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相似文献
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1.
用红霉素、头孢唑啉钠、头孢拉定、头孢霉素(国产和进口)等5种抗生素对农杆菌LBA4404进行抑菌试验,以头孢霉素的抑菌效果最好.头孢霉素作为抑菌剂用于大豆遗传转化试验时,在下胚轴浓度以300mg/L,在子叶节以500mg/L为宜.大豆品种对卡那霉素的反应在出愈率上表现相似,在褐化率上表现有些不同.大豆不同外植体对卡那霉素的反应存在较大差异,以真叶反应最敏感,下胚轴反应最迟钝.在以卡那霉素作为抗性选择标记时,选择压力真叶和子叶节以50~100mg,L为好,下胚轴以100~200mg/L为宜。 Ahstract:The experiment of inhibiting Agrobacterium LBA4404 was undertaken with 5 antibiotics (the Erythronycin Base,Cefazolin Sodium,Cefradine,2 kinds of Cefotaximes).Among them,Cefotaxime showed the best effect.When Cefotaxime is used in transformation,the ideal concentration is 300mg/L in hypocotyl and 500mg/L in cotyledon node.The response of soybean varieties to Kanamycin is similar in induction of callus rate and is different in brown rate of callus.Differences of the response of soybean explants to Kanamycin were found.The young leaves are sensitive to Kanamycin,but hypoeotyl is not.The ideal selecting pressure of Kanamycin is 50- l00mg/L in young leaf and cotyledon node,andl00-200mg/L in hypocotyl when Kanamycin is used as selection marker.  相似文献   

2.
以强德勒红心柚(Citrus grandis Osbeckcv. Chandler)种子萌发的无菌苗为材料,选取子叶、子叶节段、上胚轴、带芽的茎段进行离体培养研究。结果表明:子叶节段是诱导丛生芽的最佳外植体,诱导率100%;诱导丛生芽的最佳培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.4g/L,丛生芽增殖可达11.2倍;最适生根培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L,生根率达100%,移栽15d后成活率100%。  相似文献   

3.
贺红  韩美丽  李耿光 《广西植物》2002,22(3):256-258
用红江橙实生苗的上胚轴为材料 ,初步研究以根癌农杆菌介导的 GUS基因转化。结果表明 :以卡那霉素作为选择试剂进行选择培养时 ,Km浓度为 5 0 mg/L;外植体以平放为好 ;抑菌剂选择头孢霉素较好。GUS基因瞬时表达检测 ,70 .4%的外植体呈阳性反应 ;GUS基因稳定表达检测 ,在获得的 1 2株抗性植株中 ,GUS反应呈阳性所占比例为 1 6.7%。  相似文献   

4.
探讨了紫苏(Perilla frutescens)不同外植体在不同激素的不同浓度及组合培养基中的培养及再生情况,建立了紫苏的高效快捷再生体系。结果表明:(1)再生率由高到低依次是茎尖、真叶、子叶和下胚轴;(2)茎尖无论有无激素处理,再生率都在85%以上,添加合适的激素可提高增殖系数。真叶在MS+TDZ 0.05 mg/L~0.1 mg/L范围处理下再生率均达70%左右。子叶最适激素组合为MS+KT 1.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L,再生率22.22%。下胚轴最适激素组合为MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L,再生率14.61%;(3)再生苗在1/2 MS中生根良好,生根率达86.67%,平均根长7.36 cm;(4)真叶外植体可形成叶簇,并可反复诱导不定芽发生,增殖能力强,培养周期短,是最理想的外植体。  相似文献   

5.
影响农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化的因素   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用携带pCAMBIA1301质粒(含hpt和gus基因)的超毒根癌农杆菌菌株EHA105对大豆子叶节外植体进行遗传转化,研究了影响农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化的因素。研究结果表明.农杆菌侵染液和共培养培养基中添加200μmok/L乙酰丁香酮和50mg/L抗坏血酸可以有效促进农杆菌对大豆子叶节的转化。农杆菌与子叶节共培养后羧苄青霉素(250mr/L)和头孢霉素(100mg/L)结合使用能有效抑制农杆菌过度繁殖并提高转化芽诱导频率;在转化细胞的分化和转化芽伸长过程中,改进的筛选策略可以明显改善对转化芽的筛选效果,从而提高转化频率。应用优化后的转化体系.获得了3个国内大豆主栽品种的转基因植株,PCR阳性植株频率为3.8%~7.6%。转化植株叶片总DNA的PCR和Southern blot实验表明,T-DNA上的外源基因已经整合到大豆基因组中。  相似文献   

6.
以播娘蒿(Descurainia sophia)下胚轴为外植体,研究影响其分化的若干因素。结果表明:用附加2,4-D的培养基,对下胚轴切段预培养5d可提高分化频率;1.7mg/L AgNO3对分化出芽有很大促进作用,最佳激素组合为2.0mg/L 6-BA 0.2mg/L NAA;黄化苗的下胚轴比绿苗的下胚轴对激素反应更敏感,最高分化频率可达86.05%。再生芽转至1/2MS 0.5mg/L NAA 0.5mg/L IBA的培养基中,生根率100%。  相似文献   

7.
荞麦组织培养及高频植株再生体系的建立   总被引:5,自引:0,他引:5  
通过对荞麦(Fagopyrum esculentum Moench)不同外植体、不同激素配比的比较研究,建立了荞麦离体培养高效植株再生体系。荞麦子叶切段在含2.0 mg/L 2,4-D和1.0 mg/L 6-BA的MS培养基上愈伤组织诱导率为89.6%,而下胚轴切段在含2.0 mg/L 2,4-D和1.0-2.0 mg/L 6-BA MS培养基上愈伤组织诱导率高达100%。在2.0 mg/L 6-BA、0.1 mg,L IAA和1 mg/L KT的MS培养基上通过愈伤组织间接分化或外植体直接分化形成不定芽。来自子叶和下胚轴的愈伤组织的分化率分别为42.5%和73.6%,下胚轴的分化率明显高于子叶。将生长状态良好的不定芽转至含1.0 mg/L IBA和0.5mg/L NAA的1/2 MS培养基上生根,生根率达到100%。再生植株移栽到盆土中,成活率达91.6%,并且生长状态和特征均表现正常。  相似文献   

8.
根癌土壤杆菌介导转化诸葛菜子叶获得转基因植株   总被引:12,自引:0,他引:12       下载免费PDF全文
采用诸葛菜子叶为材料。在MS+BA 3mg/l,+NAA O.2mg/L培养基上诱导芽的再生,1/2 MS+IBA 0.03mg/L.上诱导生根,获得完整再生植株,建立了诸葛莱组织培养高频再生系统,其再生率可达100%。采用土壤杆菌介导转化诸葛菜子叶.在附加一定量的氨苄青霉索、头孢霉素和卡那霉素的相应培养基上进行筛选,进而培养出再生成苗。获得完整植株,经GUS和NPTI酶活测定,以及Southern blot分析.证实为转基因植株。转化子叶的芽再生率为51%.获得完整转基因植株的转化率为5.53%。在国内外首次建立了以根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)为载体,诸葛菜子叶为受体的遗传操作系统。  相似文献   

9.
以甘蓝型油菜野油19号的下胚轴和带柄子叶为外植体,研究其下胚轴和带柄子叶在不同浓度激素配比下的分化率及再生频率的变化。该品系的油菜下胚轴和带柄子叶在1.5 mg/L的2,4-D中预培养4 d后,转入分化培养基中,其愈伤组织形成早,发生快,再生频率和分化频率均较高。其中,下胚轴转入MS+3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中的分化率和再生频率最高,再生频率达到86.67%;带柄子叶外植体的再生频率要比下胚轴的再生频率低,在MS+4 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA的分化培养基中芽的再生频率为46.67%。本研究初步建立了甘蓝型油菜野油19号的高频率再生体系。  相似文献   

10.
胡杨遗传转化体系的建立及抗生素浓度的优化   总被引:2,自引:0,他引:2  
探讨了不同激素浓度对胡杨叶片分化以及卡那霉素、G418、羧苄青霉素和头孢霉素4种抗生素对胡杨不同培养阶段外植体生长、分化或生根的影响,确定了由农杆菌介导的胡杨遗传转化研究中抗生素种类和转化体的筛选浓度,建立了适于胡杨叶片转化的遗传转化体系。结果表明:胡杨叶片再生的最佳培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA0.1~0.2mg/L+白砂糖25g/L+琼脂5g/L;在叶片转化筛选阶段,卡那霉素和G418的适宜浓度分别为10mg/L和7.5mg/L,羧苄青霉素和头孢霉素的适宜浓度为200~600mg/L和200~400mg/L;在抗性芽生根培养时,卡那霉素和G418分别为15~20mg/L和10~15mg/L,羧苄青霉素和头孢霉素为200~800mg/L和200~600mg/L。  相似文献   

11.
Effects of kanamycin on tissue culture and somatic embryogenesis in cotton   总被引:5,自引:0,他引:5  
The aminoglycoside antibiotic kanamycin was evaluated for its effects on callus initiation from hypocotyl and cotyledon explants, proliferation of non-embryogenic and embryogenic calli, initiation and development of somatic embryos in cotton (Gossypium hirsutum L.). On this basis, the potential use of kanamycin as a selective agent in genetic transformation with the neomycin phosphotransferase II gene as the selective marker gene was evaluated. Cotton cotyledon and hypocotyl explants, and embryogenic calluses were highly sensitive to kanamycin. Kanamycin at 10 mg/L or higher concentrations reduced callus formation, with complete inhibition at 60 mg/L. Kanamycin inhibited embryogenic callus growth and proliferation, as well as the initiation and development of cotton somatic embryos. The sensitivity of embryogenic callus and somatic embryos to kanamycin was different during the initiation and development stages. Kanamycin was considered as a suitable selective agent for transformed callus formation and growth of non-embryogenic callus. Forty to sixty mg/L was the optimal kanamycin concentration for the induction and proliferation of transformed callus. The concentration of kanamycin must be increased (from 50 to 200 mg/L) for the selection of transformation embryogenic callus and somatic embryos. A scheme for selection of transgenic cotton plants when kanamycin is used as the selection agent is discussed.  相似文献   

12.
Suspension cultures of soybean were initiated from hypocotyl or cotyledon callus tissue of several soybean genotypes. When these were grown on L2 medium with 0.4 mg/liter 2,4-D several genotypes produced numerous embryoids while others produced only a few such structures. Due to internal anatomy, no embryoid developed into a complete plant. A genotype's propensity to form normal appearing embryoids was correlated with the ability to proliferate shoots at the cotyledonary node on a medium with benzylaminopurine as determined in previous testing.Abbreviations 2,4-D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid - BAP Benzylaminopurine - L2 Phillips and Collins (1979) legume medium  相似文献   

13.
黄芩愈伤组织诱导条件的研究   总被引:22,自引:1,他引:21  
为寻求诱导黄芩愈伤组织的最佳培养条件和激素配比,以黄芩的子叶、真叶和下胚轴为外植体,利用不同激素组合的MS培养基分别在黑暗和光照条件下诱导愈伤组织。结果表明:①在黑暗条件下各激素处理的愈伤组织诱导率和愈伤组织增重均高于光照条件下,而褐化率低于各处理,并且诱导出的愈伤组织较光照下松散,适合于细胞培养;②M6培养基其褐化率为0,诱导率高达100%,愈伤组织增重2.22g,明显优于其它激素配比,是黄芩愈伤组织诱导的最佳激素配比;③各种激素配比处理下,黄芩真叶愈伤组织的愈伤组织增重明显高于子叶和下胚轴。而褐化率却明显低于它们,因此真叶是黄芩诱导愈伤组织的最佳外植体。  相似文献   

14.
Abstract

Callus production, shoot formation via organogenesis and rooting of the regenerated shoots are reported in an Egyptian variety of Pisum sativum L. Calli were initiated from hypocotyl, leaf, root and mature embryo explants when cultured on MS medium containing B5 vitamins and supplemented with 2 mg/l 2,4-D+1 mg/l kin. Among the different types of explants, hypocotyl showed best potential for callus proliferation. Hypocotyl, leaf and immature cotyledon explants were used for shoot organogenesis. The best results of shoot formation were achieved when hypocotyl explants were cultured on MS-medium supplemented with 2 mg/l BA+1 mg/l NAA. However, immature cotyledon explants showed the highest frequency of shoot formation with 1 mg/l BA. Data of in vitro rooting showed that maximum root frequency occurred on culture medium containing half strength of MS salts, 40 g/l sucrose and 2 mg/l NAA.  相似文献   

15.
不同生长调节剂对马蹄金愈伤组织诱导的影响   总被引:6,自引:2,他引:4  
马蹄金是一种优良的地被兼观赏草坪植物。采用正交设计试验法 ,研究了四种不同生长调节剂对马蹄金子叶、叶片、叶柄和下胚轴愈伤组织诱导的影响。结果表明 :生长调节剂是诱导愈伤组织的关键 ,2 ,4 D对愈伤组织诱导具有显著的影响 ,适宜于马蹄金愈伤组织诱导的培养基及生长调节剂为MS +1 .0mg/L 2 ,4 D +0 .2mg/L 6 BA +0 .2mg/LKT +1 .0mg/Lα NAA。  相似文献   

16.
以杂景天的子叶、胚轴为外植体,接种在附加不同激素组合的MS培养基上诱导愈伤组织产生,愈伤组织经继代培养后,用高效液相色谱检测红景天苷含量.结果显示,杂景天的子叶是诱导愈伤组织的理想外植体,子叶在MS 1 mg/L BA 0.5 mg/L 2,4-D和MS 1 mg/L BA 0.5 mg/L NAA培养基上的愈伤组织诱导率较高(81.8%、80%).愈伤组织有红、绿2种类型.HPLC检测显示红色愈伤组织不含红景天苷,绿色愈伤组织红景天苷含量为0.288 6%.表明利用组织培养生产红景天苷是可行的.  相似文献   

17.
ABA诱导毛酸浆下胚轴体细胞胚状结构的直接发生   总被引:3,自引:0,他引:3  
研究了ABA与2,4-D等植物激素对毛酸浆组织培养的影响。其中,以浓度为1.0mg/L的2,4-D对毛酸浆下胚轴愈伤组织诱导结果最好。在子叶、子叶柄、下胚轴以及胚根四者当中,下胚轴对2,4-D的反应状况最好。结合ABA与2,4-D在MS培养基上能够有效地诱导出高质量的球形胚状结构。经过4周的培养,在2.0mg/L2,4-D和1.0mg/L ABA组合的情况下,球形胚状结构的诱导频率可达96.7%,每块外植体平均能产生6.7个球形胚状结构。球形胚状结构可以至少在5代以内反复发生。进一步讨论了ABA对毛酸浆体细胞胚发生的影响以及体细胞胚发生与环境胁迫的可能关系。  相似文献   

18.
以徐长卿子叶为材料,进行愈伤组织诱导、愈伤组织和不定芽分化、试管苗生根、移栽及移植等研究。结果表明,MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.2mg/L+2,4-D0.4mg/L是子叶愈伤组织诱导和继代培养的理想培养基;MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L是愈伤组织分化培养的理想培养基;MS+6-BA0.6mg/L+NAA0.2mg/L是不定芽分化继代培养的理想培养基;炉灰渣是试管苗移栽的理想基质,移栽成活率可达97%。试管苗移植后长势旺盛,根系发达,当年开花。根据本试验结果可建立徐长卿子叶诱导再生体系。  相似文献   

19.
番茄离体培养过程中器官发生的细胞组织学观察   总被引:9,自引:0,他引:9  
对番茄下胚轴、子叶、茎段、叶片、叶柄不同类型外植体离体培养中有关细胞启动、分裂、分化以及器官发生作了细胞组织学观察。研究结果表明番茄不同类型外植体在同样的培养条件下,愈伤组织生长表现出明显差异,其中下胚轴、子叶诱导产生愈伤组织时,细胞启动最早,生长最快,其分裂方式基本为无丝分裂,未见有丝分裂,因此我们认为以不定芽方式获得转基因植株时,植株的所有性状变化,是否纯属目的基因所为,应该反复考察,不能忽视不定芽产生过程中的种种变化;下胚轴诱导愈伤组织形成时,细胞不规则的无丝分裂少于子叶,故下胚轴离体培养得到的正常芽的比例高于子叶的;番茄离体培养中不定芽通常发生在愈伤组织的周边区,也可起源于维管组织结节周围的形成层状细胞。不定根则由茎中柱鞘处发生。  相似文献   

20.
箭叶秋葵[ Abelmoschus sagittifolius(Kurz.) Merr.]又名红花马宁、铜皮、五指山参、小红芙蓉、岩酸,系锦葵科(Malvaceae)秋葵属(Abelmoschus Medic.)多年生亚灌木状草本;其根既可食用又可入药,具有滋养强壮之功效,可用于治疗神经衰弱、头晕、腰腿痛、胃痛及腹泻等[1].  相似文献   

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