After correction for multiple testing, none of the SNPs in the CNR1 gene or in the FAAH gene displayed statistical evidence for association with BMI, waist circumference, and visceral adipose tissue or subcutaneous adipose tissue (all P > 0.18). Despite comprehensive SNP mapping across the genes and their regulatory regions in a large unselected sample, we failed to find evidence for an association of common variants in the CNR1 and FAAH genes with measures of adiposity in our community‐based sample.