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相似文献
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1.
外源基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达   总被引:1,自引:1,他引:0  
随着杆状病毒载体和筛选方法的不断改进,通过Bac-to-Bac方法可以使杆状病毒最大重组率达到100%,缩短了构建重组载体的时间,极大提高了工作效率。另外,研究者开发了一些新的宿主域扩大的昆虫杆状病毒载体,能够在家蚕或蛹内进行高水平表达重组蛋白。昆虫杆状病毒表达系统具有完备的翻译后加工修饰功能和高效表达外源蛋白的能力等特点,是一种非常理想的真核表达系统。利用该表达系统现已成功表达了约千种外源蛋白。以重组杆状病毒为载体的昆虫表达系统、外源基因在该表达系统中的表达情况及在农业领域中的应用进行了介绍。  相似文献   

2.
昆虫杆状病毒表达系统的研究进展与应用   总被引:1,自引:0,他引:1  
昆虫杆状病毒表达载体系统具有安全性好、重组蛋白表达量高、能同时表达多个基因、重组蛋白翻译后加工完整等特点,因而得到了广泛的应用。随着重组杆状病毒构建技术的不断发展,昆虫杆状病毒表达载体系统的操作在逐渐简化,重组杆状病毒获得的效率也在不断提高。昆虫细胞培养技术的改进和转基因昆虫细胞系的发展,进一步推动了昆虫杆状病毒表达载体系统在商品化药物、治疗性抗体、生物农药研发和基因治疗中的应用。尽管仍存在着重组蛋白降解的问题,但随着分子生物学技术的发展,对杆状病毒载体的研究与改造也会更加深入,未来昆虫杆状病毒表达载体系统的应用将更为广泛。  相似文献   

3.
重组昆虫杆状病毒构建和筛选技术进展   总被引:4,自引:0,他引:4       下载免费PDF全文
曹翠平  吴小锋 《昆虫学报》2004,47(6):837-843
昆虫杆状病毒作为高效的真核表达载体,现已广泛应用于各种外源目的基因的表达。但由于重组病毒产生的比例很低(通常只有0.1%~1%),成为制约该系统应用的技术瓶颈。本文概括了近年来发展的重组病毒的构建和筛选方法,主要介绍了杆状病毒的线性化技术和利用大肠杆菌-昆虫细胞穿梭载体构建并筛选重组杆状病毒的技术进展。  相似文献   

4.
将编码鸡的白细胞介素 1 8(chickeninterleukine 1 8,ChIL 1 8)成熟蛋白的基因亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacB上 ,构建真核转移载体pMelBacBChIL 1 8,经限制性内切酶消化、ChIL 1 8特异引物PCR鉴定和确证性序列测定 ,证明目的基因正确克隆到载体的预期位点。将纯化的pMelBacBChIL 1 8质粒与杆状病毒DNA(Bac N BlueTM DNA)共转染sf9昆虫细胞 ,经四轮蓝斑筛选纯化 ,获得了重组杆状病毒 ,命名为rBaculovirusChIL 1 8。提取病毒染色体DNA ,经ChIL 1 8特异引物和重组杆状病毒特异引物PCR鉴定 ,证明获得了纯化的重组杆状病毒。用该重组病毒接种sf9昆虫细胞 ,收获接种后不同时间的细胞进行SDS PAGE电泳。结果表明ChIL 1 8基因在昆虫细胞中获得了表达 ,表达的重组蛋白分子量约为 2 3kDa。应用在大肠杆菌原核表达系统中表达的重组蛋白制备的兔抗ChIL 1 8多克隆抗体进行Westernblot分析 ,表明本研究真核系统表达的ChIL 1 8成熟蛋白和前期原核系统表达的ChIL 1 8成熟蛋白均具有生物学活性。  相似文献   

5.
杆状病毒表达系统是以杆状病毒为外源基因载体,昆虫细胞或活体昆虫为受体的真核表达系统。相对于其他表达系统,杆状病毒表达系统具有特殊的优势:杆状病毒基因组作为表达载体可以容纳更多外源基因;杆状病毒极晚期启动子能有效调控外源蛋白的表达;昆虫细胞作为受体能够对外源蛋白进行加工修饰;杆状病毒通常只感染节肢动物,不会对人畜构成危害。因此,该系统越来越受到人们的重视,并已应用于亚单位疫苗的研发与生产,特别其对于构建病毒样颗粒,即由一种或多种病毒结构蛋白自行装配而成且不含病毒基因组的蛋白颗粒,具有不可比拟的优势。对此做详细评述并展望病毒样颗粒疫苗的发展趋势。  相似文献   

6.
用Bac-to-Bac系统,构建了包含极晚期基因ph启动子驱动的带有全长苏云金芽胞杆菌cry1Ac10基因和完整多角体基因的重组质粒pFCP,用该重组质粒感染昆虫Sf9细胞,得到了带有多角体和能够表达cry1Ac10基因的重组杆状病毒vFcph,并在昆虫细胞中表达了Cry1Ac10蛋白。同时构建了含cry1Ac10的穿梭载体.pHTC,并分别转化大肠杆菌、枯草杆菌和苏云金杆菌晶体缺陷型菌株,结果表明此三种工程菌均表达了分子量为133.3kDa的原毒素蛋白,其中在苏云金芽胞杆菌中的表达量最高。生物测定表明重组杆状病毒vFcph的表达产物具有杀虫活性,能增加杆状病毒力,加快杆状病毒杀虫速度,说明利用杆状病毒极晚期基因启动子驱动苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白表达,从而改善杆状病毒的杀虫特性是可行的。  相似文献   

7.
将汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与核蛋白(NP)部分片段以不同方式拼 接,构建G1S0.7或S0.7G1嵌合基因,分别插入杆状病毒表达载体pFBD,转化DH10Bac致敏菌, 获得含有嵌合基因的重组穿梭质粒Bacmid,用其转染Sf9细胞,快速筛选出含有G1S0.7或S0.7 G1嵌合 基因的重组杆状病毒,在昆虫细胞中表达外源融合蛋白.利用间接免疫荧光、ELISA和免疫 印迹对表达产物进行检测.结果表明,含G1S0.7嵌合基因之重组杆状病毒可在昆虫细胞中表 达出融合蛋白,该蛋白可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1特异性单抗所识别,其分子量约97 kD;含S0.7G1嵌合基因之重组杆状病毒在昆虫细胞中表达的融合蛋白,只能被抗汉滩病毒核 蛋白特异性单抗所识别,其分子量约43kD.上述结果提示,G1S0.7嵌合基因可能在昆虫细胞 中表达出完整的具有生物学活性的融合蛋白,S0.7G1嵌和基因的昆虫细胞表达产物不完整 ,且生物学活性不如G1S0.7嵌合基因的表达产物.  相似文献   

8.
本文介绍了杆状病毒载体在昆虫细胞中表达外源基因的基本策略和发展趋势。杆状病毒载体系统近年来已被人们广泛用来表达人类、动物和植物等的一些重要蛋白质分子,在医学、农业等领域的基因工程研究中发挥了越来越大的作用。杆状病毒载体系统表达外源基因的效率高,表达产物的结构和活性与天然产物一致,为当今基因工程研究中最有发展前途的病毒载体表达系统。  相似文献   

9.
杆状病毒(Baculovirus)是一种以昆虫为唯一宿主的病毒, 可用做生物杀虫剂或作为表达载体在昆虫细胞中大量表达外源蛋白, 制备疫苗。研究发现, 在哺乳动物细胞中携带哺乳动物启动子的重组杆状病毒能启动下游外源基因的表达但病毒不能在哺乳动物细胞中增值, 对细胞毒性小, 转导成功的细胞可以稳定传代并有效表达外源基因, 哺乳动物细胞比昆虫细胞对蛋白质具有更好的翻译后修饰, 表达出的蛋白结构更接近天然蛋白。因此, 杆状病毒可作为一种新型的哺乳动物细胞基因转移载体, 用于表达外源基因及作为一种基因治疗载体, 具有巨大潜力, 日益受到人们的关注。本文对杆状病毒作为一种表达载体在哺乳动物细胞中表达的研究进展进行了综述。  相似文献   

10.
罗雯  徐志凯等 《Virologica Sinica》2002,17(3):226-229,F003
将汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与核蛋白 (NP)部分片段以不同方式拼接 ,构建G1S0 .7或S0 .7G1嵌合基因 ,分别插入杆状病毒表达载体 pFBD ,转化DH10Bac致敏菌 ,获得含有嵌合基因的重组穿梭质粒Bacmid ,用其转染Sf9细胞 ,快速筛选出含有G1S0 .7或S0 .7G1嵌合基因的重组杆状病毒 ,在昆虫细胞中表达外源融合蛋白。利用间接免疫荧光、ELISA和免疫印迹对表达产物进行检测。结果表明 ,含G1S0 .7嵌合基因之重组杆状病毒可在昆虫细胞中表达出融合蛋白 ,该蛋白可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1特异性单抗所识别 ,其分子量约 97kD ;含S0 .7G1嵌合基因之重组杆状病毒在昆虫细胞中表达的融合蛋白 ,只能被抗汉滩病毒核蛋白特异性单抗所识别 ,其分子量约 4 3kD。上述结果提示 ,G1S0 .7嵌合基因可能在昆虫细胞中表达出完整的具有生物学活性的融合蛋白 ,S0 .7G1嵌和基因的昆虫细胞表达产物不完整 ,且生物学活性不如G1S0 .7嵌合基因的表达产物  相似文献   

11.
形成多角体的杆状病毒载体系统的建立   总被引:19,自引:0,他引:19  
王xun章  苏德明 《病毒学报》1991,7(3):253-261
  相似文献   

12.
13.
The paper describes the first overt attempt to establish an insect cell line (Spodoptera frugiperda), persistently infected with its homologous baculovirus. The persistently infected cells were morphologically different and grew to a higher density than the noninfected parent line. The parent line, however, had a shorter doubling time. Persistently infected cells were passaged 40 times over 10 months; they still continued to produce infectious virus and polyhedral inclusion bodies. However, the infectious viral titer was ca. 100 times lower in the persistently infected line than in the parent line; also, the number of inclusion bodies was reduced ca. 98%. Interference with both homologous and heterologous baculoviruses was demonstrated in the persistently infected cell line. Sevently percent of the persistently infected cells contained antigens for S. frugiperda nuclear polyhedrosis virus, ca. 1% of the cells showed infectious viral centers, and ca. 3% of the cells contained inclusion bodies. Although the inclusion bodies from the persistently infected cells were infectious for S. frugiperda larvae, they were about 3 times less infectious than the inclusion bodies produced in the parent line.  相似文献   

14.
以含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pSK100-DS、含切割对虾杆状病毒基因的核酶Rz1的质粒pRGRzl、含核酶Rz2的质粒pRGRz2和转基因空质粒pcDNA3为基础,把绿色荧光蛋白GFP基因克隆于pcDNA3的SV40启动了下面,由SV40启动子控制,含四个两种核酸基因的四联体克隆于pcDNA3的多克隆位点区,由T7启动子控制,构建成含两个Rz1、两个Rz2和GFP基因的转基因质粒pGTR,以用于转基因抗病毒对虾的研究。  相似文献   

15.
A six-step sequence of selection of the granulosis virus of Laspeyresia pomonella led to a strain with increased resistance to sunlight. Each step consisted of irradiation of dry deposits of the virus on apples with near range ultraviolet light, infection of freshly eclosed codling moth larvae with the irradiated virus, and propagation of the virus thus produced in large fifth-instar larvae. Compared with the original virus, the new strain was 5.6 times more resistant to artificial ultraviolet irradiation in the laboratory and remained twice as long infective in the field.  相似文献   

16.
杆状病毒双基因表达载体转移质粒的构建   总被引:1,自引:0,他引:1  
苏德明 《病毒学报》1992,8(3):283-286
  相似文献   

17.
杆状病毒p35蛋白抗凋亡作用及机理   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
杆状病毒入侵可以诱导昆虫细胞凋亡,作为对抗宿主防御体系的一种策略,病毒自身编码具有抗细胞凋亡活性的蛋白,如p35蛋白和IAP。杆状病毒p35蛋白是一种广泛有效的凋亡抑制因子,能在哺乳纲、昆虫纲和线虫纲中抑制细胞凋亡作用,推测其与细胞凋亡途径上保守的成分Caspase起作用。研究表明,p35蛋白正是通过蛋白酶间的相互作用和p35蛋白的剪切而起作用的。就最近几年在p35蛋白抗凋亡作用机理方面的研究作一综述 。  相似文献   

18.
Mouse c-Abl type IV and human BCR/ABL proteins have been expressed in insect cells using the baculovirus system. The proteins were expressed as full-length polypeptides as judged by electrophoresis in denaturing gels. They were identified by immunoprecipitation and immunoblotting with antibodies against ABL peptides and, for BCR/ABL, against a BCR peptide. In these immunoprecipitates both proteins gave autophosphorylation principally on tyrosine. Both proteins were active tyrosine kinases, phosphorylating a variety of tyrosine-containing substrates. In fresh extracts both proteins contained phosphotyrosine as shown by Western blots with antiphosphotyrosine antibodies. Partial purification could be achieved readily using ion exchange columns, and the BCR/ABL protein, p210BCR/ABL, could be further purified to near-homogeneity using an antiphosphotyrosine column. Both enzymes required a divalent metal ion for activity. At low concentrations of ATP (2 μM) and with angiotensin II as substrate both enzymes were activated by Mn2+ or by Mg2+. No major differences in catalytic properties were found between the two isolated enzymes in solution. The oncogenic properties of p210BCR/ABL may be due to its different subcellular location, or to the presence of an intracellular inhibitor of c-Abl that does not inhibit BCR/ABL, or to altered substrate-specificity such that it can phosphorylate a unique substrate which is not recognised by c-Abl.  相似文献   

19.
Insect parasitoids and baculoviruses play important roles in the natural and strategic biological control of insects. The two parasites are frequent competitors within common hosts and much research has focused on the negative impact that baculoviral host infections have on parasitoids. This review summarizes the impacts that parasitoids may have on the virulence and spread of lepidopteran baculoviruses. By changing host behavior and development, parasitoids have been shown to decrease baculovirus virulence and productivity within parasitized baculovirus-susceptible hosts; however, studies of the tools used by hymenopteran parasitoids to overcome their hosts' immune systems, suggest that parasitoids may, in some cases, facilitate baculoviral infections in less susceptible hosts. Laboratory and field research have demonstrated that parasitoids can mechanically transmit bacuioviruses between insects, and in this way, increase the efficacy of the viruses. Instances of new, more virulent isolates of baculoviruses have been recorded from specifically parasitoid-targeted hosts suggesting other possible benefits from the transmission or activation of baculoviruses by parasitoids.  相似文献   

20.
杆状病毒表面展示系统是近几年发展起来的一种新的真核展示系统 ,通过在病毒衣壳蛋白gp6 4插入外源肽、二者融合表达或与特异性的锚定部位结合 ,在病毒表面进行融合表达而筛选出目的活性肽或蛋白。可用来展示需糖基化、二硫键异构化等翻译后修饰才表现功能活性的复杂真核蛋白及构建多肽文库、抗体库等。本文简述了该技术的原理、研究进展、应用及发展前景等。可以预见 ,杆状病毒表面展示技术的发展必将对生命科学及相关领域的发展产生深远的影响  相似文献   

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