单链尿激酶型纤溶酶原激活物的结构和性质

单链尿激酸型纤溶酶原激活物(scuPA)是一种丝氨酸蛋白酶,由411个氨基酸组成单一多肽链结构,是尿激酶的前体形式。它可特异地激活血栓局部的纤溶酶而启动纤溶系统,并与组织型纤溶酶原激活物(tPA)有协同作用,是一种有广泛前途的溶栓物质。     

尿激酶与肿瘤转移

尿激酶是一种丝氨酸蛋白水解酶,它能激活纤溶酶原成为纤溶酶,降解胞外基质,从而利于细胞迁移。肿瘤转移是导致肿瘤恶化和肿瘤病人死亡的主要原因之一。以尿激酶为中心,尿激酶受体介导的纤溶酶原激活系统在肿瘤转移过程中扮演了重要角色。     

尿激酶原变体Glu151-Glu154-mscu-PA的构建及其动力学性质

利用寡核苷酸介导的定点突变方法 ,将重组人尿激酶原 ( recombinant single chain uroki-nase- type plasminogen activator,rscu- PA)中 1 51位赖氨酸 ( Lys1 51 )突变为谷氨酸 ( Glu1 51 ) ,1 54位精氨酸 ( Arg1 54)突变为谷氨酸 ( Glu1 54) ,得到尿激酶原变体基因 ( mscu- PA) .尿激酶原变体和未突变的重组尿激酶原均在 E.coli中获得表达 ,超声后所得包涵体经体外变复性并得到纯化 .结果表明 ,尿激酶原变体对纤溶酶 ( plasmin)的敏感性比未突变的重组尿激酶原低约 40 % ,转变纤溶酶原 ( Glu- plasminogen)为纤溶酶的活性基本相同 .两种产物经纤溶酶活化后 ,分别得到了双链尿激酶 ( rtcu- PA)和双链尿激酶变体 ( mtcu- PA) .它们对人工合成的发色底物 S2 4 4 4反应的动力学基本一致 ,对 Glu- plasminogen的催化反应的米氏动力学常数 Km 基本一致 ,但 mtcu- PA的 Kcat仅为rtcu- PA的 80 % .酪蛋白降解系统 ( caseinolytic system)实验表明 ,在纤维蛋白和纤溶酶原存在的情况下 ,尿激酶原变体较未突变尿激酶原能加快酪蛋白的降解 ,说明 mtcu- PA对纤维蛋白有一定的亲和性     

SDS-PAGE纤维蛋白自显影法检测不同分子量的纤溶酶原激活剂

体内存在两种纤溶酶原激活剂(plasminogen activator, PA):血液中生理性的组织型纤溶酶原激活剂(t PA)及尿中的尿激酶型纤溶酶原激活剂(u PA)。它们通过将纤溶酶原转变成有活性的纤溶酶而启动纤溶过程使血栓溶解。目前模拟体内纤溶过程以纤维蛋白为底物的PA物质活性测定方法有纤维蛋白溶圈法和发光分析法,但这两种方法不能     

尿激酶型纤溶酶原激活物受体研究进展

尿激酶型纤溶酶原激活物受体作为胞外纤溶酶系统的一员,以糖基磷脂酰肌醇锚的形式固定于细胞膜上,它参与了胞外纤溶酶活性的调节,具有内化受抑制的尿激酶的功能;同时参与了胞外信号的传递;另外它对癌症的临床预后及抗癌转移的研究有重要的意义．     

PAI与细胞凋亡

纤溶酶原激活物(PA)系统是体内重要的蛋白溶解复合物系统,主要参与降解细胞外基质。纤溶酶原激活物抑制剂(PAI),主要有PAI-1、PAI-2,是纤溶酶原激活物t-PA和u-PA的有效抑制物。最近研究证明,PAI与细胞凋亡存在较密切的关系:PAI-1和PAI-2可抑制细胞凋亡的发生;细胞内PAI-2的裂解产物可作为细胞凋亡的标志等。     

反相色谱分离蚯蚓纤溶酶的初步研究

蚯蚓纤溶酶是由日本宫崎医科大学的Ｍｉｈａｒａ^［１］于１９８２年从蚯蚓的肠和体液中发现的。由于蚯蚓纤溶酶有良好的溶解血检的作用,可以治疗一系列与血栓形成有关的疾病,因而在临床上有很大的应用价值^[2],有可能成为一种新型的溶栓药物,继尿激酶、链激酶等之后应用于临床[4].关于蚯蚓纤溶酶的分离纯化,大多采用盐析、凝胶层析及离子交换层析等方法^[2-6],也有人采用亲和层析的方法^[7].本文以赤子爱胜蚓纤溶酶粗品为对象,对用反相色谱技术分离蚯蚓纤溶酶进行了初步尝试,现将结果报道如下。     

特发性肺纤维化的机制与治疗

组织纤维化会对限制性疾病,如特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)患者的肺部结构和功能造成不可逆损伤。血管外凝血、纤溶酶与纤溶酶原激活物抑制剂-1被认为在肺纤维化的发展中发挥作用。凝血激活与纤溶酶激活的蛋白酶可以分别形成和分解纤维蛋白系统,凝血酶、凝血剂和凝血因子Xa可以裂解蛋白酶活化受体促进纤维化;而尿激酶纤溶酶原激活剂的纤溶酶原蛋白酶也能结合受体引发纤维化活化。本综述聚焦IPF并描述了两个纤维蛋白稳态系统参与及促进间质纤维化,认为选择性靶向受体介导的凝血剂和纤溶酶蛋白酶既可以限制肺纤维化发展,又没有与溶栓治疗和常规抗凝血剂相关的出血并发症的危险。     

尿激酶受体研究进展

细胞表面的尿激酶受体是一种高度糖基化的蛋白质,通过糖基磷脂酰肌醇锚定在细胞膜上。尿激酶受体除能与尿激酶或尿激酶原结合外还与玻连蛋白,整合素,α2巨球蛋白受体—低密度脂蛋白相关蛋白等相互作用。细胞表面的尿激酶受体不仅能促进纤溶酶原的激活、细胞外基质的降解,一些生长因子的释放或活化,而又还参与细胞粘附以及尿激酶／纤溶酶原激活物抑制剂复合物的代谢和细胞迁移。在肿瘤患血液中可溶性尿激酶受体含量显高于正常人,因而对尿激酶受体含量的测定可作为临床肿瘤诊断的指标。动物实验结果表明,阻断尿激酶与尿激酶受体的结合或抑制尿激酶受体的表达可显抑制肿瘤的浸润及转移。     

人尿激酶原全长cDNA在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达

通过磷酸钙共沉淀技术,将含有尿激酶原cDNA的表达载体(pSV₂-PrUK)与含有二氢叶酸还原酶基因的表达质粒pSV2-dhfr-或MMTV—dhfr共转染中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶基因缺陷株(CHO-dhfr^-)。利用选择培养基选择出二氧叶酸还原酶基因表达阳性(dhfr⁺)的转化细胞灶。用溶解圈法测定尿激酶型纤溶酶原激活剂(u—PA)的生物活性,其中两株显著高于其他株细胞,命名为CLF-14和CLF-8,表达水平依次为24Iu／10⁶细胞／48h,16Iu／10⁶细胞／48h。用ELLSA测定CLF一14和cLF-8细胞上清,表现为强阳性,阳性值比阴性对照值(P／N)大于10,CLF-14和CLF-8细胞表达量分别为0．14-o．22μg／10⁶细胞／48h和0．08-O．14μg／10⁶细胞／48h。分泌产物能被抗尿激酶(UK)血清抑制,而不被抗组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的抗血清和正常兔血清抑制。