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1.
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昆虫对转Bt杀虫蛋白基因植物的抗性及其对策
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王世贵 叶恭银 胡萃《生物技术》,2000年第10卷第5期
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1 引言苏云金杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ简称Ｂｔ)是目前世界上产量最大、应用最为成功的微生物杀虫剂 ,除了已筛选出多种Ｂｔ菌株直接发酵培养外 ,还培育出转基因工程菌及转基因植物 ,使Ｂｔ的使用范围大为扩大。Ｂｔ在形成芽孢时产生的伴孢晶体是Ｂｔ杀虫活性的主要来源 ,它可能由几种晶体蛋白即δ -内毒素组成 ,包括Ｃｒｙ和Ｃｙｔ两大类。一般认为 ,δ -内毒素的作用过程要经溶解、酶解活化、与受体结合、插入和孔洞或离子通道形成等五个环节[1] ,涉及到多种毒素和作用位点 ,单一因素的改变对其敏感性影响不大 …
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2.
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白与DNA分子的相互作用 被引次数：2
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夏立秋 孙运军 莫湘涛 丁学知《微生物学报》,2003年第43卷第1期
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苏云金芽孢杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,简称Ｂｔ)在形成芽孢的同时能够产生伴孢晶体 ,其中含有一种或几种杀虫晶体蛋白 (ＩＣＰｓ,ＩｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌＣｒｙｓｔａｌＰｒｏｔｅｉｎｓ) ,即δ 内毒素[1] 。伴孢晶体进入敏感昆虫的消化道后发生溶解并释放出 2 7～ 1 40ｋＤ的原毒素。在中肠蛋白酶的作用下 ,原毒素被激活为 2 3～ 70ｋＤ的毒性多肽[2～ 4 ] 。随后毒素与中肠刷状缘膜泡 (ＢＢＭＶ ,ＢｒｕｓｈＢｏｒｄｅｒＭｅｍｂｒａｎｅＶｅｓｉｃｌｅ)上的特异受体发生结合并且在细胞膜上形成孔道 ,破坏细胞…
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3.
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白超量表达的机制 被引次数：4
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邵宗泽 喻子牛《生命科学》,2000年第12卷第4期
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杀虫晶体蛋白是苏云金芽孢杆菌主要杀虫成分，进一步提高杀虫晶体蛋白的表达量是苏云金芽杆菌高效工程菌构建的主要途径。本文讨论了ｃｒｙ基因启动子活性、ｍＲＮＡ稳定性、不同ｃｒｙ基因间的协同表达发及伴了孢晶体的形成等几个方面在转录水平或转录后水平上对杀虫晶体蛋白表达的影响。
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4.
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昆虫对转Bt杀虫蛋白基因植物的抗性及其对策
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王世贵 叶恭银 胡萃《生物技术》,2000年第10卷第5期
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1 引言 苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis 简称Bt)是目前世界上产量最大、应用最为成功的微生物杀虫剂,除了已筛选出多种Bt菌株直接发酵培养外,还培育出转基因工程菌及转基因植物,使Bt的使用范围大为扩大. Bt在形成芽孢时产生的伴孢晶体是Bt杀虫活性的主要来源,它可能由几种晶体蛋白即δ-内毒素组成,包括Cry和Cyt两大类.一般认为,δ-内毒素的作用过程要经溶解、酶解活化、与受体结合、插入和孔洞或离子通道形成等五个环节[1],涉及到多种毒素和作用位点,单一因素的改变对其敏感性影响不大,自50年代到80年代初Bt应用的30多年里,均未有昆虫对之产生抗性的报道,以至于一些研究者曾过分乐观地认为昆虫对Bt 不会产生抗性.进入80年代后,情况发生了急剧变化,相继发现五带淡色库蚊(Culex qu inquefasciatusg)、印度谷螟(Plodia interpunctella)等多种昆虫对Bt产生了抗体[2],同时在田间也发现世界性蔬菜害虫小菜蛾(Plutella xylostella) 对Bt产生了抗生[3-4],世界各国相继开展了昆虫对Bt产生抗性的条件和机制的研究,以期在昆虫还未普遍对Bt产生抗性之前,制定出相应的防治策略,这对于Bt制剂,尤其是转Bt工程菌和转Bt植物的推广使用,具有十分重要的意义.
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5.
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苏云金杆菌7216菌株的摇瓶发酵试验 被引次数：3
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金玉来《工业微生物》,1994年第24卷第3期
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用苏云金杆菌发酵生产的杀虫剂是一种不污染环境,对人畜无毒,能有效防治鳞翅目农林害虫的细菌农药,目前已有14个血清型、19个以上的变种,其产毒部分主要是δ-内毒素即伴孢晶体和芽孢。作为蔬菜无公害生产的技术措施,我国应用杀虫菌剂综合防治蔬菜害虫取得了较大进展,其中细菌农药的发酵即应用苏云金杆菌7216、HD-1等优良菌株,为使其工艺控制符合发酵生产的要求,达到菌数多、毒力高、周期短、成本低等综合指标,我们对7216进行了摇瓶发酵试验,研究不同培养条件下的呼吸作用、生长繁殖、营养利用及伴孢晶体和芽孢的形成,为工业发酵生产提供科学依据。
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6.
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苏云金芽孢杆菌Cry1Ac杀虫晶体蛋白及其分子设计
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刘卓明 谢柳 叶大维《基因组学与应用生物学》,2009年第28卷第2期
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cry1Ac编码的杀虫晶体蛋白是苏云金芽孢杆菌(Bt)产生的多种杀虫晶体蛋白中对鳞翅目昆虫有很高毒性的蛋白.第一个Cry1Ac杀虫晶体蛋白最早在库斯塔克亚种HD73中以伴胞晶体形式分离获得,其编码区为3 534 bp,编码蛋白分子量为133 kD,含1 178个氨基酸,等电点为4.84.自此以来,Cry1Ac杀虫晶体蛋白结构、功能以及应用研究一直是Bt杀虫晶体蛋白研究的重要方向.本文介绍了苏云金芽孢杆菌中应用最广泛的Cry1Ac杀虫晶体蛋白家族的结构、功能及其基因分类,并进一步就基于苏云金芽孢杆菌Cry1Ac杀虫晶体蛋白的基因工程研究做了分析,提出了持续利用BtCry1Ac杀虫晶体蛋白的一些见解.
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7.
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土壤来源苏云金芽孢杆菌的形态、δ-内毒蛋白质及其毒力特性 被引次数：1
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李荣森 戴顺英 李小刚 赵迎春 孙春娥《微生物学报》,1992年第32卷第6期
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在透射和扫描电镜下观察了土壤来源的94株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的菌体、鞭毛、芽孢及伴孢晶体的形态。以快速SDS—PAGE法分析了全部菌株δ-内毒素的蛋白质成分。用鳞翅目、鞘翅且及双翅目的9种昆虫进行了毒力试验。筛选出了数株杀鞘翅目和杀夜蛾科害虫的高效菌。发现了一些新型伴孢晶体，其形态和蛋白质成分均未报道过。
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8.
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紫外线使苏云金芽孢杆菌伴孢晶体失活机理的研究 被引次数：9
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崔云龙 田明 邵宗泽 《微生物学通报》,1993年第20卷第4期
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用电镜、电泳、生物鉴定等方法,研究了紫外线对苏云金芽孢杆菌库斯塔克变种的伴孢晶体的影响。结果表明,紫外线能破坏伴孢晶体的表面结构和形态,降低伴孢晶体在碱性液和蚕胃液中的溶解度,5小时以上的长时间照射,能导致伴孢晶体完全不溶,因而不能降解为具有杀虫活性的毒素蛋白而失活。
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9.
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干燥温度对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的结构及杀虫活性的影响
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崔云龙 邵宗泽 田明 《微生物学通报》,1994年第21卷第5期
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用电镜、电泳、生物鉴定等方法，研究了干燥温度对苏云金芽孢杆菌库斯塔克变种苏云金芽孢杆菌库斯塔克变种（ＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎＦｉｅｎｓｉｓｖａｒ．Ｋｕｒｓｔａｋｉ）ＨＤ－１的伴孢晶体的结构及杀虫活性的影响。结果表明，０℃冷冻干燥的效果最好，对伴抱晶体的电泳图谱、形态、结构及杀虫活性均无影响；７５Ｃ以下干燥对伴孢晶体的形态和结构略有影响，但对电泳图谱和杀虫活性尚无影响，生产上可以采用。但在７５℃下超过５小时的长时间干燥，对晶体蛋白的空间结构和杀虫活性也有影响，因此，要适当控制干燥时间。８０
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10.
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苏云金芽孢杆菌新型营养期杀虫蛋白Vip3A研究
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刘汉军 丁学知 李焕发 夏立秋《激光生物学报》,2005年第14卷第6期
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营养期杀虫蛋白（Vegetative Insecticidal Protein，Vip）Vip3A是苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）在营养生长对数中期分泌产生的一类新型杀虫蛋白。Vip3A广泛存在于Bt中，与晶体杀虫蛋白（Insecticidal Crystal Proteins，ICPs）没有任何同源性，不具有多样性，在遗传上比较保守。其N-端存在一趋化信号传导因子相似序列，C-端存在着纤维素结合结构域。Vip3A蛋白通过诱发细胞凋亡，最终导致细胞死亡，这与Bt δ-内毒素的作用机理完全不同。本文主要对Vip3A杀虫蛋白的发现、特性及作用机理作一简要综述。
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11.
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苏云金芽孢杆菌Cyt蛋白研究进展 被引次数：4
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蔡峻 任改新《微生物学报》,2002年第42卷第4期
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苏云金芽孢杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,简称Ｂｔ)是目前世界上应用最广泛、最成功的微生物杀虫剂 ,也是公认的无公害生物农药。苏云金芽孢杆菌最主要的杀虫活性物质是杀虫晶体蛋白 (ＩｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌＣｒｙｓ ｔａｌＰｒｏｔｅｉｎｓ,ＩＣＰｓ) ,包括晶体蛋白 (Ｃｒｙ)和Ｃｙｔ蛋白 (Ｃｙｔ)两大类。这两类蛋白在氨基酸序列及其基因同源性上相距甚远 ,但它们均能在靶标害虫中肠内被激活成毒素 ,并在昆虫中肠细胞膜上形成孔道 ,进而引起中肠细胞胶样渗透裂解 (ｃｏｌｌｏｉｄ ｏｓｍｏｔｉｃｌｙｓｉｓ) ,最…
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12.
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苏云金芽孢杆菌工程菌伴孢晶体的形态发生 被引次数：3
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邵宗泽 郭延奎 喻子牛《微生物学报》,2002年第42卷第5期
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苏云金芽孢杆菌在有帮助蛋白存在的情况下杀虫晶体蛋白获得了超量表达。通过透射电镜观察了Cry1Ac超量表达工程菌伴孢晶体的形态发生以及不同芽孢发育时期的晶体形态变化。结果表明，该工程菌的伴孢晶体在细胞不对称分裂的隔膜形成前就已出现，而且晶体发生的部位与芽孢无关。但晶体在形成初期往往靠近母细胞膜。观察结果还表明，大量表达的晶体蛋白不能马上参与到晶体合成，晶体形成的最佳时期是芽孢皮层形成期。母细胞大量液泡的产生与消失可能与晶体形成有关。此外，在超量表达工程菌中，Cry1Ac蛋白能在一个细胞内形成多个伴孢晶体，这在天然菌株中是罕见的。
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13.
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苏云金芽孢杆菌双组份信号转导系统的生物信息学分析
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张清仪 王阶平 程钢 刘钟慧 范文瑾 何进《微生物学通报》,2011年第38卷第9期
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苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)能产生杀虫晶体蛋白等多种活性成分,是目前应用最广泛的微生物杀虫剂。本文采用生物信息学方法,系统分析了由本实验室完成全基因组测序的苏云金芽孢杆菌YBT-1520、CT-43和BMB171 3个菌株的双组分信号转导系统(Two-componentsignal transduction system,TCS)的分布、结构及功能,并初步构建了部分TCS的调控网络关系图。本研究旨在为深入研究苏云金芽孢杆菌的生长、代谢以及毒力因子的表达与调控,全面了解伴孢晶体的形成机制开辟新的研究方向。
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14.
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苏云金杆菌Z113菌株伴孢晶体特性及其杀虫活性
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徐宏革 蔡全信 袁志明 刘娥英 张用梅《Virologica Sinica》,2000年第Z1期
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本文研究了苏云金芽孢杆菌Z113菌株在发酵过程中形成的伴孢晶体的形态及毒素蛋白的杀虫活性 ,并考察了该菌株的发育状况、OD值、pH值及不同发育时期毒素蛋白和杀虫活性的变化 ,确定了Z113菌株杀虫毒力与晶体蛋白之间的关系。
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15.
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用甘蓝螟确认导入BT毒素基因的水稻耐虫性
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孙国凤《生物技术通报》,1993年第4期
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植物工程研究所培育导入并表达苏云金芽孢杆菌(BT)杀虫蛋白δ内毒素转基因水稻获得成功,用导入基因的第二代水稻叶确认了对水稻害虫甘蓝螟的耐虫性。摄食了重组水稻叶的甘蓝螟阻碍生长或死亡。δ内毒素可作为微生物农药BT 剂的杀虫成分。含有该编码基因的耐虫性植物,在日本开发还是首次。详细情况在10月18～20日名古屋召开的日本育种学会上发表。
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16.
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昆虫中肠液性质对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体毒力的影响 被引次数：7
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邵宗泽 喻子牛《昆虫学报》,2002年第45卷第3期
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综述了昆虫中肠液性质对苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis伴孢晶体毒力的影响。中肠液的酸碱度和蛋白酶是影响伴孢晶体溶解与原毒素活化的两大因素。中肠液的酸碱度不仅影响到伴孢晶体的溶解速度，还影响到各种蛋白酶的活性表现；而蛋白酶则直接参与了原毒素的活化，其组成与活性影响着原毒素的活化速度和杀虫专一性。因中肠液蛋白水解能力过高而导致原毒素的过度降解是某些昆虫对苏云金芽孢杆菌低度敏感的主要原因，而中肠液对原毒素活化能力的降低则与昆虫抗性的形成有关。此外，中肠液的沉淀作用及其它生理生化特性也影响着原毒素毒力的正常发挥。
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17.
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影响苏云金芽孢杆菌基因在转基因植物中表达的因素 被引次数：2
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卢美贞 崔海瑞 姚艳玲 忻雅《细胞生物学杂志》,2005年第27卷第5期
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苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）杀虫晶体蛋白基因是植物抗虫基因工程中应用最广泛的基因资源。影响Bt基因在转基因植物中表达的因素繁多，阐明这些因素的效应对于获得Bt基因在受体植物中的稳定高效表达具有重要意义。现对Bt基因表达的主要影响因子，如Bt基因表达单元、植物发育、外部环境条件、受体植物遗传背景、整合位点及Bt基因沉默现象等进行了综述。
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18.
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苏云金杆菌β-外毒素对家蝇幼虫的毒效观察
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《昆虫知识》,1975年第4期
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苏云金杆菌具有多种杀虫的毒素,基本上可分两类:一类为内毒素,即伴孢晶体毒素;一类为外毒素,主要是β-外毒素。β-外毒素对蚊蝇幼虫有明显的毒杀作用。在卫生防疫事业蓬勃发展的今天,开展β-外毒素的研究对除四害有一定的意义。为此,我们开展了有关β-外毒素的实验研究。 苏云金杆菌包括17个变种,分属12个血清型。本文报告的是苏云金杯菌血清型9菌株产生外毒素的情况及对家蝇幼虫的毒效观察。
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19.
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抗虫杀菌融合基因表达载体的构建及微束激光转化植物研究
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张楠 陈正华 刘桂珍 陈凌娜 曲延英《激光生物学报》,2007年第16卷第2期
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将苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白的基因(Bacillus thuringiesis,简称Bt)通过甘氨酸接头(Gly4Ser)3与一种人工合成的抗菌肽(antimicrobial peptides,AMP)基因与相融合,编码一种新的杀虫,并具有抗菌的蛋白。把融合基因(NAMP-Bt)连接到原核表达载体pET-28a和植物表达载体pBI-121上,经过限制性酶切分析和PCR鉴定,结果表明含有融合基因的原核和真核重组表达质粒均已构建成功,并将该融合基因转入烟草,已获得抗性小植株。
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20.
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抗虫双价基因表达载体的构建及微束激光转化植物研究
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郑巨云 陈正华 刘桂珍 苏秀娟 曲延英《激光生物学报》,2008年第17卷第4期
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将苏云金芽孢杆菌伴孢晶体(Bacillus thuringiensis,Bt)蛋白的基因与反枝苋菜凝集素(Amaranthus retrojflexus agglutinin,ARA)基因构建成双价基因的表达载体,编码一种既能抗鳞翅目害虫,又能抗同翅目蚜虫的杀虫蛋白.把双价基因(Bt-BA)连接到原核表达载体pET28a和植物表达载体pBI121上,经过限制性酶切分析和PCR鉴定,结果表明:含有双价基因的原核和真核重组表达质粒均已构建成功.将该双价基因转入油菜,获得抗性小植株.
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