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共有20条相似文献,以下是第1-20项 搜索用时 312 毫秒

1.  农杆菌介导的玉米自交系愈伤组织转化条件的优化  被引次数:12
   权瑞党  尚梅  张举仁《植物生理与分子生物学学报》,2003年第29卷第3期
   采用农杆菌介导法,将外源基因导入玉米骨干自交系掖515和掖502胚性愈伤组织并再生玉米植株。在农杆菌浸染玉米胚性愈伤组织过程中,采取真空渗入、部分酶解和超声波处理,可以显著提高转化率。农杆菌浸染玉米胚性愈伤组织时,在50kPa下真空渗入5min,掖515和掖502胚性愈伤组织的转化率分别从6.3%和4.5%提高到8.7%和7.8%。愈伤组织在农杆菌浸染前,以0.2%离析酶酶解10min,掖515和掖502胚性愈伤组织的转化率分别提高到8.3%和8.9%。在农杆菌浸染时,以功率100W超声波处理90-120s,掖515和掖502胚性愈伤组织的转化率最高可达9.1%和9.4%。    

2.  影响根癌农杆菌介导甜瓜转化NP-1基因的外部因子研究  被引次数:4
   张勇  周小云  何江  李冠《生物技术》,2004年第14卷第4期
   以新疆伽师、皇后两个甜瓜品种的子叶切块与农杆菌共培养,将NP-1基因导入甜瓜。以再生植株的PCR检测阳性和卡那霉素抗性作为转化植株的初步判定。研究了甜瓜转化的外部因子:甜瓜子叶外植体经3d预培养,重悬于MS液体培养基使菌液浓度达OD600为0.6后进行侵染8~12min,再经3d共培养对转化最为有利;在侵染前进行0.2mg/L甘露醇高渗处理可提高转化率6.6%,乙酰丁香酮在甜瓜的转化中并未有显著影响。转化中卡那霉素合适筛选压力为100mg/L,转化后抑菌氨苄青霉素浓度为500mg/L有利于获取转化植株,转化率可达到12%。    

3.  毛白杨高效转化系统的研究(英文)  被引次数:1
   杨春玲  祖国诚  赵世民  刘根齐《基因组蛋白质组与生物信息学报》,2001年第1期
   毛白杨是一种具有多种优良特性、用途广泛并有重要经济价值的杨属树种,又是农杆菌的天然寄主植物。因此,毛白杨一直是进行木本植物组培及遗传转化研究的重要对象。本研究通过比较培养基组成(Table 1)、外植体类型(Table 2)、农杆菌侵染浓度以及预培养(Table 3&4, Fig.1)和共培养条件(Table 5)等影响农杆菌转化及植株再生效率的诸多重要条件后,建立了毛白杨的农杆菌高效转化系统。实验选用毛白杨叶片为外植体,在MS + 4.0 mg/L 2,4-D + 1.0 mg/L 6-BA培养基上预培养2 d后制成叶盘,并做戳伤处理,再与5×108 Cell/mL浓度的农杆菌新鲜菌液共培养2 d,然后以MS + 4.0 mg/L 2,4-D + 1.0 mg/L 6-BA附加50 mg/L Km和1 000 mg/L AP为筛选培养基(Table 6, Fig.4) ,获得最佳转化效果。2-3周后,在叶盘周围长出许多Km抗性愈伤组织,转入分化培养基分化后,再转入生根培养基3-4周,获得完整植株(Fig.3)。经PCR扩增实验鉴定,转化愈伤组织的阳性率达到83.8%(Fig.2)。多次重复实验结果表明,该转化系统与以往的文献报道相比,其遗传转化率大大提高。抗性愈伤组织的平均转化率高达56.2%,最终得到的再生转化植株的比率达19.9%。其中,毛白杨叶盘经戳伤处理,其转化率可提高至20~40% (Table 7)。利用此转化系统#0;    

4.  影响复合针介导的大豆遗传转化效率的主要因素研究  被引次数:2
   谢宏峰  曹银生  薛仁镐《生物技术通讯》,2007年第18卷第6期
   目的:提高复合针介导的大豆遗传转化效率。方法:以萌发1d的半片大豆种子作为目标组织,用复合针对其子叶节组织进行刺伤处理,并接种于含有pCAMBIA1201载体的根癌农杆菌LBA4404中;采用GUS染色法测定瞬时表达效率。结果:刺伤处理中,用复合针刺伤2次时,转化效率最高,平均每个外植体达到9个蓝色斑点;基因型对转化效率也有较大影响,所试5个品种中,合丰25的转化效率最高,平均为7_3个蓝色斑点;共培养时间以5d为宜;添加抗氧化剂1.0mmol/L二硫苏糖醇+1.0mmol/L硫代硫酸钠+3.3mmol/L半胱氨酸时,能够明显提高瞬时转化效率。结论:提高了复合针介导的大豆遗传转化效率。    

5.  根癌农杆菌介导的苜蓿悬浮胚性愈伤遗传转化体系的建立与优化  被引次数:1
   申玉华  李望丰  金太成  常青  殷东旭  王德利  刘立侠《植物研究》,2009年第29卷第6期
   苜蓿基因型是限制遗传转化的关键因素之一。本实验通过对7种苜蓿胚性愈伤组织诱导,筛选出一份具有高频再生潜力的基因型公农-1号,并以该基因型为转化平台探索和建立了一套高效的苜蓿遗传转化系统。分析了影响农杆菌共培养转化苜蓿悬浮胚性愈伤的因素,优化了悬浮培养条件,建立的超声波辅助农杆菌介导苜蓿胚性愈伤的遗传转化系统为:以下胚轴诱导的愈伤组织经悬浮培养得到的胚性愈伤为转化材料,乙酰丁香酮为100 μmol·L-1、超声波处理时间8 s、卡那霉素筛选浓度30 mg·L-1、共培养4 d,接种于选择培养基上进行筛选和再生。最终,获得了大量的转基因植株,分子检测证实目的基因-角碱蓬液泡膜型Na+/H+逆向转运蛋白基因已经整合到苜蓿基因组中。    

6.  超声波辅助农杆菌介导CP基因转化番小瓜(Carioca papaya L.)的有效方法  
   姜玲  MAOKA Tetsuo  KOMORI Sadao  FUKAMACHI Hiroshi  KATO Hidenori  OGAWA Kazunori《分子细胞生物学报》,2004年第3期
   本研究探索了通过农杆菌介导,超声波辅助处理,转化番木瓜胚性愈伤组织,获得转基因植株的有效方法。分别将含有日本PLDMV 外壳蛋白基因(PTi-Epj-TL-PLDMV)和含有台湾PRSV 菌株、美国夏威夷PRSV 菌株、泰国PRSV 菌株及日本PLDMV 菌株的多元外壳蛋白基因编码序列(PTi-NP-YKT)插入双元载体质粒pGA482G,借助于农杆菌系LBA4404将双元载体上的外壳蛋白基因和新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)转移到番木瓜品种Sunset 的胚性愈伤组织中,从而获得抗卡那霉素的转化再生植株。试验着重在转化方法上进行探索。结果表明,农杆菌过夜培养后,用高渗透压培养液(1/2 MS 6%蔗糖 1%葡萄糖,pH 5.7)调整至光密度OD_(600(?)m)=0.15-0.20,然后用该菌液感染材料30min,其间辅以超声波处理,可以大大提高转化效率。用15ml 无菌离心管装载胚性愈伤材料进行15s 的超声波处理,在80块被转化的胚性愈伤中获得21个CP 基因G 转化系(26.3%),而在对照处理64块胚性愈伤中仅获得1个转化系(1.6%);在经过15s 的超声波处理48块被转化的胚性愈伤中获得8个CP 基因B 转化系(16.7%),而在对照处理25块胚性愈伤中未出现转化系。上述操作方法用在两种CP 基因转化上均表现出相似的效果。试验还表明:120mg/L 是卡那霉素抗性筛选的最佳浓度。抗性筛选9个月后,在421块胚性愈伤组织中产生了42个抗卡那霉素的转化系。所获得的转基因植株分别用PCR 和Southern 印迹杂交进行了鉴定。    

7.  超声波辅助农杆菌介导CP基因转化番木瓜(Carioca papaya L.)的有效方法  
   姜玲   MAOKA Tetsuo   KOMORI Sadao  FUKAMACHI Hiroshi   KATO Hidenori   OGAWA Kazunori《分子细胞生物学报》,2004年第37卷第3期
   本研究探索了通过农杆菌介导,超声波辅助处理,转化番木瓜胚性愈伤组织,获得转基因植株的有效方法.分别将含有日本PLDMV外壳蛋白基因(PTi-Epj-TL-PLDMV)和含有台湾PRSV菌株、美国夏威夷PRSV菌株、泰国PRSV菌株及日本PLDMV菌株的多元外壳蛋白基因编码序列(PTi-NP-YKT)插入双元载体质粒pGA482G,借助于农杆菌系LBA4404将双元载体上的外壳蛋白基因和新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)转移到番木瓜品种Sunset的胚性愈伤组织中,从而获得抗卡那霉素的转化再生植株.试验着重在转化方法上进行探索.结果表明,农杆菌过夜培养后,用高渗透压培养液(1/2MS+6%蔗糖+1%葡萄糖,pH 5.7)调整至光密度OD600nm=0.15-0.20,然后用该菌液感染材料30min,其间辅以超声波处理,可以大大提高转化效率.用15m1无菌离心管装载胚性愈伤材料进行15s的超声波处理,在80块被转化的胚性愈伤中获得21个CP基因G转化系(26.3%),而在对照处理64块胚性愈伤中仅获得1个转化系(1.6%);在经过15s的超声波处理48块被转化的胚性愈伤中获得8个CP基因B转化系(16.7%),而在对照处理25块胚性愈伤中未出现转化系.上述操作方法用在两种CP基因转化上均表现出相似的效果.试验还表明120mg/L是卡那霉素抗性筛选的最佳浓度.抗性筛选9个月后,在421块胚性愈伤组织中产生了42个抗卡那霉素的转化系.所获得的转基因植株分别用PCR和Southern印迹杂交进行了鉴定.    

8.  超声波辅助农杆菌介导CP基因转化番木瓜(Carioca papaya L.)的有效方法  被引次数:1
   姜玲 MAOKATetsuo KOMORISadao FUKAMACHIHiroshi KAT0Hidenori 0GAWAKazunori《实验生物学报》,2004年第37卷第3期
   本研究探索了通过农杆菌介导,超声波辅助处理,转化番木瓜胚性愈伤组织,获得转基因植株的有效方法。分别将含有日本PLDMV外壳蛋白基因(PTi-Epj-TL-PLDMV)和含有台湾PRSV菌株、美国夏威夷PRSV菌株、泰国PRSV菌株及日本PLDMV菌株的多元外壳蛋白基因编码序列(PT—NP—YKT)插入双元栽体质粒pGA482G,借助于农杆菌系LBA4404将双元载体上的外壳蛋白基因和新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)转移到番木瓜品种Sunset的胚性愈伤组织中,从而获得抗卡那霉素的转化再生植株。试验着重在转化方法上进行探索。结果表明,农杆菌过夜培养后,用高渗透压培养液(1/2MS 6%蔗糖 1%葡萄糖,pH5.7)调整至光密度OD600nm=15-0.20,然后用该菌液感染材料30min,其间辅以超声波处理,可以大大提高转化效率。用15ml无菌离心管装载胚性愈伤材料进行15s的超声波处理,在80块被转化的胚性愈伤中获得21个CP基因G转化系(26.3%),而在对照处理64块胚性愈伤中仅获得1个转化系(1.6%);在经过15s的超声波处理48块被转化的胚性愈伤中获得8个CP基因B转化系(16.7%),而在对照处理25块胚性愈伤中未出现转化系。上述操作方法用在两种CP基因转化上均表现出相似的效果。试验还表明:120mg/L是卡那霉素抗性筛选的最佳浓度。抗性筛选9个月后,在421块胚性愈伤组织中产生了42个抗卡那霉素的转化系。所获得的转基因植株分别用PCR和Southern印迹杂交进行了鉴定。    

9.  不同理化因子对发根农杆菌Ri质粒转化骆驼刺的影响  被引次数:12
   步怀宇 贾敬芬《西北植物学报》,2000年第20卷第4期
   骆驼刺苗茎切段有很强的离体培养再生能力,用野生型发根农杆菌A,菌株转化骆驼刺度轩茎段,并建立了发根转化体的培养体系。高压纸电泳显示转化组织可合成冠瘿。试验不同试验经条件及理化因子对提高转化率和加快发根生长的影响。结果表明,经过3天预培养及0.3mol/L甘露醇12h高渗处理后培养于MS培养基中可有效提高转化率。而2%~3%蔗糖,3mg/L,GA3,10μmol/LCu^2+,10mg/LAg^+,    

10.  青蒿发根生长及青蒿素生物合成动态的研究  被引次数:10
   刘本叶 叶和春 李国凤 陈大华 耿飒 张艳萍 陈建林《生物工程学报》,1998年第14卷第4期
   从747条发根农杆菌ATCC15834转化的青蒿株系025发根中,筛选出7个生长较快的发根系,这7个系在生长速度和青蒿素含量上均有显著差异,其中发根系HR9青蒿素产率最高,达到每月3325mg/L。青蒿发根的生长量和青蒿素含量极显著高于未转化根和愈伤组织。青蒿发根在分批培养中没有明显的迟滞期,接种后第7天进入指数生长期,第11天生长最快,第20天进入稳定期。青蒿发根中青蒿素含量呈明显的“与生长相关”特性,在指数生长期,青蒿素含量缓慢下降,生长速度减缓后,青蒿素含量上升,发根生长停止后,继续延长培养时间,青蒿素含量也不再提高。在分批培养中,青蒿发根适宜的培养时间为21d。    

11.  新疆紫草毛状根的诱导及培养  被引次数:4
   陈永芳  芦韦华  王芳  麻浩  李建贵《西北植物学报》,2008年第28卷第12期
   将处于对数生长期(A600为0.5)的发根农杆菌MSU440、A4、R1000、15834、1025和R1601与新疆紫草子叶外植体共培养.结果表明:(1)发根农杆菌不同菌种对转化率有显著影响,供试6个菌种中只有MSU440菌株获得转化株.PCR及序列分析表明发根农杆菌Ri质粒的rolC基因已在新疆紫草毛状根基因组中整合并得到表达,转化率达4.5%.(2)子叶较真叶的不定根发生率高,且生根持续时间长.(3)在B5无铵无激素固体培养基上,毛状根分支多且根较长,达2~3 cm,毛状根鲜重月平均增殖达7~9倍,是固体培养毛状根的适宜培养基.(4)毛状根在MS无铵无激素液体培养基中培养12 d时,毛状根鲜重平均增殖达12倍,MS无铵液体培养基有利于毛状根的扩大生产.首次获得了激素自主、快速伸长生长、多分支、多根毛的新疆紫草毛状根株系,初步建立了新疆紫草毛状根诱导体系,为大规模培养、生产紫草素奠定了基础.    

12.  赤霉素和6-BA对苦豆子种子萌发生理特性的影响  
   闫芳  张春梅  王勤礼  李志颜  马小兵《中国野生植物资源》,2012年第31卷第6期
   以苦豆子种子为材料,研究了不同浓度的赤霉素(GA3)和6-苄基氨基嘌呤(6-BA)对苦豆子种子发芽特性的影响。结果表明,在一定浓度范围内,赤霉素和6-BA均能提高苦豆子种子发芽,而且延长浸种时间也可促进种子的萌发,其中以200 mg/L的赤霉素浸种8 h和60 mg/L的6-BA浸种8h效果最佳。    

13.  纤维植物罗布麻发根的诱导及植株再生  被引次数:1
   贾海燕  赵兵  王晓东  王玉春《生物工程学报》,2008年第24卷第10期
   利用3种发根农杆菌(LBA9402.R601,和R1000)转化纤维植物罗布麻无菌种子苗的根茎叶不同外植体部位,首次诱导其生成发根并实现了直接由发根途径的植株再生.罗布麻发根诱导与所用的发根农杆菌菌株,外植体部位及光周期密切相关.发根农杆菌LBA9402感染罗布麻的根外植体,实现了最高转化率达100%.与LBA9402及R601相比,被发根农杆菌R1000感染的根外植体适合在黑暗环境下培养.其诱导生成的发根密度可达平均每个外植体22条.在不加激素的1/2 MS培养基上,LBA9402和R601诱导产生的发根可以诱导生成不定芽,不定芽诱导率达20%.不定芽切下后,在不加激素的1/2 MS培养基上2周内可以诱导生根.通过聚合酶链式反应(PCR)对发根及再生植株进行了鉴定,证明发根农杆菌的T-DNA插入了植物的基因组.为罗布麻的分子育种建立了稳定的转化及再生体系,为下一步通过转入外源基因改善其农艺性状奠定了基础.    

14.  不同理化因子对黄芩毛状根诱导的影响  被引次数:1
   张东向  王蕊  张磊《生物技术》,2008年第18卷第1期
   目的:利用发根农杆菌1.2556诱导黄芩,得到毛状根.方法:采用共培养法诱导黄芩毛状根,研究不同外植体,不同预培养时间,不同菌液浓度,不同感染时间,乙酰丁香酮,抗生素浓度等条件对转化率的影响.结果:利用预培养2d后的茎段为转化材料,当发根农杆菌浓度在OD600值为0.5时感染10min,转化率最高.在菌液中或培养基中添加100umol/L,乙酰丁香酮可以提高黄芩毛状根的转化效率.培养基中加入250mg/L抗生素Cef能较好地抑制发根农杆菌生长.结论:用共培养法诱导出黄芩毛状根,并确定了最佳诱导条件,以提高黄芩外植体的诱导率.    

15.  胡萝卜组织培养和高效遗传转化体系的建立  被引次数:7
   张娅  曾君祉  周志勇  陈毓荃  黄华樑《植物学通报》,2005年第Z1期
   为了建立高效的胡萝卜遗传转化体系,本实验选用3个胡萝卜(Daucuscarotavar.sativa)栽培品种:‘金笋五寸’、‘Carol’和‘改良黑田七寸’,以它们的下胚轴和子叶为外植体,首先建立了高频愈伤诱导体系。在此基础上,以Carol的下胚轴和愈伤组织为受体材料,利用根癌农杆菌LBA4404介导转化质粒pBI121。经X-Gluc染色,证明GUS基因瞬间表达成功,经PCR方法鉴定,证明GUS基因已整合到胡萝卜的染色体中,从而建立了高效的胡萝卜遗传转化体系。    

16.  影响花椰菜农杆菌介导转化因素的研究  被引次数:1
   于娅  刘莉莎  赵永钦  赵冰  郭仰东《植物遗传资源学报》,2010年第11卷第3期
   以花椰菜赛雪的带柄子叶为外植体,以MS为基本培养基,GUS基因为报告基因,分析了遗传转化过程中的影响因子,如预培养时间、农杆菌菌液浓度、侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度、延迟筛选时间等对外植体瞬间表达和稳定表达的影响。结果显示,以花椰菜的带柄子叶为外植体,预培养2d,农杆菌菌液为OD6000.3~0.4,侵染8min,共培养2d,乙酰丁香酮浓度为100μmol/L,延迟筛选7d,卡那霉素筛选压为5mg/L为最优的遗传转化方案,转化率最高可达35.7%。另外,GUS瞬间表达率和转化率并不存在绝对的相关性,但瞬间表达分析仍然可以作为外源基因进入受体细胞的指示。花椰菜农杆菌介导转化方案的优化研究为芸薹属蔬菜高效遗传转化提供了技术保障,有利于芸薹属蔬菜遗传育种与种质创新研究。    

17.  影响农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化的因素  被引次数:1
   刘圣君  黄健秋  卫志明《分子细胞生物学报》,2007年第40卷第5期
   利用携带pCAMBIA1301质粒(含hpt和gus基因)的超毒根癌农杆菌菌株EHA105对大豆子叶节外植体进行遗传转化,研究了影响农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化的因素。研究结果表明.农杆菌侵染液和共培养培养基中添加200μmok/L乙酰丁香酮和50mg/L抗坏血酸可以有效促进农杆菌对大豆子叶节的转化。农杆菌与子叶节共培养后羧苄青霉素(250mr/L)和头孢霉素(100mg/L)结合使用能有效抑制农杆菌过度繁殖并提高转化芽诱导频率;在转化细胞的分化和转化芽伸长过程中,改进的筛选策略可以明显改善对转化芽的筛选效果,从而提高转化频率。应用优化后的转化体系.获得了3个国内大豆主栽品种的转基因植株,PCR阳性植株频率为3.8%~7.6%。转化植株叶片总DNA的PCR和Southern blot实验表明,T-DNA上的外源基因已经整合到大豆基因组中。    

18.  苦豆子碱和烟碱的联合杀蚜作用  
   霍鑫  穆荣娟  何军  周一万  马志卿  张兴《昆虫学报》,2014年第57卷第5期
   【目的】以豆蚜Aphis craccivora Koch为试虫,对苦豆子碱和烟碱的联合杀蚜活性进行了测定,以期为开发新型植物源杀蚜剂奠定基础。【方法】单体化合物对豆蚜的毒力测定采用微量点滴法;制剂对豆蚜的毒力测定采用波特喷雾法;田间药效试验参照国家标准进行,其中施药方法采用常量喷雾法;制剂加工及化合物之间的联合杀蚜作用测定均采用常规方法。【结果】苦豆子碱和烟碱混用具有明显的杀蚜增效作用,在最佳质量配比(苦豆子碱∶烟碱=13∶1)下,共毒系数(common-toxicity coefficient,CTC)值达185.82。结合对溶剂、乳化剂等助剂的筛选,研制出15.7%苦豆子碱·烟碱环保型乳油,配方为:苦豆子碱(14.6%)、烟碱(1.1%)、环保溶剂(74.3%)、乳化剂(10%)。质量检测结果表明该制剂各项指标均达到商品农药的要求。大田药效试验表明,该制剂在质量浓度为0.354 g/L时,常量喷雾,药后7 d对月季长管蚜Macrosiphum rosirvorum的防效仍为85.91%。【结论】苦豆子碱和烟碱混用具有显著的杀蚜相互增效作用,具有进一步开发潜力。    

19.  (S)-(-)-β-羟基苯丙酸乙酯的微生物法合成  
   欧志敏  陈晓彦  杨根生  应国清《工业微生物》,2009年第39卷第6期
   采用酿酒酵母CGMCC No.2266菌体,不对称还原β-羰基苯丙酸乙酯制备光学纯(S)-(-)-β-羟基苯丙酸乙酯。结果表明:采用初始pH为8.0的液体发酵培养基培养的CGMCCNo.2266菌体经过50℃预热处理30min后用于生物转化获得的(S)-(-)-G-羟基苯丙酸乙酯对映体过剩值可以达到100%ee。确定了合成(S)-(-)-β-羟基苯丙酸乙酯的较佳转化条件为pH7.0,温度30℃,转化时间24h,底物浓度为3.63mmol/L,菌体用量为86g/L(干重/反应体积)。以10%葡萄糖为辅助底物,产率比不加辅助底物时提高了75.4%。在最佳转化条件下反应转化率及(S)-(-)-β-羟基苯丙酸乙酯对映体过剩值可分别达到98.4%和100%ee。    

20.  发根农杆菌诱导甘薯发根条件的优化  被引次数:1
   吴飞  阮龙  王钰《生物学杂志》,2008年第25卷第2期
   通过诱导甘薯(徐薯18)发根的条件进行优化,分别时侵染时间(10min、20min和30min)、培养基[MS、MSJ(MS BA0.1mg/L NAA0.2mg/L)和MSS(MS BA0.2mg/L NAA0.1mg/L)]、诱导材料(叶片、叶柄和茎切段)和除菌药物剂量(羧苄青霉素浓度0.5mg/L、1.0mg/L和1.5mg/L)进行优化.试验按L9(34)正交设计,每个处理3次重复.然后通过PCR检测徐薯18和其发根中的rol基因.结果表明用发根农杆菌A4经20min侵染,通过MSJ活化的徐薯18的茎切段生成发根的发根诱导率最高,最佳的除菌羧苄青霉素浓度为1.0mg/L.PCR检测证明得到的发根是发根农杆菌诱导产生的.在此优化条件下诱导的发根诱导率高,得到发根的可靠性强,且生成的发根粗壮、生长迅速、分支众多.    

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