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相似文献
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1.
乙醇酸氧化酶(GO)只含40 kD亚基却具有多个等电点(pI).我们曾报告GO含40 kD酸性亚基和68 kD碱性亚基,组成3种GO同工酶[1~6].后来证实,68 kD亚基由14个2 kD富苯丙氨酸的碱性短肽(BOP)和40 kD亚基组成[7].现在进一步证实,不同数量的BOP和乙醇酸氧化酶结合,组成多种GO-BOP复合体GC.这些复合体具有不同的pI、乙醇酸氧化酶活性和吸收曲线,但SDS-PAGE和免疫反应相同.在低电压和短时间的醋酸薄膜电泳中,GO和BOP不会解离,GC呈现强碱性(pI>10.0);在高电压的毛细管等电聚焦电泳(cIEF)中,GO和BOP发生不同程度解离,导致GC不聚焦,或聚焦为不同带,pI为7.4/6.8/6.2/5.3.BOP存在于各种动植物和微生物以及血纤维蛋白原中.  相似文献   

2.
乙醇酸氧化酶(EC.1.1.3.1,GO)是光呼吸中的关键酶,过去对其电泳行为和等电点的报告互不一致。Grodzinski和Col-man(1972)将菠菜、烟草等植物部分纯化的GO酶液在pH8.3的聚丙烯酰胺凝胶中电泳,活性染色后出现两条活性带,两者对FMN的依赖性有一定差异。Kerr和Groves(1975)对豌豆叶片部分纯化的GO酶液进行等电聚焦电泳,表明其pI值大于9.6.Behrends等(1982)将绿色黄瓜子叶的酶液经聚焦层析,发现GO活性分布在pH8.7附近。但Nishimura等(1983)发现在pH8.9的凝胶中南瓜子叶GO不迁移,而在pH4.5的凝胶中则出现一…  相似文献   

3.
乙醇酸氧化酶纯化方法的改进   总被引:7,自引:0,他引:7  
乙醇酸氧化酶(GO)是光呼吸的关键酶。但目前报道的GO的Mr和等电点等基本参数相差很大,重复性也不好[2,3,5~11]。本实验拟改进其纯化方法以期提高其重复性。材料与方法菠菜(Spinaciaoleracea)和菜心(Brassicacampestris)均购自市场。GO的提纯基本按文献2、3、6,只作添加FMN一项改进。具体操作如下:绿叶用100mmol·L--‘的磷酸缓冲液(pH8.0)提取粗蛋白,过滤,4000Xg离心取上清液,加10%HAC调到PH53;然后以4000Xg离心取上清液,经15%~30%(NH;)iS04分步沉淀;高GO活性的沉淀蛋白用5mmol·L‘Tris-HCI(pH…  相似文献   

4.
水势是相同温度下物系中每偏摩尔体积的水与纯自由水之间的化学势之差[‘j。即:式中:——水势;—水的化学势;。——纯自由水的化学势;——水与纯自由水的化学势差;——水的偏摩尔体积。物质B的化学势的单位是焦[耳」每摩[尔〕(J/mol).摩尔体积的单位是立方米每摩「尔」(m‘/mol),则水势的单位为:能量/体积单位,与目前所采用的水势单位帕[斯卡」(Pa)的关系为:IPa—IN/m’一IJ’/m””如按VaultHoff公式计算实验温度为25.OC,KCI的浓度c为0.lmol/L溶液的水势:gb—一c。。RT,式中:。、_物质B的浓度,…  相似文献   

5.
SOlid-phaseRadioimmunoassay(RIA)forZearalenoneCHENXin-Jian(DepartmentofAgronomy,HenanAgriculturalUniversit,Zenzhou450002)MENGFan-Jing(CollegeofBiologicalScience,BeijingAgriculturalUniversity,beijing100094)玉米赤霉烯酮(zearalenone)是玉米赤霉菌(gibbrerellazeae)的一种次生代谢产物,它不但具有动物雌性激素的作用[”j,还是某些真菌的性激素[‘’]。孟繁静等[’-’,“’‘’]发现它普遍存在于植物体内,与植物的许多生理生化过程有密切关系,是一种活跃的植物内源活性物质,参与并直接…  相似文献   

6.
奈氏试剂测定脲酶活性方法的改进   总被引:2,自引:1,他引:1  
TheImprovingonMethodforMeasuringUreaseActiVityFUHul-Hua,LIXiao-Fang,TIANTing-Liang(Denytl)wnlofBbo,CedndCboA.ffe******-[’un,sdy,if,J-to--rr430070)脲酶(urease)活性的测定方法有多种,主要有电化法[‘””‘、放化法和分光光度法。分光光度法测定服酶活性的具体方法又有多种,如豚酶分解豚产生NH/,NHt与次氯酸钠和苯酚钠溶液反应生成蓝色靛酚,再进行比色测定[’j等。Kaltwasser等[’j采用与谷氨酸脱氢酶(GIDH)相偶联的反应来进行测定,即于340urn处测定NADH的光密度减少量。…  相似文献   

7.
首先从菠菜叶片中纯化了乙醇酸氧化酶(GO)。通过鉴定反应中氧的消耗以及反应产物H2O2的生成,证实菠菜GO具有氧化光呼吸途径中间代谢物甘油酸的活性。该氧化活性依赖于辅因子FMN和FAD,而不依赖核黄素和光黄素;其最适反应pH值为8.0,Km(甘油酸)值为7.14mmol/L,kcat值为1.04s^-1,活化能为17.29kJ/mol;草酸和丙酮酸对该氧化活性有明显的抑制作用,其中前者为典型的竞争性抑制。进一步通过两底物竞争作图表明:菠菜叶片GO氧化甘油酸反应和氧化乙醇酸反应为同一活性中心所催化。  相似文献   

8.
杂交育种仍是目前甘薯(Ipomoeabatatas)育种的主要手段,而品种间不亲和性的大小和杂交结实率低是制约甘薯杂交育种效果的两个主要因素[”]。迄今已知甘薯存在着15个不同的杂交不亲和群,同群品种间杂交不结实或结实率极低(0%~5%),而异群品种间杂交给实率较高(20%~50%)[‘j。对于杂交结实率低的原因和解决途径,只有少量基干解剖学的观察[”‘’1和利用嫁接、植物生长调节剂提高结实率的报道*-”。在生理基础方面的研究则未见报道。为此我们选择甘薯高自1号X88-3这一杂交组合(结实率为13.3士l.8%),在8月份的每天…  相似文献   

9.
乙醇酸氧化酶(Go)是植物光呼吸途径中的一种关键酶,可以催化乙醇酸生产乙醛酸。从新鲜菠菜叶中提取总RNA,利用RT-PCR技术获得编码GO基因的cDNA片断。通过基因重组将GO基因克隆到载体pA0815中,构建了胞内表达载体pA0815/GO,重组质粒经电转整合至甲醇营养酵母GS115染色体。在混合碳源为10g/L山梨醇和0.5g/L甲醇的培养条件下,细胞的GO酶活达到474IU/g(DCW)。利用该重组毕赤酵母作为催化剂生产乙醛酸,结果表明:在乙醇酸浓度为0.25mol/L,重组酵母湿菌体为10dL,黄素单核苷酸(FMN)浓度为0.01mmol/L,pH8.0,20℃,反应18h后乙醛酸的产率达到51.8%。  相似文献   

10.
薄层层析和高效液相层析技术结合测定植物叶片水杨酸含量   总被引:16,自引:2,他引:14  
水杨酸(SA)是植物的一种次生代谢产物,具有多种生理调节作用[‘j。它属于酚类化合物,有一个苯环,在一定波长的紫外光激发下有一个特定的荧光发射峰。所以,利用荧光分光光度计或者高效液相层析(HPte)可以定量分析。由于植物组织中具有许多发荧光的物质,会干扰SA的测定,因此,直接利用荧光分光光度计测定植物组织中3A含量会有误差。目前,大多数实验室都用HPth测定植物组织中SA,其中除Palva等[’‘在制备样品时用C18柱纯化了样品之外,多半对样品均未预先纯化p,‘-”。从经济角度考虑,用C18往纯化样品的价格较贵,而国…  相似文献   

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