逆转录——聚合酶链反应技术诊断丙型肝炎病毒感染

本文采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术对２１２例住院及门诊病人其中肝病患者９８例（慢性肝炎４３例、肝炎后肝硬化４７例、原发性肝细胞癌８例）进行ＨＣＶ－ＲＮＡ检测。结果９８例慢性肝病患者血清中ＨＣＶ－ＲＮＡ－ＰＣＲ阳性２７例（２７．６％）,１１４例非肝病患者血清中ＨＣＶ－ＲＮＡ－ＰＣＲ阳性９例（７．９％）,两组间差异非常显著（Ｐ〈０．０１）,各种肝病患者的ＨＣＶ－ＲＮＡ－ＰＣＲ阳性率均高于     

乙型肝炎病人重叠感染丙型肝炎的评价

应用ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ法检测５０２例乙肝病人血清,４０１例ＨＢｓＡｇ阳性血清中,有１１４例（２８．４％）抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ双项阳性,２５例（６．２％）ＨＣＶＲＮＡ单项阳性;２１例（５．２％）抗－ＨＣＶ单项阳性。将ＨＢｓＡｇ乙肝病人分成ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阳性组和ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阴性组。前者抗－ＨＣＶ阳性率为１１．６％～２０．５％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为１６．２％～２０．５％。后者抗－ＨＣＶ阳性率为２０．２％～５５．６％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为２３％～６０．３％。结果说明长期携带ＨＢＶ者和慢性乙肝病人均可重叠ＨＣＶ感染。ＨＢＶＤＮＡ阳性组抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ阳性率明显高于ＨＢＶＤＮＡ阳性组     

安徽省不同人群及各型肝炎患者庚型肝炎病毒感染检测分析

应用酶联免疫试验（ＥＩＡ）和逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）对１００ 例一般人群、３８５例献血员、５４ 例血液透析患者、７２ 例乙型肝炎、４１ 例丙型肝炎２７ 例非甲－戊型肝炎患者进行检测。结果抗－ＨＧＶ 阳性率分别为２．００％ 、７．５３％ 、２７．７８％ 、１８．０６％ 、１９．５１％ 和１４．８１％ ;抗－ＨＧＶ 阳性者中ＨＧＶＲＮＡ 阳性率分别为１００．００％ 、６２．０７％ 、６６．６７％ 、６９．２３％ 、７５．００％ 和 １００．００％ ,提示本地区不同人群存在ＨＧＶ 感染。献血员、血透患者、乙型肝炎、丙型肝炎、非甲－戊型肝炎患者的ＨＧＶ 感染率显著高于一般人群,提示献血员,血透患者及ＨＢＶ、ＨＣＶ 感染者是ＨＧＶ 感染的高危人群。ＨＧＶ 常与ＨＢＶ 或ＨＣＶ 重叠／联合感染,也可单独感染。抗－ＨＧＶ 阳性者中ＨＧＶ ＲＮＡ 阳性率为８３．８２％ ,提示抗－ＨＧＶＥＩＡ 可用于ＨＧＶ 感染的检测。ＡＬＴ 正常和异常献血员中抗－ＨＧＶ 阳性率无显著性差异。     

PCR与ELISA检测丙型肝炎病毒的比较

ＰＣＲ与ＥＬＩＳＡ检测丙型肝炎病毒的比较李京培王明丽史百芬陆应玉（安徽医科大学２３００３２）丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染后,患者血清中可以检测其特异的核酸序列ＨＣＶ－ＲＮＡ和抗－ＨＣＶ等。目前国内临床大多数ＨＣＶ的实验室诊断主要依靠抗ＨＣＶ－ＩｇＧ检查,但急性期抗体检出率仅能达到６０％（３７．６～８２．８％）,部分病例可呈阴性反应［１］。说明用ＥＬＩＳＡ检测ＨＣＶ有相当部分漏检,不能发现早期患...     

丙型肝炎病毒RNA打点杂交检测方法同RT－PCR方法的比较

采用ＨＣＶ基因组结构区Ｃ区ｃＤＮＡ探针和非结构区ＮＳ３－４区ｃＤＮＡ探针,建立了用打点杂交（ｄｏｔｂｌｏｔｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的方法,同采用ＨＣＶ基因组５’端非编码区的一对寡核苷酸引物通过逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的方法相比较,发现两种方法都能快速早期和特异地检出血清中ＨＣＶＲＮＡ,但ＲＴ－ＰＣＲ法敏感性优于ＲＮＡ打点杂交法。对于无血清学指标的慢性ＮＡＮＢ肝炎病人的诊断,可采用这两种方法。这两种方法的敏感性在很大程度上依赖于引物和探针的敏感性,以及ＲＮＡ提取方法。ＲＴ－ＰＣＲ法适用于诊断病毒血症和复制,打点杂交法适用于研究ＨＣＶＲＮＡ量的变化,对治疗的评价,以及为实验筛选较高滴度的ＨＣＶＲＮＡ阳性样本。     

用人工合成的丁型肝炎病毒抗原多肽检测丁肝病毒IgM抗体及其初步应用

用人工合成的丁型肝炎病毒抗原（ＨＤＶ－Ａｇ）肽建立了检测抗ＨＤＶ－ＩｇＭ抗体的ＥＬＩＳＡ方法,本法操作简便、快速,重复性好,特异性强,与抗ＨＡＶ－ＩｇＭ、抗Ｈｋ－ＩｇＭ、抗ＨＢｓ－ＩｇＭ、抗ＨＣＶ－ＩｇＩ、抗ＣＭＶ－ＩｇＭ、抗ＲＶ－ＩｇＭ、类风湿因子（ＲＦ）及抗核抗体（ＡＮＡ）阳性血清均不起反应,且可被２－巯基乙醇阻断而不起反应。经初步临床应用,３１例正常人血清抗ＨＤＶ－ＩｇＭ全部阴性,２８例慢活肝患者检出率为３２．１％（９／２８）,１７例慢迁肝患者血清阳性率为１１．８％（２／１７）１８例肝癌和肝硬化病人血清阳性率为２２．２％（４／１８）这三组病人与正常对照者相比较均有显著性差异（Ｐ＜０．００１）。此外,抗ＨＤＶ－ＩｇＭ阳性血清的ＡＬＴ值均明显高于正常参考范围,提示在ＨＤＶ感染过程中,患者肝细胞进一步受损。实验结果证明,抗ＨＤＶ－ＩｇＭ是诊断ＨＤＶ感染的重要指标,对ＨＤＶ感染早期诊断具有重要价值。     

RT—nested PCR检测肾综合征出血热患者血清病毒核酸

采用异硫氰酸胍－酚－氯仿（ＡＧＰＣ）一步法提取病毒ＲＮＡ,并依据肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）核蛋白（ＮＰ）编码基因保守区核苷酸序列合成两对巢式引物,建立了逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测ＨＦＲＳＶＲＮＡ方法,应用此法对ＨＦＲＳＶ感染的ＶｅｒｏＥ６细胞培养液及ＨＦＲＳ患者血清中的病毒ＲＮＡ进行检测。结果显示,感染细胞培养液及３５例ＨＦＲＳ患者血清均为阳性,正常的ＶｅｒｏＥ６     

HCV RNA的检测方法简介

本文讨论了检测丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶＲＮＡ）的样本来源和处理,引物的设计,合成和选择等问题;重点介绍了蛋白酶Ｋ消化法,聚乙二醇沉淀法,异硫氰酸胍一步法,硅凝胶提取法和直接捕获法提取ＨＣＶ　ＲＮＡ的５种方法,以及一步ＰＣＲ法,常规ＲＴ－巢式ＰＣＲ,直接ＲＴ－巢式ＰＣＲ,化学修饰的ＲＴ－巢式ＰＣＲ,联合ＰＣＲ,双温ＰＣＲ和定量竞争性ＰＣＲ等７种ＰＣＲ方法检测ＨＣＶ　ＲＮＡ,用ＰＣＲ检测ＨＣＶ　ＲＮＡ方法的标准化以及检测ＨＣＶＲＮＡ具有非常重要的意义。本文还介绍了一种新型的定量方法－ｂＤＮＡ信号放大技术检测ＨｃＶＲＮＡ。     

病毒性肝炎HAV，HBV，HCV，HDV和HEV重叠感染的研究

采用ＥＬＩＳＡ法检测了１０８例乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者血清中的五种肝炎病毒──甲型（ＨＡＶ）、乙型（ＨＢＶ）、丙型（ＨＣＶ）、丁型（ＨＤＶ）和成型（ＨＥＶ）肝炎病毒的标志物,并采用ＰＣＲ技术检测了患者血清ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ及ＨＤＶＲＮＡ。结果五种肝炎病毒重叠感染者３５例（３２．４％）,单纯ＨＢＶ感染者７３例（６７．６％）。ＨＢＶ、ＨＡＶＭ重感染率为４．６％,ＨＢＶ、ＨＣＶ二重感染率为９．２％,ＨＢＶ、ＨＤＶＭ重感染率为１４．８％,ＨＢＶ、ＨＥＶ二重感染率为１．９％,ＨＢＶ、ＨＣＶ和ＨＤＶ三重感     

献血员血清抗—HCV和HCV RNA检测

本文对宜昌市的２９９９名献血员,５９４名自然人群的血清进行了抗－ＨＣＶ、ＨＣＶＲＮＡ检测,结果表明,献血员中抗－ＨＣＶ阳性２３例,阳性率为０．７７％。其中宜昌、巴东分别为０．７３％和０．７６％,沙市为０．８３％。地区、性别、城乡之间抗－ＨＣＶ阳性率无显著性差异（ｐ＞０．０５）。参照以往文献报导,此阳性率比国内报导的低,与国际的相一致。５９４名自然人群抗－ＨＣＶ结果均为阴性,献血员与自然人群之间抗－ＨＣＶ阳性率差异显著（ｐ＜０．０５）。２０例抗－ＨＣＶ阳性者中检出ＨＣＶ　ＲＮＡ阳性６例,占３０％（６／２０）,占受检献血员的０．２０％（６／２９９９）,比武汉（０．８０％）低４倍,地区之间无显著差异（ｐ＞０．０５）。由此初步确认：宜昌市献血员中丙型病毒性肝炎感染低于国内某些大中城市、宜昌市（含七县二市）巴东县、沙市市是丙型病毒性肝炎低感染区。但存在无症状病毒血症携带者传染源。