人体肝癌及其相关慢性肝病的肝细胞DNA含量定量分析

利用图像分析技术对轻度慢性活动性肝炎（ＭＣＡＨ）、重度慢性活动性肝炎（ＳＣＡＨ）、小结节肝硬变（ＭＩＮＣ）、大结节肝硬变（ＭＡＮＣ）、癌周肝硬变（ＰＣ）和肝细胞癌（ＨＣＣ）及正常对照共６７例样本的肝细胞或癌细胞ＤＮＡ含量进行测定分析。结果（１）ＭＣＡＨ、ＳＣＡＨ和ＭＡＮＣ多倍体化受抑制,显示细胞分化能力下降,可能与肝癌的发生相关;（２）ＨＣＣ均为异倍体肿瘤,细胞具有较高的增殖能力并处于较低的分化状态;（３）ＰＣ倍体分布和双核细胞率介于其他非癌病变和ＨＣＣ之间,细胞分化受抑制且有向异倍体发展趋势,具有癌前病变性质;（４）ＭＩＮＣ明显多倍体化,为分化性的再生修复病变而与肝癌发生无关。因此肝细胞ＤＮＡ含量的定量分析对于了解肝细胞的增生状态,以及患者的预后评估有重要意义。     

肺癌细胞学亚型巴氏染色的计算机图像色度学定量分析

用计算机图像处理技术,对痰涂片中巴氏染色的角化性鳞癌细胞（ＫＳＣＣ）、非角化性鳞癌细胞（ＮＫＳＣＣ）和腺癌细胞（ＡＣＣ）胞浆进行了色度学定量分析。测试参数为红（Ｒ）、绿（Ｇ）、蓝（Ｂ）三基包含量和Ｒ、Ｇ、Ｂ的三色系数,同时还测算了胞浆的色度、饱和度、亮度和灰度,并进行了逐步判别分析。结果表明：ＫＳＣＣ的Ｒ、Ｇ、Ｂ及其三色系数、色度、饱和度与ＮＫＳＣＣ和ＡＣＣ相比差异非常显著;三基色的改变较灰度敏感．用三色系数、色度、饱和度对ＫＳＣＣ与ＮＫＳＣＣ、ＫＳＣＣ与ＡＣＣ进行计算机判别,准确度可达９５．３％和９７．１％。这些结果提示：三基色、三色系数及色度、饱和度分析对判别ＫＳＣＣ与ＮＫＳＣＣ、ＫＳＣＣ与ＡＣＣ有重要价值。对有关问题进行了讨论。     

细胞间对话与肝细胞癌进展

恶性增殖的肝癌细胞可以通过多种方式感知机体信号,以利于肿瘤自身的增殖、侵袭和转移等。细胞间对话(Crosstalk)是肝癌细胞感知机体信号的重要途径之一。在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)组织中,HCC细胞可以与肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)、肿瘤相关巨噬细胞(tumour-associated macrophages, TAMs)和免疫细胞等Crosstalk,进而调控肿瘤的增殖、侵袭和转移等过程。Crosstalk具有多种方式,每种方式具有不同的功能特点,其分子机制主要包括表达CD24、CD47等特异性受体,调控免疫细胞功能;分泌转化生长因子-β (transforming growth factor-β, TGF-β)、血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor, PDGF)等细胞因子,调控细胞功能;激活Wnt/β-catenin、Hedgehog通路,调控细胞生长、增殖等。深入理解Crosstalk的作用和机制,有助于揭示HCC的发病机制,并为开发新的治疗策略提供思路和靶点。本文综述Crosstalk与HCC进展的关系,为进一步研究提供参考和启示。     

肿瘤核仁形成区形态定量诊断的误差及规范化分析

本文采用包括自动图象分析技术在内的ＡｇＮＯＲ形态定量学方法,以大肠肿瘤为模型,进行了ＡｇＮＯＲ定量形态学研究的误差分析,以探讨肿瘤ＡｇＮＯＲ定量诊断规范化的可能。结果表明,染色条件、视场目标选择和细胞计数量是引起ＡｇＮＯＲ定量诊断的主要误差;恒定染色环境,正确选择欲测细胞及测定足够量的细胞是使ＡｇＮＯＲ形态定量诊断规范化的途径。     

肝细胞癌中肿瘤相关巨噬细胞代谢与T细胞耗竭

肝癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一,其病死率在各类恶性肿瘤中位居第2,其中肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最主要的组织学亚型。肝癌的肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)具有独特性,其显著特征之一是肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)在TME浸润的免疫细胞中占据主导地位。大量研究表明,免疫细胞代谢表型与功能密切相关。本文重点探讨了TAMs能量代谢途径的改变及其对T细胞功能的影响,并深入分析了鞘磷脂代谢在其中的调控机制。系统解析巨噬细胞鞘磷脂代谢改变对免疫抑制微环境的影响将为TAMs作为肝癌治疗潜在靶点提供了新的理论依据。     

形态测量对肝细胞肝癌分级的研究

应用自行设计组装的ＭＩＰＳ－Ｉ型多功能图像分析仪对６０例不同级的肝细胞肝癌细胞核形态学以及ＤＮＡ含量的９个参数进行了测定。经多元判别分析建立判别方程,发现９个参数都有判别能力。对判别方程贡献最大的四个参数依次为核面积、核平均光密度＞５Ｃ细胞百分数和核周长。回代符合率为９５％。     

肝细胞癌的微环境研究进展

越来越多的研究表明,肿瘤细胞与其周围微环境的交互作用是肿瘤发生、上皮间质转化、肿瘤浸润和转移的关键调节因素．肝细胞癌的微环境可以分为细胞组分和非细胞组分．主要的细胞组分包含：肝星形细胞、肿瘤相关的纤维母细胞、免疫细胞和肝窦内皮细胞等．非细胞组分包含：胞外基质蛋白、酶类、各种生长因子和炎症因子等．综述了近年来肝细胞癌的微环境研究进展,分别从细胞组分和非细胞组分及其之间的相互作用角度对肝细胞癌微环境作一介绍．     

肝细胞癌相关差异基因的生物信息学及预后分析

肝细胞癌是全球癌症相关死亡的主要原因,目前对肝细胞癌的发病机制研究尚不完善,探索肝细胞癌发生、发展相关的分子标志物及其预后具有重要意义。从GEO数据库获得肝细胞癌组织和非癌组织的基因表达阵列数据GSE84402,利用GEO2R筛选差异表达基因;采用DAVID数据库对差异基因进行GO富集分析和KEGG通路分析;通过STRING数据库和Cytoscape软件构建差异表达基因对应的蛋白质相互作用网络,并从网络中筛选出核心基因(hub genes);结合KM plotter数据库的临床信息对hub genes进行预后分析。结果显示:共得到1 307个差异表达基因,其中上调基因741个,下调基因566个,这些差异表达基因主要涉及细胞分裂、细胞周期、DNA复制及物质代谢等生物学过程及生物通路。通过GO、KEGG及蛋白质相互作用网络筛选出BUB1、BUB1B、CCNA2、CCNB1、CCNB2、CDC20、CDK1、MAD2L1、PLK1等9个hub genes,进一步分析发现hub genes均与细胞周期的调控相关,表明细胞周期的调控失常在肝细胞癌的发生、发展过程中具有重要作用。生存分析显示9个hub genes在肝细胞癌患者中均为表达上调的基因,且与患者预后不良相关,这为寻找肝细胞癌患者预后相关生物标志物的研究提供了线索。     

角结膜缘上皮良、恶性病变细胞核DNA原位图像定量分析

应用真彩色医学图像分析技术,对５１例角结膜缘上皮良、恶性病变（其中上皮增生１９例,不典型增生６例,原位癌１４例,鳞状细胞癌１２例）进行了ＤＮＡ原位定量分析研究．结果显示：原位癌和鳞状细胞癌ＤＮＡ含量明显增加,多为高倍异倍体细胞,ＤＮＡ直方圆明显右移,峰值主要位于＞５Ｃ处,≥５Ｃ细胞分别占７８．８９％和７８．３１％;上度增生病变ＤＮＡ含量较低,多为低倍整倍体细胞,ＤＮＡ直方图峰值位于２Ｃ～４Ｃ处,２Ｃ～４Ｃ细胞占８８．５９％;上皮不典型增生病变ＤＮＡ含量介于良性病变和癌之间,ＤＮＡ直方图逐渐右移,２Ｃ～４Ｃ细胞占５８．６２％,≥５Ｃ细胞占４１．３８％。以上数据经统计学处理各组间有显著性差异。表明ＤＮＡ倍性程度与肿瘤的增殖程度呈正相关,高倍异倍体细胞随肿瘤恶性程度的增高而增多。作者认为ＤＮＡ原位图像定量分析可为角结膜缘上皮良、恶性病变的诊断、分级及早期发现癌变趋势提供一个可靠的参考指标。     

乙型肝炎肝硬化患者血脂变化的临床意义

目的探讨乙型肝炎肝硬化患者血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)及极低密度脂蛋白(VLDL-C)的临床意义。方法回顾性分析浙江大学医学院附属第一医院120例乙型肝炎肝硬化患者临床资料,同时选用我院30例健康体检者临床资料为正常对照。结果与正常体检者相比,乙型肝硬化患者血脂水平明显降低(P0.05),TC、TG、HDL-C、LDL-C水平与白蛋白、胆碱酯酶水平正相关(P0.01),TC、TG、LDL-C水平与凝血酶原时间、MELD分级负相关(P0.01)。结论乙型肝硬化患者血脂水平明显降低,血脂水平与乙肝肝硬化患者肝功能损害明显相关。     

肝硬变中丙型肝炎病毒C33c抗原及HBxAg的分布及意义

应用抗ＨＣＶＣ３３ｃ抗原２Ｂ６株单克隆抗体和抗ＨＢｘＡｇ多克隆抗体。以ＡＢＣ法对８６例肝硬变组织进行ＨＣＶ及ＨＢＶ相关抗原定位研究,ＨＣＶＣ３３ｃ抗原及ＨＢｘＡｇ在肝硬变中的阳性率分别为７６．７％及６２．８％,Ｃ３３ｃ抗原和ＨＢｘＡｇ阳性占所检病例８８．４％,二者同时阳性为５１．２％,ＨＣＶＣ３３ｃ抗原位于肝硬变组织的肝细胞胞桨内,充满整个胞桨,细胞核及胸膜未见阳性;阳性细胞呈弥温、局灶及散在分布     

乙型肝炎、肝硬变中一种小多角细胞的观察

我们曾在２６例肝硬变标本中发现一种小多角细胞－－肝小多角细胞（ＳＰＬＣ）,但其性质和来源仍不清。本研究在２６０例乙型肝炎、肝硬变组织中对ＳＰＬＣ的有无及其增生程度进行了观察,结果表明,急性肝炎中无ＳＰＬＣ,３７％的慢性迁延性肝炎、６４％的慢性活动性肝炎及６７％的肝硬变标本中均能见到ＳＰＬＣ,而且其数目随慢性肝脏病变的进展而逐渐增加。应用多种抗体进行的免疫组织化学染色表明,它们全为细胞角蛋白（ＣＫ）１８阳性,显示其上皮性质;界板附近的ＳＰＬＣ呈ＣＫ１９和Ｓ－１００蛋白阳性,提示它们具有增生胆小管上皮的某些表型;部分ＳＰＬＣＨＢｓＡＧ阳性,提示它们又有肝细胞的某些特点;多数ＳＰＬＣ表达胰岛素样生长因子（ＩＧＦⅡ）—一种癌胚性强致裂原,表明它们是一种幼稚细胞。我们认为,ＳＰＬＣ是一类兼有增生胆小管上皮和肝细胞性质的新型肝脏细胞,具有干细胞的性质,可能是上皮性于细胞向成熟肝细胞分化过程中的中间形态,其增生反映了非界板性肝细胞的大量损失。     

Adenovirus-mediated gene transfer of interferon alpha inhibits hepatitis C virus replication in hepatocytes

Recently we reported that on-site interferon (IFN)-alpha production in the liver using an adenovirus vector can achieve a substantial confinement of IFN-alpha in the target organ and can improve liver fibrosis in a rat liver cirrhosis model. However, the major therapeutic effect of IFN for hepatitis C virus (HCV)-associated liver diseases is its antiviral effect on HCV. As a prelude to the in vivo HCV infection experiment using a primate animal model, here we examined the antiviral effect of IFN-alpha gene transfer into HCV-positive hepatocytes in vitro. The non-neoplastic human hepatocyte cell line PH5CH8 was inoculated with HCV-positive serum. Successful in vitro HCV replication and thus the validity of this model was confirmed by a strong selection for HCV variants determined by sequence analysis of the hypervariable region and an increase of HCV RNA estimated by real time TaqMan RT-PCR. One day after the inoculation of HCV, PH5CH8 cells were infected with adenoviral vectors encoding human IFN-alpha cDNA. HCV completely disappeared 9 days after the adenoviral infection, which is linked to the increase of 2('),5(')-oligoadenylate synthetase activity, suggesting that IFN-alpha produced by gene transfer effectively inhibits HCV replication in hepatocytes. This study supports the development of IFN-alpha gene therapy for HCV-associated liver diseases.     

血小板输注治疗肝硬化的临床疗效观察

目的:观察血小板灌注治疗对肝硬化患者肝功能的影响。方法:选择10名有血小板减少(血小板计数在50,000至100,000/μl)表现的肝硬化患者(Child-Pugh分级分别为A级或者B级),每周给予10个单位血小板输注治疗,疗程共12周,在给予最后一次治疗后坚持随访9个月。在血小板输注治疗结束后1周、1个月、3个月以及9个月时,应用腹部超声检测腹水、CT观察肝脏肿瘤及肝脏体积并检测患者的肝功能指标,如血清白蛋白、血清胆碱酯酶、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素以及凝血酶原激活时间。结果:2名患者由于皮肤瘙痒中断血小板输注治疗,2名患者治疗后随访丢失,最后共6名患者的数据纳入研究。在接受完最后一次血小板输注治疗后,6名患者的血小板计数无显著提高。最后一次血小板输注治疗后1个月和3个月复查时,患者的血清白蛋白水平显著升高。治疗后1周,3个月以及9个月时,患者血清胆碱酯酶在均显著增加。结论:尽管血小板输注治疗对一部分患者存在不良反应,但其可显著提高肝硬化患者的一些肝功能指标,可以作为临床治疗肝硬化的新方法深入研究。     

Serum heat shock protein 27 levels in patients with hepatocellular carcinoma

Levels of serum heat shock protein 27 (sHsp27) have been studied in numerous cancer types, but their potential relevance in patients with hepatocellular carcinoma (HCC) is undetermined. Our aim was to compare sHsp27 levels in patients with HCC and HCC-free controls. Specifically, we recruited 71 patients with HCC (80 % with early tumour), 80 patients with chronic liver disease (59 with liver cirrhosis and 21 with chronic active hepatitis) and 42 healthy subjects. sHsp27 was measured by immunoenzymatic assay. Results showed that sHsp27 levels were significantly (p < 0.001) higher in patients with HCC than in the other groups, particularly in those with hepatitis C virus (HCV)-related disease. In HCC patients, sHsp27 levels were not associated with prognostic risk factors, such as size/multiplicity of nodules and stage. In logistic regression analysis, performed in patients with liver disease, log-sHsp27 was associated with a significant age-adjusted 2.5-fold increased odds ratio of HCC and with a significant 4.4-fold higher odds ratio of HCC in the subgroup with HCV-related liver disease. In receiver operating characteristic curve analysis, sensitivity and specificity of the best sHsp27 cut-off value (456.5 pg/ml) for differentiating patients with HCC from those with HCC-free chronic liver disease were 70 and 73 %, respectively. In conclusion, sHsp27 levels are enhanced in patients with HCC and may represent a candidate biomarker of HCC.     

蛋白激酶底物p36在肝硬变、肝细胞肝癌中的表达及与HBV、HCV感染的关系

本文应用鼠抗蛋白激酶底物ｐ３６单克隆抗体,采用免疫组织化学法对ｐ３６在５４例肝硬变,７９例肝细胞肝癌中的表达分布进行了研究,同时结合ＨＢＶ、ＨＣＶ感染情况分析其相互关系,结果显示：ｐ３６在肝硬变及肝细胞肝癌中定位于肝细胞或癌细胞胞浆内,在胞浆内弥漫分布,阳性细胞呈灶状或弥漫分布,部分病例癌周肝细胞信号较癌组织为强,ｐ３６在肝硬变、肝细胞癌中的阳性率分别为８８．８％（４８／５４）及８２．３（６５／７９）,ＨＢｘＡｇ在两种组织的阳性率分别为７０．４％及７６％,ＨＣＶ核心抗原在两种组织的阳性率分别为８０％及７８．５％;三者同时阳性分别为５５．５％及５８．２％;ｐ３６、ＨＢｘＡｇ同时阳性分别为６８．５％及６４．５％;ｐ３６、核心抗原同时阳性分别为７４．１％及７０．８％,我们的结果提示,肝硬变、肝细胞肝癌组织中ｐ３６存在高表达,其高表达可能与ＨＢＶ、ＨＣＶ感染密切相关     

原位杂交检测石蜡包埋组织中丙型肝炎病毒RNA

为了提高ＨＣＶＲＮＡ的原位杂交检出率,我们应用地高辛标记ＨＣＶ５＇非编码区ｃＤＮＡ作探针,采用原位分子杂交法对９６Ｎ肝硬变,１０２例肝细胞肝癌进行了ＨＣＶＲＮＡ检测,并结合不同年份标本中ＨＣＶＲＮＡ的检出率,探讨ＨＣＶＲＮＡ在肝脏的分布及其丢失问题．结果显示ＨＣＶＲＮＡ定位于肝细胞和肝癌细胞胞浆内,肝脏其它细胞未见明确阳性杂交信号。ＨＣＶＲＮＡ杂交阳性细胞呈灶状和弥漫分布,正常对照、替代、空白对照为阴性,在不同年份肝硬变及肝细胞肝癌中两两比较表明新近包埋蜡块组织较陈旧蜡块组织ＨＣＶ　ＲＮＡ检出率明显高。本文结果证实ＨＣＶＲＮＡ存在于肝细胞和癌细胞的胞浆内,未见肝内其它细胞阳性,还发现ＨＣＶＲＮＡ在肝硬变、肝细胞癌中的检出率随保存时间的延长,其阳性检出率明显降低,表明ＨＣＶＲＮＡ在蜡块中存在明显的降解,应尽可能选用近期标本、为临床分析ＨＣＶ感染,ＨＣＶ与肝硬变、肝细胞肝癌的关系提供更客观的数据。     

HBV基因型、基本核心启动子区双突变和肝细胞癌发生及临床病理特征的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因型、基本核心启动子(BCP)区双突变(简称BCP双突变)和肝硬化(LC)、肝细胞癌(HCC)发生的关联,分析BCP双突变和HCC临床病理特征的关系。方法随机收集233例慢性HBV感染者的血清,其中80例为慢性乙型肝炎(CHB)患者、75例为LC患者、78例为HCC患者,并系统整理患者的常规检查和病理等资料。采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测BCP双突,用特异性引物多重PCR扩增确定HBV基因型。用SPSS 11.0分析结果。结果 HBV基因型结果均为B和C型,分别在CHB和LC组,CHB和HCC组间分布差异有统计学意义(P<0.05),在LC和HCC组间分布差异无统计学意义(P>0.05),感染C基因型与LC和HCC发生相关(分别OR=2.73,95%CI=1.29～5.82;OR=2.00,95%CI=0.98～4.09)。BCP双突变也分别在CHB和LC组,CHB和HCC组间分布差异有统计学意义(P<0.05),在LC和HCC组间分布差异无统计学意义(P>0.05),双突变与LC和HCC发生相关(分别OR=1.91,95%CI=0.96～3.82;OR=2.05,95%CI=1.04～4.06)。BCP双突变和伴肝硬化的HCC相关(P<0.05)。结论感染HBV C基因型、BCP双突变可能均是LC和HCC发生的危险因素,BCP双突变可作为LC和HCC早期预警生物标记物。