牛蛙肥大细胞的组织化学与形态学

目的鉴定牛蛙组织中肥大细胞的存在。方法用于肥大细胞研究的一些常规组织化学技术与形态学方法。结果牛蛙的舌、肠、肠系膜和脾中肥大细胞数量较多,少量也见于神经、心、肾、肝和皮肤等多种组织中。肥大细胞有沿血管周和神经分布的倾向。脾脏中的肥大细胞形状比较一致,呈圆形或卵圆形,而在其它部位的肥大细胞则形态多样。Bouin氏液及Carnoy氏液是牛蛙肥大细胞优良的固定液。然而,与哺乳动物的黏膜肥大细胞相似的是,中性缓冲福尔马林(NBF)固定显著的阻断了牛蛙肠黏膜肥大细胞(MMC)的染色。有趣的是,甲苯胺蓝是牛蛙肥大细胞的最佳染料,它比阿尔新蓝能很好地显示牛蛙的肥大细胞。透射电镜下证实,牛蛙肥大细胞中含有大量特征性的胞浆颗粒。肥大细胞靠近雪旺氏细胞,并可见于神经束膜间,甚至以其突起与神经束膜相连。结论通过组织化学与形态学研究证实了牛蛙组织中肥大细胞的存在,再次证实肥大细胞与外周神经之间存在密切的解剖学关系。     

不同固定液和染色方法显示山羊子宫内肥大细胞效果的比较

目的探讨用不同固定液和染色方法对显示处于间情期山羊子宫肥大细胞的影响。方法用四种不同的固定方法,应用改良甲苯胺蓝（MTB）染色法和阿尔辛蓝-番红花红（AB-S）染色法显示处于间情期山羊子宫肥大细胞。结果山羊子宫组织采用Carnoy氏液固定,MTB和AB-S染色对所有的肥大细胞均可获得良好的染色反应,但10％中性福尔马林,4％多聚甲醛,Bouin氏液固定的组织仅有少量肥大细胞着染。结论MTB和AB-S染色法均是山羊子宫肥大细胞良好的染色方法。     

鉴定猪,牛及绵羊肥大细胞的组织化学技术

研究证实Ｃａｒｎｏｙ液和中性缓冲福尔马林溶液（ＮＢＦ）是猪、牛及绵羊肥大细胞的优良的固定液,ＮＢＦ虽能很好地保存牛和绵羊的肥大细胞,但却阻断了猪的大多数肥大细胞、特别中肠粘膜肥大细胞（ＭＭＣ）及胸腺髓质肥大细胞（ＴＭＭＣ）对碱性染料的着染力。力苯胺蓝及阿尔辛蓝均为动物肥大细胞的优良染料,但阿尔辛蓝能使更多的肥大细胞着力。甲苯胺蓝及阿尔辛蓝均为动物肥大细胞的优良染料,但阿尔辛蓝能使理多的肥大细胞着染     

肥大细胞标本的快速简易制作方法

肥大细胞是大多数脊椎动物疏松结缔组织中常见的细胞 ,常成群地沿着小血管分布。该细胞胞质内充满着粗大的嗜碱性颗粒 ,其颗粒具有水溶性 ,用碱性染料染色时呈现异染性。通常在制作肥大细胞标本时先取皮下组织或肠系膜进行铺片 ,风干后经过固定液固定 ,再用甲苯胺蓝、硫堇等染色方法显示胞质内颗粒 ,然后再经脱水 ,透明和封片等常规操作程序完成标本制作。近年来 ,笔者根据该细胞胞质内嗜碱性颗粒具有异染性和水溶性特点 ,采用以酒精为溶剂的甲苯胺蓝染色液对风干后肥大细胞铺片标本不经固定而直接染色 ,染色后只经一道酒精洗去浮液 ,风干后…     

改良的肥大细胞甲苯胺蓝染色法

目的:本研究旨在运用一种改良的甲苯胺蓝染色方法鉴定体外分离培养的肥大细胞形态,为肥大细胞研究提供简便的检测方法。方法:体外诱导分化培养小鼠骨髓来源的肥大细胞,4周后收集细胞、固定、染色。比较不同固定温度及时间对甲苯胺蓝染色效果的影响,确定最佳条件。结果:SCF和IL-3体外培养诱导出小鼠骨髓来源肥大细胞。肥大细胞用改良的甲苯胺蓝染色后细胞着色效果较好,细胞多呈圆形或椭圆形且胞膜较完整,胞浆中充满大量的紫红色颗粒。结论:本研究成功运用一种适用于体外培养小鼠骨髓源肥大细胞的甲苯胺蓝染色法,并发现肥大细胞在37℃充分固定后进行染色,可以降低肥大细胞发生脱颗粒。此操作方法稳定性好、简便,适用于体外培养的肥大细胞形态学观察。     

不同动物肥大细胞光镜的结构观察

研究不同种间肥大细胞的异同,为减轻排异反应提供了一定的理论依据。实验用甲醛固定,甲苯胺蓝染色。实验结果显示不同种的肥大细胞形态学结构不尽相同。禽类的肥大细胞与哺乳动物的相似,呈圆形、卵圆形,胞浆内含丰富的异染颗粒是其最显著的形态学特征。牛羊等的肥大细胞在低倍镜下形态多样,呈长梭形、椭圆形、不规则形,有的细胞表面可见细胞突起。     

常用实验动物不同组织部位肥大细胞异质性的组织学特点比较

目的探讨并比较六种常用实验动物不同部位肥大细胞异质性的形态学特点。方法应用麻醉后处死的方法,取小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬和猴的皮肤、肺脏、乙状结肠和脾脏组织,经4%中性缓冲甲醛溶液或Bouin’s液固定后,制作常规组织切片,分别作HE、甲苯胺蓝、阿尔新蓝-藏红和P物质免疫组织化学染色,镜下观察并应用彩色病理图像分析软件进行形态学分析;另取皮肤组织固定于磷酸缓冲戊二醛溶液,制作常规超薄切片,透射电镜下观察肥大细胞超微结构。结果六种动物不同组织中肥大细胞各有其分布特点,且在形态大小、异染性及染色特性等方面表现各异,肥大细胞密度和形态学参数差异有显著性（P〈0.05）;豚鼠、犬和猴皮肤肥大细胞颗粒具有特殊亚微结构;小鼠皮肤组织内可见P物质免疫阳性肥大细胞和神经纤维,犬脾脏内可见P物质免疫阳性肥大细胞。结论在六种实验动物的同一组织中以及同一种动物不同组织中,肥大细胞具有明显的异质性,此异质性对采用实验动物开展与肥大细胞功能相关的动物实验研究具有重要参考价值。     

尼罗罗非鱼消化道肥大细胞的组化性质

实验采用改良甲苯胺蓝(MTB)、阿利新蓝-沙黄(AB/SO)、甲基绿-派洛宁(MG-P)、天青Ⅱ-伊红-瑞氏混合液和硫堇5种组化染色法,对尼罗罗非鱼(Nile tilapia)消化道组织中的肥大细胞(Mast cell,MC)组化性质进行研究。尼罗罗非鱼的食管、胃及小肠壁内均显示有肥大细胞,在食管和胃的切片标本上肥大细胞主要分布在黏膜固有层和胃腺体之间。在肠道中的肥大细胞主要分布在黏膜固有层和肠上皮下方,少量肥大细胞存在于黏膜下层结缔组织中。细胞呈圆形、椭圆形,也有长梭形的。而且肥大细胞有沿血管分布的特点。5种组化染色结果表明:AB/SO、MTB和MG-P显示的MC效果较好,尤其AB/SO染色效果最好,肥大细胞轮廓清楚,胞质颗粒较清晰;尼罗罗非鱼肥大细胞胞浆颗粒都呈红色,即肥大细胞胞浆主要含肝素,不含组胺。天青Ⅱ-伊红-瑞氏混合液染色效果也很好,但被染的肥大细胞较少;80%乙醇硫堇染色,在尼罗罗非鱼消化道各段组织中均未能鉴定出肥大细胞。尼罗罗非鱼消化道肥大细胞大多分布于浅层的黏膜或血管、腺体周围的结缔组织等易表露于环境抗原的位点。罗非鱼消化道黏膜层结缔组织中的肥大细胞与大多数脊椎动物的肥大细胞一样,具有沿血管分布的特性,说明硬骨鱼的肥大细胞如哺乳动物肥大细胞一样与血管有着密切的关系。       

人结肠切片三种特殊染色的比较

目的比较人结肠组织切片阿利辛蓝AB染色(Alcian Blue)、过碘酸雪夫氏PAS染色(Periodic Acid Schiff)及洋红三种染色方法及镜下特点。方法取人结肠,Carnoy氏固定液固定,对结肠组织进行阿利辛蓝AB染色、PAS染色及洋红染色,光学显微镜下观察染色效果。结果三种染色都能清晰显示结肠组织的结构,尤其对结肠的粘膜层进行了观察。阿利辛蓝染色使结肠上皮吸收细胞的细胞核染为红色,杯状细胞中的黏液染为蓝紫色;洋红染色使结肠上皮吸收细胞的细胞核染为蓝紫色,杯状细胞中的黏液染为红色。结论阿利辛蓝和洋红染色均能清楚显示杯状细胞中的黏液,且染色后的细胞质和细胞核成为互补色,结构清晰,对比明显。     

从甲状腺肥大细胞探讨胎儿器官肥大细胞的差异

研究肥大细胞在人胎儿甲状腺发育中数量、分布及组化性质的改变,以探讨胎儿器官发育中肥大细胞的差异。取45例不同胎龄的人胎甲状腺石蜡切片做甲苯胺蓝染色和阿尔辛蓝－－藏红染色,并测定肥大细胞的临界电解质浓度值及进行硫酸小蘖硷荧光染色。结果显示：3月龄胎儿甲状腺内开始出现肥大细胞,数量极少,主要分布在被膜及小叶间结缔组织内,甲苯胺蓝染色肥大细胞颗粒呈淡紫蓝色,阿尔辛蓝－－藏红染色呈蓝色,临界电解质浓度值较低,硫酸小蘖硷染色未见显黄色荧乐的肥大细胞,从3月龄到足月随着胎龄增长,肥大细胞数量缓慢增多,8月龄时肥大细胞经甲苯胺蓝染色,其颗粒呈紫红色,阿尔辛蓝－－藏红染色出现少量含红色和红蓝混合染色颗粒的肥大细胞,临界电解质浓度值偏高,可见少量显黄色荧光的肥大细胞,结果表明：在人胎儿3月龄时甲状腺发育中开始出现肥大细胞,但随胎儿发育肥大细胞的组化性质改变不明显。     

间接免疫过氧化物酶技术鉴定猪和牛的肥大细胞

用小鼠抗人肥大细胞类胰蛋白酶单克隆抗体ＡＡ１,ＡＡ３及ＡＡ５的间接免疫过氧化物酶技术对经Ｃａｒｎｏｙ液或中性缓冲福尔马林固定的猪和犊牛空肠,舌及胸腺的石蜡切片进行了免疫染色。对猪和牛的肥大细胞特异性免疫染色与常规的组织化学染色的结果进行了比较。     

Effects of strong electrolytes on the iron alum-Alcian Blue-Safranin staining of mast cell granules of the rat

Summary Rat mast cells fixed in Carnoy's fluid were stained with iron alum-Alcian Blue-Safranin solution after pre-treatment with strong electrolyte solutions including acids, neutral salts and alkalis. Although both red and blue mast cells were observed without pre-treatment, most mast cells were stained blue and a few red when they were stained after the pre-treatment. Mast cell granules contain salt complexes formed between basic proteins and acidic polysaccharides through ionic linkages between protein basic groups and polysaccharide sulphate and carboxylic acid groups. It is suggested that when sections are treated with strong electrolyte solutions, complexes are broken by disruption of ionic linkages and sulphate and carboxylic acid groups of polysaccharides masked by basic proteins become available for binding Alcian Blue. This was confirmed by model experiments performed with smears of a heparin-lysozyme complex.When mast cells were fixed in aldehyde-containing fixatives, no effects of strong electrolyte solutions on the staining properties of mast cell granules were revealed.     

Comparison of histochemical staining techniques for detecting mast cells in oral lesions

ABSTRACT

Mast cells are large cells with granular cytoplasm that participate in wound healing, angiogenesis and defense against pathogens. They also contribute to inflammation by initiating innate and acquired immunity. The granules of these cells exhibit characteristic staining properties. We investigated toluidine blue, astra blue, Alcian blue-pyronin Y and May-Grunwald Giemsa stains for mast cells in various oral lesions and assessed the efficacy of each for identifying mast cells. Sections were obtained from 10 each of diagnosed cases of inflammatory fibrous hyperplasia, periapical cyst, mild dysplasia, oral submucous fibrosis and oral squamous cell carcinoma and stained using the stains listed above. Mast cells were assessed for their presence, contrast of the mast cell in the connective tissue background and number. We found that May-Grunwald Giemsa stain was the best for identification of mast cells, although toluidine blue staining is less time-consuming. Overall we obtained better results using May-Grunwald Giemsa and toluidine blue for staining mast cells.     

Histochemistry and morphology of porcine mast cells

Summary Mast cells have been described extensively in rodents and humans but not in pigs, and the objective of this study was to characterize porcine mast cells by histochemistry and electron microscopy. Carnoy's fluid proved to be a good fixative but fixation with neutral buffered formalin blocked staining of most mast cells. Alcian Blue stained more mast cells than did Toluidine Blue (pH 0.5), although Alcian Blue also stained goblet cells. In pigs, unlike rodents, the Alcian Blue method did not distinguish between mast cells in the intestinal mucosa and those in the connective tissue of the intestinal submucosa, tongue and skin. Mast cells were significantly larger in adult pigs than in piglets; in adult pigs and piglets, mast cells in the intestinal mucosa were significantly larger than those in submucosal connective tissue, and they were more varied in shape in piglets and adults. Granules in mast cells in the intestinal mucosa stained less intensely than those in mast cells in connective tissue of tongue, skin and intestinal submucosa. Mast cells in the connective tissue of the tongue, skin and intestinal submucosa fluoresced strongly when stained with berberine sulphate or with a mixture of berberine sulphate and Acridine Orange, but mast cells in the intestinal mucosa did not. All mast cells reacted positively in an enzyme-histochemical method previously used to detect human tryptase but not in a method previously used to detect human chymase. Mast cells in the medulla of thymus stained similarly to mast cells in the intestinal mucosa. Ultrastructural differences between mast cells were not detected.     

Abnormal mast cell granules in the beige (Chédiak-Higashi syndrome) mouse.

Mast cells of beige (C57BL/6J) (bg-j/bg-j) mice were examined histochemically and ultrastructurally. Mast cell granules in the beige mice were markedly enlarged and irregular in shape. Granule contents stained uniformly with acidified toluidine blue, but with ruthenium red and Alcian Blue-safranin, two components were evident. The rims of the abnormal granules stained with ruthenium red and with Alcian Blue; the centers of the granules were clear with ruthenium red and stained with safranin. Mast cell granules thus represent another abnormal organelle in the Chédiak-Higashi syndrome.     

动情周期中大鼠子宫和输卵管壁肥大细胞数量变化的研究

用放射免疫分析法对动情周期中大鼠血清雌二醇浓度进行检测;取子宫、输卵管常规石蜡切片、H－E染色,并用甲苯胺蓝染色显示肥大细胞,于光镜低倍视野下计数。结果显示：动物血清雌二醇浓度依次为：动情期（E）组＞动情前期（PE）组＞动情后期（ME）组＞动情间(DE)且,各组间差异均有显性;在子宫,肥大细胞分布于宫壁肌怪平滑肌束间的结缔组织内、近小血管处,以微血管周居多,常见单个散在,于ME子宫内膜尚偶见肥大细胞;输卵管肥大细胞局限于其外膜层内、近小血管周围,亦多散在。子宫、输卵管壁内的肥大细胞镜下呈圆形、椭圆形或略不规则形,胞浆内充满紫红色粗大颗粒,子宫肥大细胞数量依次为：ME＞DE＞PE＞E,各组间差异有生（DE与PE、PE与E,P＜0.05,余组间P＜0.01）;输卵管壁内肥大细胞数量各组间差异无显性（P＞0.05）。本尚对大鼠血清雌二醇水平波动与子宫、输卵管壁内肥大细胞数量变化的关系及其生理意义进行了讨论。     

奥尼罗非鱼胃肠道中肥大细胞的分布特征

本研究采用改良甲苯胺蓝染色法探讨了奥尼罗非鱼(Oreochromis niloticus ♀×O. aureus♂)胃肠道肥大细胞的分布及其形态特点。结果发现,经甲苯胺蓝染色的肥大细胞其核着深蓝色,颗粒被染成紫红色,着色深浅不一。肥大细胞大小不一,形态各异,呈圆形、椭圆形或梭形、菱形,散在或集中分布在黏膜层固有膜和黏膜下层,尤其常见分布于小血管周围。经统计,肥大细胞在奥尼罗非鱼的胃、幽门盲囊、后肠、前肠、中肠的数量依次减少。胃和幽门盲囊内肥大细胞数量显著高于前肠和中肠(P0.05),与后肠无显著差异;前肠、中肠和后肠内肥大细胞数量并无明显差别。