常用实验用近交系小鼠粒体ＤＮＡ遗传变异的分析

应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术,研究了分析了国内常用的实验用近交系小鼠线粒体ＤＮＡ（mtＤＮＡ）的品种间遗传变异。ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析发现,小鼠mtＤＮＡ的Ｄ－loop、tRNA^Met Glu Ile及ＮＤ３基因核酸序列,在４６个限制性内切酶酶切位点上均无差异;用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析方法对这些小鼠mtＤＮＡ的高变异区Ｄ－Loop的５′及3′端作进一步分析,亦未发现品种间遗传变异。结合mtＤＮＡ具有的母系遗传方式的特点,这一结果提示：常用的实验用近交系小鼠形成中可能只有１种雌性血统起了作用。     

肌肉注射质粒DNA对蟾蜍骨骼肌单收缩力及强直收缩力的影响

ＤＮＡ结合蛋白不仅存在于细胞核内 ,ｈａｇｓｔｒｏｍ及本实验室分别在家兔及大鼠发现骨骼肌肌质网 (ＳＲ)膜上也存在ＤＮＡ结合蛋白质 ,质粒ＤＮＡ与ＳＲ上ＤＮＡ结合蛋白结合之后 ,明显影响ＳＲ功能 ,促进ＳＲＣａ2 转运 ,即Ｃａ2 摄入及释放均增加。骨骼肌ＳＲ主要参与肌肉兴奋收缩耦联及维持肌细胞胞浆钙离子稳态 ,外源质粒ＤＮＡ进入骨骼肌细胞后是否可以通过ＳＲ上ＤＮＡ结合蛋白改变ＳＲ功能 ,并进一步影响肌肉收缩活动尚不清楚。本实验应用蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本 ,观察肌肉注射质粒ＤＮＡ对肌肉收缩功能的影响。1　材料与方法…     

斜茎黄芪根瘤菌的16S rDNA和23S rDNA PCR-RFLP比较分析

在表型性状数值分析和ＡＦＬＰ指纹图谱分析的基础上,选取５４株斜茎黄芪根瘤菌的代表菌株及已知根瘤菌参比菌株,进行１６ＳｒＤＮＡ和２３ＳｒＤＮＡ的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ比较分析。结果表明斜茎黄芪根瘤菌具有极大的系统发育多样性,分别具有２４个１６ＳｒＤＮＡ遗传图谱类型和２２个２３ＳｒＤＮＡ遗传图谱类型,１６ＳｒＤＮＡ与２３ＳｒＤＮＡＰＣＲ－ＲＦＬＰ聚类分析树状图谱有较好的一致性,但也存在一些差异。在对较大类群的划分上,它们的结果与表型性状数值分析结果有较好的一致性。将１６ＳｒＤＮＡ和２３ＳｒＤＮＡＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析     

细菌DNA抗肿瘤免疫的实验研究

应用纯化提取的３种细菌染色体ＤＮＡ进行体内抗肿瘤免疫实验。结果表明,大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和长双岐杆菌ＤＮＡ由于含有大量的非甲基化的ＣｐＧ二核苷酸为核心的序列（称为ＣｐＧ ｍｏｔｉｆ）,均能诱导ＮＫ细胞和单核细胞的激活,从而起到抗肿瘤免疫的作用。为微生物ＤＮＡ制剂作为生物反应修饰剂（ＢＲＭ）应用于抗肿瘤免疫提供了科学依据。     

RAPD技术及其在微生物学方面的应用

198 0年 ,Ｂｏｔｓｅｉｎ提出ＤＮＡ限制性片段长度多态性 (ＲＦＬＰ)可以作为遗传标记 ,从此开创了直接应用ＤＮＡ多态的新阶段。 80年代后 ,ＤＮＡ多聚酶链式反应 (ＰＣＲ)的发展 ,使直接扩增ＤＮＡ的多态性成为可能 ,并在此基础上产生了许多种新型分子标记 ,诸如扩增片段多态性 (ＡＬＦＲ)、串联重复序列(ＶＮＴＲ)、单链构型多态性 (ＰＣＲ ＳＳＣＰ)、序列特异扩增区域 (ＳＣＡＲ)、随机扩增多态性ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)等。而ＲＡＰＤ是较为突出的一种。ＲＡＰＤ是由Ｗｉｌｌｉａｍｓ和Ｗｅｌｓｈ在 1 990年各自独立发现的一种ＤＮＡ多态检…     

斜茎黄芪根瘤菌的16SrDNA和23SrDNAPCR—RFLP比较分析

在表型性状数值分析和ＡＦＬＰ指纹图谱分析的基础上,选取５４株斜茎黄芪根瘤菌的代表菌株及已知根瘤菌参比菌株,进行１６ＳｒＤＮＡ和２３ＳｒＤＮＡ的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ比较分析。结果表明斜茎黄芪根瘤菌具有极大的系统发育多样性,分别具有２４个１６ＳｒＤＮＡ遗传图谱类型和２２个２３ＳｒＤＮＡ遗传图谱类型,１６ＳｒＤＮＡ与２３ＳｒＤＮＡＰＣＲ－ＲＦＬＰ聚类分析树状图谱有较好的一致性,但也存在一些差异。在对较大类群的划分上,它们的结果与表型性状数值分析结果有较好的一致性。将１６ＳｒＤＮＡ和２３ＳｒＤＮＡＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析数据合并在一起进行分析时,得出２６个综合遗传图谱类型和１个综合聚类分析树状图谱。很明显,１６ＳｒＤＮＡ与２３ＳｒＤＮＡ的合并,能够得出更可靠的系统发育结论。     

扩增大段靶DNA的PCR方法

扩增大段靶ＤＮＡ的ＰＣＲ方法陈尚武,王章（中山大学生命科学学院,广州）ＰＣＲ和分子克隆是扩增遗传物质的常用技术。热稳定Ｔａｑ（Ｔｈｅｒｍｕｓａｑｕａｔｉｃｕｓ）ＤＮＡ聚合酶的应用以及ＰＣＲ技术所固有的迅速、简便、廉价等优点,使ＤＮＡ片段的ＰＣＲ扩增成...     

植物分子分类与鉴定综述

以高等植物为对象,首先从ｎＤＮＡ、ｃｐＤＮＡ、ｍｔＤＮＡ三方面对植物分子分类与鉴定的分子基础进行综述,然后阐述ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ、ＡＦＬＰ及ＳＳＲ等分子分类方法的特点及应用。     

RAPD影响因素的研究及实验条件的优化进

针对叶种红松和阔叶树种蒙古栎为材料,研究了随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）的影响因素,优化了各种实验条件。ＲＡＰＤ对模板浓度的适应范围比较广,从１０－８０ｎｇ／反应均可得到一致的效果。     

随机扩增多态DNA影响因素的研究

随机拉多态ＤＮＡ分析受诸多因素的影响,我们发现不同厂家制造的ＰＣＲ扩增仪,不同厂家出品的ＴａｑＤＮＡ聚合酶和ＰＣＲ缓冲液,ＲＡＰＤ反应体系中的引物浓度,Ｍｇ＾２＋浓度,ｄＮＴＰ浓度,ＢＳＡ和明胶,以及模板ＤＮＡ的量等均可能对ＲＡＰＤ结果有不同程度的影响。     

土壤可培养细菌DNA的提取及RAPD条件的优化

以改进的CTAB-溶菌酶-蛋白酶K裂解法抽提土壤可培养细菌总DNA,直接进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析。分别测试了不同浓度镁离子、dNTP、模板DNA、引物、DNA聚合酶及牛血清白蛋白对反应结果的影响,通过各因子的组合研究,确定了土壤可培养细菌遗传多样性分析的稳定的RAPD反应体系。     

不同固定剂保存动物组织标本对RAPD反应的影响

为解决野外采集动物标本时,有效地保存好标本,并方便地带回实验室用于ＲＡＰＤ分析的难题。该研究以同一个体的冻存组织为对照,比较了从４种不同固定剂保存的组织标本中提取ＤＮＡ,并用于ＲＡＰＤ扩增。     

皮下盘菌属及其近似类群RAPD-PCR反应条件的优化

以悬钩子皮下盘菌等总基因组DNA为皮下盘菌属(Hypodermade Not.)及其近似类群RAPD体系优化的模板,对模板DNA浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度等反应体系以及退火温度和时间、延伸时间、循环次数等扩增程序条件进行优化,寻找出适合此类菌物RAPD-PCR反应的最佳反应体系和最佳扩增程序。     

濒危植物七子花RAPD条件的优化

以改进SDS法抽提濒危植物七子花嫩叶总DNA,进行随机扩增多态DNA（RAPD）分析,分别测试了镁离子, dNTP,模板DNA含量,引物和DNA聚合酶量对反应结果的影响,通过各因子的组合研究,可知七子花RAPD分析较适宜的扩增条件是：15 μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液（10 mmol/L Tris·HCl pH 9.0, 50 mmol/L KCl, 0.1% Triton X_100）,2.5 mmol/L MgCl2,2U Taq酶（上海华美公司）,10 ng模板DNA,20 pmol引物（上海Sangon公司）;dATP、dCTP 、dGTP 、dTTP 各0.1 mmol/L。     

桔梗RAPD反应体系的优化

以通化桔梗为材料,用改进的CTAB法提取桔梗叶片的总DNA,通过对不同镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA含量、引物浓度、DNA聚合酶量条件下的RAPD扩增反应的效果,建立了一个适合桔梗的比较稳定的RAPD反应体系,用于桔梗遗传多样性分析。结果表明,桔梗RAPD扩增反应的最佳体系为:模板DNA20ng,dNTP150μmol/L,引物0.3μmol/L,Mg2+浓度2.0mmol/L,TaqDNA聚合酶1Unit,10×Buff-er2.0μL,PCR反应总体积为20μL。按此优化RAPD条件进行实验,重现性良好。     

Genetic Mapping of Soybean [Glycine max (L.) Merr.] Using Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD)

Random amplified polymorphic DNA (RAPD) is based on DNA amplification by polymerase chain reaction (PCR) of random DNA segments using single arbitrary nucleotide sequences. We have adapted the assay to soybeans by using Stoffel Fragment DNA polymerase and by optimizing the reaction conditions. To increase the percentage of RAPD polymorphisms, the DNA template was digested with restriction enzymes before amplification. The combination of twenty-four primers and five DNA template treatments (Undigested, DraI, EcoRI, HindIII, and TaqI digested) revealed 94 polymorphic DNA fragments differing between soybean lines PI437654 and BSR101. Many polymorphic DNA bands were found unreliable or non-scoreable after re-screening of primers and verification of marker-allele segregation with 20 recombinant inbred lines (RILs). However, 28 RAPD markers were consistently polymorphic between the parental lines and followed Mendelian expectations. The use of DNA templates digested with DraI, EcoRI, HindIII or TaqI increased three times the number of RAPD markers compared to undigested DNA template alone. The 28 RAPD markers obtained were further screened with 72 RILs and placed on an existing RFLP map.     

Effect of DNA preparation from laver (Porphyra yezoensis) thalli on reproducibility of RAPD (random amplified polymorphic DNA) patterns

Laver (Porphyra yezoensis) DNAs were extracted from thalli with five different procedures and used for RAPD (random amplified polymorphic DNA) analysis as templates. Restriction enzyme-digestive DNAs were obtained with all procedures examined. However, RAPD patterns generated with these DNAs appeared highly irreproducible and were considerably different from each other. When DNAs purified with CsCl gradient centrifugation were used for RAPD analysis as templates, highly reproducible RAPD patterns were obtained, suggesting that unpurified DNAs extracted from thalli with all five extraction procedures contained an excess of RNA, polysaccharides and/or other materials which affected the RAPD reproducibility. Thus, results indicated that purification of DNA is essential to produce reproducible RAPD patterns of Porphyra DNA. This revised version was published online in June 2006 with corrections to the Cover Date.     

大豆灰斑病菌生理小种的RAPD标记*

运用随机扩增多态性DNA（RandomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD）技术对发生于中国东北的大豆发斑病菌（Cercosporidiumsojinum）的10个生理小种进行基因组DNA多态性分析。用13个10-核苷酸随机引物共计获得了111个RAPD标记,其中86.5％具有多态性,通过聚类分析确定了供试小种间的亲缘关系。试验证明,RAPD技术分析大豆灰斑病菌遗传变异可提供大量分子标记,综合分析13个随机引物的扩增谱带可将供试菌株清楚分开。RAPD技术是一项操作简单、快速和灵敏的方法,极具对病菌群体遗传分析的潜力。     

大豆灰斑病菌生理小种的RAPD标记

运用随机扩增多态性DNA（RandomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD）技术对发生于中国东北的大豆发斑病菌（Cercosporidiumsojinum）的10个生理小种进行基因组DNA多态性分析。用13个10-核苷酸随机引物共计获得了111个RAPD标记,其中86.5％具有多态性,通过聚类分析确定了供试小种间的亲缘关系。试验证明,RAPD技术分析大豆灰斑病菌遗传变异可提供大量分子标记,综合分析13个随机引物的扩增谱带可将供试菌株清楚分开。RAPD技术是一项操作简单、快速和灵敏的方法,极具对病菌群体遗传分析的潜力。     

0#柴油对斑马鱼基因组DNA和环境DNA遗传毒性的RAPD比较

研究利用随机扩增多态性DNA (Random Amplified Polymorphic DNA, RAPD)技术, 以斑马鱼基因组DNA和其养殖水体中的环境DNA (environmental DNA, eDNA)为模板, 检测0#柴油可溶性组分对斑马鱼(Danio rerio)遗传毒性的影响。结果显示, 通过基因组DNA和eDNA扩增的RAPD图谱均可检测到0#柴油对斑马鱼的遗传毒性。在未受到柴油暴露时, 斑马鱼基因组DNA和水环境中eDNA在96h内的RAPD图谱均无明显变化; 在不同浓度的柴油暴露下, 随着暴露时间(0、24h、48h、72h、96h)延长, 基因组DNA和eDNA的多态性位点减少, 模板稳定性降低; 随着柴油浓度(15%、50%、100%)的增加, 基因组DNA和eDNA的多态性位点也减少, 模板稳定性降低。这表明0#柴油对斑马鱼基因组DNA和eDNA的遗传毒性均呈现时间-效应和浓度-效应关系, 并且无论以斑马鱼基因组DNA还是eDNA为模板, 柴油暴露组和未进行暴露的对照组的RAPD扩增图谱条带变化趋势一致。研究结果为通过RAPD技术检测柴油对水生生物的遗传毒性提供了新的研究思路和技术手段。