仙人掌多糖提取过程中脱蛋白方法的研究

用水提取的仙人掌多糖常含有蛋白质C,实验以多糖损失率和脱蛋白率为衡量指标,选用了Sevag法、三氯乙酸法和酶法对仙人掌多糖提取物进行脱蛋白处理。实验结果表明,酶法、三氯乙酸法和Sevag法的脱蛋白率分别为89.67%、56.20%和45.65%,多糖损失率分别为7.19%、9.49%和13.75%。因此,酶提取法是替代常规方法的一种有效方法。     

桔梗多糖脱蛋白方法的优化及对抑菌性的影响

以桔梗为实验材料,对水提后的多糖采用以下五种方法:Sevage法、盐酸法、三氯乙酸法、酶法以及酶与Sevage结合的方法进行脱蛋白处理,分别比较各种脱蛋白方法的蛋白质清除率以及多糖损失率。同时,对脱蛋白前后不同浓度的桔梗多糖的抑菌性进行比较。结果表明,五种脱蛋白方法的蛋白清除率依次为三氯乙酸法盐酸法Sevage法酶法酶+Sevage法,即98.07%92.25%60.91%51.10%39.63%;多糖的损失率依次为三氯乙酸法酶+Sevage法Sevage法酶酶法盐酸法,即8.83%10.08%11.23%11.74%22.24%;其中,三氯乙酸法蛋白质的清除率最高,多糖的损失率最小,为最适宜的脱蛋白方法。桔梗多糖脱蛋白前后对根霉、青霉、黄曲霉均有抑制效果。且随多糖浓度的增加抑菌作用逐渐加强。桔梗多糖脱蛋白前对根霉的抑制作用大于脱蛋白后的多糖。对青霉和黄曲霉的抑制作用效果则为脱蛋白后的多糖大于脱蛋白前的多糖。     

鱼腥草多糖的制备及其体外抗病毒活性研究

以不同方法制备鱼腥草多糖,探究其体外抗EV71、RSV、CV-B3三种病毒的活性。分别采用胃蛋白酶解法、胃蛋白酶解-Sevag结合pH=4、胃蛋白酶解-Sevag结合pH=7试剂法制备多糖,并检测其含量;采用CPE法考察不同提取工艺的多糖和鱼腥草水提物对EV71、RSV和CV-B3的体外抗病毒作用。鱼腥草不同冻干产物—水提物、酶法提取多糖、酶法-Sevag pH=7提取多糖、酶法-Sevag pH=4提取多糖得率分别为1.87%、1.01%、0.83%、0.88%,多糖含量分别为18.21%、22.68%、29.03%、23.07%;对EV71的治疗指数为24.05、2.73、12.59、6.39(阳性药利巴韦林的治疗指数为43.16),治疗效果为水提物≈酶法-Sevag pH=7提取多糖酶法-Sevag pH=4提取多糖酶法提取多糖;对RSV的治疗指数分别为2.46、5.43、15.57、9.72(利巴韦林为19.76),治疗效果为酶法-Sevag pH=7提取多糖酶法-Sevag pH=4提取多糖酶法提取多糖水提物,对CV-B3的治疗指数为2.81、5.34、17.86、5.98(利巴韦林为18.39),治疗效果为酶法-Sevag pH=7提取多糖酶法-Sevag pH=4提取多糖≈酶法提取多糖水提物。说明鱼腥草水提物和3种方法制备的多糖对EV71、RSV和CV-B3均具有一定的体外抗病毒活性。     

百尾参多糖脱色脱蛋白工艺及其免疫活性研究

以百尾参多糖脱色率、多糖损失率为指标,通过单因素和正交试验研究活性炭含量、时间、温度和pH对多糖脱色效果的影响,优化百尾参多糖最佳脱色条件;对Sevage法、三氯乙酸（TCA）法、蛋白质等电点法以及酶法4种脱蛋白方法进行比较,选择较好的脱蛋白方法。建立环磷酰胺免疫低下小鼠模型,研究百尾参多糖的免疫调节活性。结果表明活性炭脱色的最佳条件是活性炭加入量1%、温度60 ℃,时间45 min、pH 4.5;酶法为4种方法中较好的脱蛋白方法。百尾参多糖能加速恢复环磷酰胺致小鼠免疫器官萎缩,也能剂量依赖性地提高小鼠血清中的白介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）等细胞因子含量,表明百尾参多糖对环磷酰胺的免疫抑制具有保护作用。     

壳聚糖絮凝法精制合欢皮多糖水提液的工艺

采用壳聚糖对合欢皮总多糖的絮凝纯化工艺进行研究。通过单因素和正交试验,得到优化的工艺条件:壳聚糖用量为生药量0.8 mL/g,絮凝温度35℃,絮凝时间4 h,药液浓缩比(质量体积比)为1∶10(g/mL),在此条件下,多糖保留率、脱蛋白率和多糖纯度分别为91.23%、22.26%和47.27%,优于传统的水提醇沉法。     

千斤拔多糖的提取纯化及其结构鉴定

利用正交试验考察千斤拔多糖的提取工艺,并比较脱蛋白方法中的Sevag法和三氯乙酸法的纯化效果,总糖含量测定采用苯酚-硫酸法,蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法;采用DEAE-52纤维柱法来分离多糖,并运用HPLC色谱来分析千斤拔多糖中的单糖成分。结果表明:经正交试验得出千斤拔多糖的最佳提取条件为时间2.5 h,料液比为1∶30,温度80℃,其多糖得率为8.558%。对比两种脱蛋白的方法,Sevage法萃取3次时蛋白的脱除效果最好。经DEAE-52纤维柱来分离多糖共分得7个组分。经HPLC色谱鉴定出有葡萄糖,甘露糖和阿拉伯糖,主要单糖成分为葡萄糖。     

响应面法优化北豆根粗多糖的除蛋白工艺及其神经保护活性研究

为研究北豆根粗多糖的最佳除蛋白方法和工艺,探究北豆根粗多糖的神经保护活性。实验比较了酶法、Sevage法、酶-Sevage法、三氯乙酸(TCA)-正丁醇法、酶-TCA-正丁醇法除蛋白效果,筛选出了北豆根粗多糖的最佳除蛋白方法,并用响应面法对该方法进行优化。经响应面分析,以综合评分为指标,考查TCA与正丁醇体积比、北豆根粗多糖溶液与TCA-正丁醇溶液体积比和振摇时间对北豆根粗多糖TCA-正丁醇法除蛋白工艺的影响。用H_2O_2诱导PC12细胞损伤,探究了北豆根粗多糖的神经保护作用。结果表明,北豆根粗多糖的最佳除蛋白方法为TCA-正丁醇法。经响应面优化,确定最优除蛋白工艺为TCA:正丁醇=1∶10.4,北豆根粗多糖溶液:TCA-正丁醇溶液=1∶1.77,振摇时间为36.5 min。采用该工艺对北豆根多糖进行除蛋白,其蛋白清除率为73.1%,综合评分为92.1。神经保护研究结果表明,北豆根粗多糖对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。本研究表明TCA-正丁醇法可以有效的除去北豆根粗多糖中的蛋白质且北豆根粗多糖具有神经保护活性。     

贵州野生甜藤多糖的提取与脱蛋白方法研究

以贵州野生甜藤干粉为原料,通过单因素试验,再通过正交试验优化甜藤多糖提取工艺,并采用Sevag法、TCA法、Sevag-TCA法、HCl O4法进行脱蛋白方法研究。结果表明,甜藤多糖最优提取工艺为:以水为溶剂,料液比1∶50,超声功率70 W,水浴温度70℃,超声提取时间110 min,提取2次;HCl O4法脱蛋白效果最佳,经3次脱蛋白处理后蛋白脱出率为94.78%,多糖损失率为15.14%,该法用于脱除甜藤植物多糖中的蛋白质,工艺简单,成本低,具有一定应用价值。     

黄鳝骨硫酸软骨素提取纯化的初步研究

在稀碱-酶解提取基础上,辅以超声波破碎从黄鳝（Monopterus albus）骨中提取硫酸软骨素（Chondroitin Sulfate,CHS）。比较了三氯乙酸（TCA）法、Sevag法和等电点法除蛋白的效果,并进行了多糖的乙醇分级沉淀实验;粗品经离子交换树脂（CM22）和透析膜（3500Da）透析进一步分离纯化。研究结果表明酶解后用TCA法除蛋白效果好,再加入除蛋白液2倍体积95％乙醇可使大部分CHS沉淀析出;精制品经鉴定含有硫酸基,CHS含量达92．31％;琼脂糖凝胶电泳和红外吸收光谱结果显示精制品与标准CHS相似,初步确定提取物为CHS类多糖。     

塔拉种子多糖脱蛋白的正交优化及其抗氧化性研究

以塔拉（Caesalpinia spinosa）种子为原料,研究了塔拉种子多糖的脱蛋白工艺及塔拉多糖的抗氧化性质。以多糖损失率和蛋白脱除率为评价指标,比较Sevage法、三氯乙酸法和木瓜蛋白酶法对塔拉多糖的脱蛋白效果。利用正交优化组合实验设计原理,采用四因素三水平的正交分析法,对木瓜蛋白酶法脱蛋白进行正交优化。结果表明：塔拉多糖最佳脱蛋白工艺条件为酶添加量0.15mL、酶解时间90min、酶解温度60℃、酶解pH=6,蛋白脱除率95.19%,多糖保留率75.02%。通过对塔拉多糖抗氧化性的研究,发现塔拉多糖总抗氧化性较好,对DPPH自由基有较强的清除作用。     

Determination of stoichiometry of radioiodination of proteins

A sensitive method for the detection of small quantities of hydrophobic antioxidant free radical scavengers such as butylatedhydroxytoluene (BHT) and butylatedhydroxyanisole (BHA) in aqueous samples is described. The procedure involves extraction of the hydrophobic free radical scavenger into an organic solvent phase, followed by the subsequent reaction of an aliquot of this extract with the stable cation radical tris(p-bromophenyl)amminium hexachloroantimonate (TBACA). In experiments with BHT and BHA, the loss of TBACA absorbance at 730 nm was found to be linearly proportional to the amount of antioxidant added, with quantities of BHT as small as 200 pmol being easily detectable. In aqueous suspensions of dimyristoylphosphatidylcholine vesicles, assays of the aqueous BHT concentration showed that BHT partitioned strongly into the membrane phase, achieving very high BHT/phospholipid ratios. For a given concentration of BHT, partitioning into the membrane phase was greater in large, multilamellar liposomes than in either small, single-walled vesicles or in purified rat brain synaptic vesicle membranes. Direct assay of BHT and BHA in phospholipid membranes, however, was complicated by a nonspecific interaction between TBACA and the phospholipid.