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1.
用考玛斯亮兰G—250迅速,灵敏地测定蛋白质浓度   总被引:6,自引:0,他引:6  
路阳  王贤舜 《生物学杂志》1992,(1):24-25,32
蛋白质浓度测定法是生物化学实验室最常用的方法,目前用得比较多的有双缩脲法、Folin酚法。对混有核酸的蛋白质则用260nm和280nm的紫外光吸收测定法。如果利用肽键在远紫外区(205 nm附近)的光吸收,受氨基酸组成分的影响较小,则可更精确地测定蛋白质浓度。比较这些方法的优劣时我们发现:双缩脲法灵敏度低;Folin酚法需要较多的试剂,过程比较复杂,不准确;280nm和260nm的光吸收测定法精度不高,对不含核酸的蛋白质的测定有局限性;远紫外光吸收测定精度高,但芳香族和蛋白质二级结构如α-螺旋、β  相似文献   

2.
一种快速微量蛋白测定法   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
以往报道Lowry法的呈色反应通常须30min。本文介绍一种利用人工还原剂促使该反应迅速完成的改良法。笔者对这一方法进行了实验评价,初步探讨了二硫苏糖醇还原Folin试剂所形成的吸收光谱以及选用650um波长的机理。实验结果证明本法与对照法相关良好。  相似文献   

3.
福林酚蛋白质测定法因为其测定的灵敏性,曾经一度成为应用最广泛的一种方法,但是由于其试剂的配制比较困难,因此后期逐渐被考马斯蓝法所代替,本文就用于测定透明质酸钠中作为杂质的蛋白质含量过程中,两种测定方法及其测定结果的不同之处进行分析对比。  相似文献   

4.
<正>用Coomassie兰方法快速、灵敏地测定定蛋白质浓度正成为许多生化实验室的常规方法。但是,当大量的样品要测定蛋白质时,例如,在层析柱洗脱液的常规分析中,光密度的分别测定可能耗时冗长。而且,蛋白质-染料复合物结合到比色杯,还有从反应容器转移试剂混合物都可能造成误差。 本文报导了通过在塑料微孔板中完成反应和在同一容器中完成分光光度测定,克服了这些问题。自动分光光度计结果测定需时大为减少,且从96孔板上1分钟内读出并打印出结果。  相似文献   

5.
Lowry 等人通常使用定量测定蛋白质的方法需要操作40分钟左右,并且需要三种试剂。经 Miller 改进的这种技术,测定时间缩短约20分钟。通过以下方法可以缩短测定时间:用升高温度(50℃)以缩短显色时间和改用两种试剂,即用较小体积、较浓的碱性铜试剂和较多量、较稀的酚试剂。  相似文献   

6.
酸性蛋白酶的测定方法 福林—酚试剂显色反应法的原理是:福林试剂(磷钨酸和磷钼酸的混合物),在碱性条件下极不稳定,可被酚类化合物还原,因而呈蓝色反应(钨蓝和钼蓝的混合物)。由于蛋白质分子中含有带酚基的氨基酸,利用蛋白酶分解蛋白质(底物),生成含酚基的氨基酸,与福林试剂作用,因而也呈蓝色反应。显色程度与底物在酶作用下产生的水解产物数量成正比,因此可推算出  相似文献   

7.
细胞膜蛋白质的测定在生物物理、生物化学及医学等领域的研究中起重要作用,许多细胞膜上酶、离子、脂类、基团及功能的测定均与膜蛋白的水平有关,需测定膜蛋白量。目前膜蛋白的测定大多采用酚试剂法,该法灵敏度高,但酚试剂在碱性溶液中不稳定,干扰因素多,特异性差,在有非离子型表面活性剂存在下易形成难溶性沉淀,不能用于自动分析仪器。  相似文献   

8.
天然麝香粉(Musk)经乙醚,乙醇脱脂后,再经4℃水冷渗,水提液低温旋转浓缩,冻干,得到的冻干粉先后经过Sephadex G-25,Sephadex G-50,和Sephadex G-100等柱层析,得到抗炎有效部分Mu-a,将此部分再通过DEAE-Sephadex A-25和Sephadex G-150等柱层析,得到一抗炎有效蛋白质,命名为Mu-a-1。经聚丙烯酰胺凝胶电泳及超薄等电聚焦电泳,以高碘酸-schiff试剂及Coomassie R250染色和分子筛层析,均显示一条区带和一均匀吸收峰。以蒽酮试剂法测定Mu-a-1含糖量在40%左右。经氨基酸自动分析仪测定Mu-a-1是由16种氨基酸组成,其中Glu,Asp等酸性氨基酸居多,等电点(PI=3-4),为酸性糖蛋白。最小蛋白质碎片含374个氨基酸残基。用凝胶过滤法估测其分子量在20万左右。药理实验表明Mu-a-1对巴豆油引起小鼠耳部炎症具有明显的抗炎作用,平均7.5mg/kg剂量下,对炎症抑制率为72.3%,P<0.001。  相似文献   

9.
几种微量测定蛋白质新方法的比较   总被引:5,自引:1,他引:4       下载免费PDF全文
蛋白质的微量定量测定法至今最广为使用的是Lowry改进的Folin酚法。但是Lowry法的操作较为麻烦,灵敏度有时也达不到要求,因此在最近的十年,许多研究者仍在继续寻找更为合用的新方法。我们在参考国外文献的基础上,有选择地建立了几种微量测定蛋白的新方法,并对它们的优缺点和适用范围加以比较。现将主要结果介绍如下。材料和方法一、Lowry法配制含有下列成分的混合溶液。(A)Na_2Wo_4·2H_2O 100克、NaMo_4·2H_2O 25克,加  相似文献   

10.
近几年来,在蛋白质化学研究中,分析微量化的重要方面之一是使用荧光方法。在氨基酸、多肽、蛋白质测定中,荧光胺(Fluorescamine)可与游离的氨基反应,产生荧光的物质,借此测定的灵敏度可提高达10~(-12) 克分子。荧光胺在柱层析、薄层层析中都可用来测定氨基酸和多肽;也有用作抗体荧光标记的荧光试剂。此试剂已有Hoffman-La Roche公司生产出售,由于此试剂价格昂贵,因而很多实验室都不能普遍使用。本实验室使用国内的现有试剂,参照了有关的方法尝试合成该试剂,现已初步合成。合成的试剂与进口的Hoffman-La Roche公司的产品作了比较,基本符合。并且就此试剂在溶液  相似文献   

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