L——天门冬酰胺酶的可溶性表达研究

来源于大肠杆菌的Ｌ－天门冬酰胺酶是临床化疗的常用药,其毒副作用影响了其更为广泛的临床应用。利用蛋白质工程技术对其进行体外分子改造,获得副作用较小的突变体是克服其毒作用的有效途径。为此,克隆了Ｌ－天门冬酰胺酰的前导信号肽,成熟肽编码序列,以及其释译、转录终止序列,置于一设计合成的中等强度β内酰胺酶启动子调控之下,在大肠杆菌中获得可溶性表达;表达产物可分泌至细菌周质中,并具有催化Ｌ－天门冬酰胺解离为天     

Nampt在卵巢癌中的研究进展

尼克酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)是新近发现的一种主要由内脏脂肪细胞分泌的脂肪因子,结构复杂,存在基因多态性,具有多种生理功能:通过与胰岛素受体相互作用,在不同的情况下Nampt可表现出类胰岛素样作用;在细胞质中,能够催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的生物合成;作为分泌型的细胞因子,Nampt还可以诱导多种炎性因子的表达。最近发现,Nampt在卵巢癌中高表达,其与卵巢癌的发生发展可能有密切联系,它的发现为研究卵巢癌的发病机制增加了新内容,可能为卵巢癌的治疗提供一个新的靶点。     

楝酰胺类化合物的抗肿瘤活性探究进展

楝酰胺类化合物存在于楝属植物中,因其独特的化学结构而具有杀虫、抗炎及抗癌的活性.目前研究发现,楝酰胺类化合物对多种癌症如肺癌、肾癌、胰腺癌、恶性外周神经鞘瘤等都具有独特的细胞凋亡作用,而对正常细胞无毒害作用.楝酰胺类化合物抗肿瘤的机制主要有:抑制癌细胞翻译起始、调控细胞周期、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制细胞增殖、降低药物细胞毒性等.因此,楝酰胺及其衍生物作为潜在抗癌药物也有极大的应用前景,成为近年来的研究热点.本综述总结了楝属植物中的次生代谢产物-楝酰胺类化合物的发现过程、结构特征和抗癌活性,重点阐述了其在癌症中的作用机制.以期为楝酰胺类化合物的进一步研究和开发利用提供理论依据和研究思路,并对楝酰胺类化合物的应用前景进行了展望.     

E.ColiA.S1.588生产L—天门冬酰胺酶发酵工艺的研究

Ｅ·ＣｏｌｉＡ·Ｓ１．５８８生产Ｌ－天门冬酰胺酶发酵工艺的研究陈丽媛,金守满,刘薇,陆春左,元福实（辽宁省微生物研究所,朝阳１２２０００）Ｌ一天门冬酰胺酶（ＥＣ３．５．１．１）即Ｌ一天门冬酰胺酰胺基水解酶,专一催化Ｌ一天门冬酰胺水解形成Ｌ一天门冬氨酸...     

人脑及红细胞膜乙酰胆碱酯酶的芳基酰胺酶活性

采用联合亲和层析法从人小脑及红细胞膜中纯化了ＡＣｈＥ,纯化的人脑及红细胞ＡＣｈＥ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈一主带,分子量约为６６０００。人脑ＡＣｈＥ制备酯酶与酰胺酶比活性分别为１２９９与１４３Ｕ／ｍｇ,人红细胞ＡＣｈＥ制备分别为４５８４与７４７Ｕ／ｍｇ。人脑及红细胞ＡＣｈＥ制备的酯酶与酰胺酶活性最适ｐＨ较接近,在ｐＨ７．５－８．０之间,酯酶活性底物ＡＴＣｈ对其芳基酰胺酶活性有抑制作用。ＩＣ_（５０）分别为１０．２×１０~（－３）及３×１０~（－３）ｍｏｌ／Ｌ。梭曼对其酯酶及酰胺酶活性均有明显抑制作用,说明二者均需活性中心丝氨酸参与。     

酰胺生物降解机制的分子模拟研究

为探索酰胺生物降解酶的微观降解机制,用分子对接的方法模拟了酰胺与酰胺酶的相互作用,得到其复合物结构的理论模型,根据打分函数最低原则筛选出的RhAmidase与L-Methioninamide之间最佳构象打分函数为-86.741 9,二次打分函数为-76.022 4。同时,应用LPC/CSU Server研究了最佳构象的相互作用情况,结果表明,酰胺与酰胺酶之间以疏水作用数量最多,酰胺酶的ARG256 A、LEU353 A、TYR346 A、ARG225 A、THR218 A和PRO222 A在催化过程中起到了重要作用。     

大鼠α-酰胺酶在变铅青链霉菌中的克隆及表达研究

α－酰胺酶（α－ａｍｉｄａｓｅ,α－ＡＥ）催化神经和内分泌系统中活性多肽的Ｃ－端酰胺化,多多肽的生物活性至关重要。以大鼠心房组织的总ＲＮＡ为模板,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增获得编码α－酰胺酶的ｃＤＮＡ,并进行了克隆和测序。为了使α－酰胺酶能在链霉菌中分泌表达,将其ｃＤＮＡ与链霉菌酷氮酶酶（ｍｅｌＣ１）信号的编码序列融合得到融合ｍｅｌ／ＡＥ,将ｍｅｌ／ＡＥ插入链霉菌质粒ｐＩＪ６８０,获得重组质粒ｐＩＪ     

人脑及红细胞膜乙酰胆碱酯酶的芳基酰胺酶活性

采用联合亲和层析法从人小脑及红细胞膜中纯化了ＡＣｈＥ,纯化的人脑及红细胞ＡＣｈＥ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈一主带,分子量约为６６０００。人脑ＡＣｈＥ制备酯酶与酰胺酶比活性分别为１２９９与１４３Ｕ／ｍｇ,人红细胞ＡＣｈＥ制备分别为４５８４与７４７？ｍｇ。人脑及红细胞ＡＣｈＥ制备的酯酶与酰胺酶活性最适ｐＨ较接近,在ｐＨ７．５＝８．０之间,酯酶活性底有抑制作用。ＩＣ５０１０．２×１０＾－３及３×１０＾－３ｍ     

真养产碱杆菌112R4的二羧酸单酰胺酰胺水解酶

在一株具有环酰亚胺转化活性的真养产碱杆菌112R4中发现了一种特异性的二羧酸单酰胺酰胺水解酶（半酰胺酶）,它催化环酰亚胺代谢的第二步反应,将二羧酸单酰胺水解为二羧酸和氨。该酶的底物仅限于此代谢途径的第一个酶——酰亚胺酶的产物二羧酸单酰胺,而对其它的酰胺类化合物没有明显水解活性。真养产碱杆菌112R4中的半酰胺酶和酰亚胺酶在表达上具有相关性,环酰亚胺（如琥珀酰亚胺）和二羧酸单酰胺（如琥珀酰胺酸）对它们有正调控作用,游离氨离子显示出负调控作用,琥珀酸则在酶合成和活性两方面均表现出影响作用。对重组大肠杆菌中表达的半酰胺酶粗酶的部分性质进行了研究。钴离子对半酰胺酶的活性表现出促进作用,比活力提高到3.37倍,表明半酰胺酶可能是一种金属结合酶。     

诺卡氏菌酰胺酶基因的分子克隆及在大肠杆菌中表达的初步研究

酰胺酶是一种重要的工业酶。利用生物信息学手段,在和已知酰胺酶基因序列分析比对的基础上,首次从Ncordiasp.YS-2002中成功地克隆得到酰胺酶基因ami,并对其基因序列及氨基酸序列的性质进行了分析。结果表明,所得酰胺酶基因ami片段大小共为1446bp,由启动子区、阅读框和回文结构终止区三部分构成。序列分析和进化树分析表明,Ncordiasp.YS-2002酰胺酶是一种比较特殊的酰胺酶,不含大多数酰胺酶共同具有的保守区序列。进一步将酰胺酶基因连接到pET-28a( )上,转入大肠杆菌BL21(DE3)中筛选获得重组菌株PEAB。酶活测定结果表明重组菌具有酰胺酶酶活,但较低,其原因可能是因为大量表达的产物主要以包涵体的形式存在。