麦角固醇高产菌株的构建及其培养优化条件的研究

通过初筛、单倍体分离、诱变及酵母菌种间原生质体融合技术构建了2株麦角固醇产量明显提高的优良菌株YEF-21和YEF-29。并对YEF-21的培养优化条件进行了研究。结果表明在优化的实验条件下YEF-21的生物量及麦角固醇含量的综合值分别为原始亲株YE227和YE180的1.54和1.55倍。经遗传稳定性分析,没有发现标记基因的分离现象,从而证明获得的融合菌株是遗传稳定的,是具有一定实际应用价值的麦角固醇高产菌株。     

优良酿酒酵母（面包酵母）三倍体菌株的选育

通过初筛、单倍体分离、诱变、原生质体融合及杂交等育种技术选育出一株具有高生物量、耐高糖、强絮凝性能的优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株 zLFH-121,其生物量分别为原始亲株 BL68、BL92、L77 的 1.22、1.33 与 1.83 倍;絮凝性能明显优于原始亲株 BL68、BL92。并对其培养条件进行了优化研究,结果表明三倍体菌株 zLFH-121能够很好地利用糖蜜培养基,并表现出良好的絮凝能力。在优化的培养条件下,生物量提高至 93．82g／L (湿重),为初始培养条件下的 1.30倍。经遗传稳定性分析,证明三倍体菌株 zLFH-121 遗传稳定,是一株具有潜在应用价值的优良酿酒酵母(面包酵母)菌株。     

絮凝性强的优良面包酵母菌株的选育

通过初筛、单倍体分离、DES诱变、絮凝基因的克隆表达及杂交等育种技术成功构建了高生物量、耐高糖、强絮凝的优良面包酵母菌株(Saccharomyces cerevisiae) ZLTH58(MATa/α,leu,FLO1)。菌株ZLTH58具有双亲的优良性状,遗传性状稳定。对其生物量、耐高糖能力、絮凝特性进行了检测,结果表明,菌株ZLTH58的生物量是原始亲株BL56的1.21倍;耐高糖能力优于原始亲株BL61;絮凝性能明显优于原始亲株BL56和BL61。对其培养条件进行了优化,在优化的培养条件下,生物量可以达到83.06g/L,为初始培养条件下的1.35倍。     

优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株的选育*

通过初筛、单倍体分离、诱变、原生质体融合及杂交等育种技术选育出一株具有高生物量、耐高糖、强絮凝性能的优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株ZLFH-121,其生物量分别为原始亲株BL68、BL92、L77的1.22、1.33与1.83倍;絮凝性能明显优于原始亲株BL68、BL92。并对其培养条件进行了优化研究,结果表明三倍体菌株ZLFH-121能够很好地利用糖蜜培养基,并表现出良好的絮凝能力。在优化的培养条件下,生物量提高至93.82g/L(湿重),为初始培养条件下的1.30倍。经遗传稳定性分析,证明三倍体菌株ZLFH–121遗传稳定,是一株具有潜在应用价值的优良酿酒酵母(面包酵母)菌株。     

优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株的选育

通过初筛、单倍体分离、诱变、原生质体融合及杂交等育种技术选育出一株具有高生物量、耐高糖、强絮凝性能的优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株ZLFH-121,其生物量分别为原始亲株BL68、BL92、L77的1.22、1.33与1.83倍;絮凝性能明显优于原始亲株BL68、BL92.并对其培养条件进行了优化研究,结果表明三倍体菌株ZLFH-121能够很好地利用糖蜜培养基,并表现出良好的絮凝能力.在优化的培养条件下,生物量提高至93.82g/L(湿重),为初始培养条件下的1.30倍.经遗传稳定性分析,证明三倍体菌株ZLFH-121遗传稳定,是一株具有潜在应用价值的优良酿酒酵母(面包酵母)菌株.     

高产谷胱甘肽的酵母菌选育及其培养条件研究

筛选到一株具有较高GSH产量的酵母菌株S.cerevisiae2165,然后以该菌株为出发菌,采用紫外照射,紫外照射 LiCl联合处理,亚硝基胍（MNNG）等诱变处理,获得一株高产GSH的酿酒酵母优良菌株S.cerevisiaeJN-5-8。该菌株具有稳定的遗传性能,在经过优化的培养条件下培养24h,其GSH产量达到339.1mg/L。比出发菌株提高2.2倍。     

氯化锂诱变选育3-羟基丙酸高产菌株

本文以实验室筛选得到的翰逊德巴利酵母菌(Debaryomyces hansenii)DH01为出发菌株,利用氯化锂诱变选育3-羟基丙酸(3HP)产量高并且可以用于实际生产的突变株。经过两轮氯化锂诱变,筛选得到一株产酸量较高的菌株wt06。在培养温度为28℃,120 r/min的条件下,经过48 h培养后,该菌株3HP的产量最高达到23.70 g/L,是原始菌株产量的5.44倍,且该菌株具有良好的遗传稳定性。     

高产谷胱甘肽新菌种的选育及其发酵条件的研究

通过对谷胱甘肽新产生菌——藤黄八叠球菌进行紫外诱变处理,筛选到一株抗乙硫氨酸和氯化锌的抗性菌株,该突变株发酵生产谷胱甘肽的产量比出发菌株提高268．9％。通过对碳源、氮源、温度、初始pH等发酵条件对该菌株生物合成谷胱甘肽的影响研究,表明突变株HY78在发酵温度37℃、初始pH7.0、摇床转速180r／min条件下,摇瓶发酵26h,该高产菌株在发酵液中合成谷胱甘肽的产量可达160．628mg／L。     

清酒酵母与酿酒醇母原生质体融合的研究

清酒酵母（ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｓａｋｅＹａｂｅ）是日本清酒的生产菌株．耐酒精能力强;Ｋ氏酿酒酵母（ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＫ）是酒精生产的常用菌株,发酵力强。本文应用原生质体融合技术进行了二菌株原生质体融合的研究。通过硫酸二乙酯（ＤＥＳ）诱变得到营养缺隐型菌株Ｑ（ａｒｇ－）和Ｋ（ｌｙｓ－,ρ－）,其融合率为１．２５×１０－５。检出的融合子其酒精发酵特性、细胞形态、体积大小都不同于双亲菌株。比较了在２８℃培养条件下,出发余株清酒酵母,Ｋ氏酿酒酵母和融合子Ｆ１、Ｆ２的发酵速度曲线、乙醇产量和酒精耐量等,得到一株在２８℃培养条件下,乙醇产量为７．４％（Ｖ／Ｖ）,酒精耐量为１５％的融合株Ｆ１。     

利用基因组改组技术提高短杆菌素产量及其培养条件优化*

短杆菌素是一种广谱抗菌肽,对细菌和真菌均有较好的抑制作用,具有潜在的抗生素替代价值。通过对侧孢短芽孢杆菌fmb70进行紫外诱变、亚硝基胍诱变、常压室温等离子体诱变,获得3株短杆菌素产量提高的诱变菌株。随后以诱变菌株为亲本进行两轮基因组改组,获得融合子F₂-24,其短杆菌素产量为(340.5±16.35) μg/mL,是野生菌株fmb70短杆菌素产量的1.92倍。融合子传代5代后,该菌株短杆菌素产量无明显差异,说明菌株稳定性良好。最后对该菌株产短杆菌素的培养基和发酵条件进行优化,优化后的培养基为:4%蔗糖、2%牛肉膏、0.5%氯化镁,发酵温度30℃、培养24 h、培养基初始pH6.0。优化后的短杆菌素产量可达(442.45±9.58)μg/mL,是初始培养条件的2.50倍。     

基因组重排与传统育种相结合选育大观霉素高产菌株

以壮观链霉菌(Streptomyces spectabilis)为研究对象,采用基因组重排技术与传统诱变育种相结合的方法选育大观霉素的高产菌株.通过原生质体紫外诱变获得壮观链霉菌突变体群体,高产突变菌株间进行两轮的基因组重排,筛选的高产菌株用NTG诱变得新霉素和链霉素的抗性突变菌株,抗性突变菌株间进行两轮基因组重排,从...     

克鲁维酵母种间原生质体融合的研究

乳酸克鲁维酵母(Kluyueromyces lactis Y12—1)和脆壁克鲁维酵母(K.fragilis8554)是乳糖酶生产菌株。应用原生质体融合技术进行了两菌株种问融合的研究。通过试验．原生质体形成及再生的最佳条件为：对数期的细胞,2％的蜗牛酶．30℃酶解30分钟．原生质体形成率90％以上,再生率20%左右。原生质体融合由聚乙二醇(PEG)诱导。K.lactisY12-l不能旋酵菊糖;K.fragilis 8554不能同化D－松三糖和麦芽糖;利用二菌株自身的营养缺陷性质获得融合子。融合子既能发酵菊糖又能同化D－松三糖和麦芽糖;融合子的DNA含量约为二亲株之和;融合子的菌落形态与亲株相比有一定差别．在以乳糖为碳源的培养基中,融合子的乳糖酶产量提高14一l6％;连续15次传代,融合子稳定。     

原生质体激光诱变选育少根根霉脂肪酶高产菌株

对少根根霉BUCT-11原生质体制备、再生条件及激光诱变育种进行了研究.结果显示,少根根霉BUCT-11原生质体形成及再生最佳条件为:菌龄24 h,混合酶由27 mg/mL的蜗牛酶和53 mg/mL的纤维素酶组成,酶解时间1.5 h,酶解温度30 ℃,渗透压稳定剂为0.6 mol/L NH4Cl、0.02 mol/L ...     

Strain improvement of thermotolerant Saccharomyces cerevisiae VS strain for better utilization of lignocellulosic substrates

AIM: Pentose-utilizing yeast development by protoplast fusion and sequential mutations and ethanol fermentation using lignocellulosic substrate. METHODS AND RESULTS: Protoplasts of thermotolerant Saccharomyces cerevisiae and mesophilic, xylose-utilizing Candida shehatae were fused by electrofusion. The fusants were selected based on their growth at 42 degrees C and ability to utilize xylose. The selected best fusant was mutated sequentially and 3 mutant fusants obtained were tested for their stability. The mutant fusant CP11 was found to be stable and used for lignocellulosic fermentation. The Prosopis juliflora wood material was hydrolysed with 1% sulphuric acid initially for 18 h at room temperature and then for 20 min at 121 degrees C. The acid hydrolysate was separated and used for detoxification by ethyl acetate and overliming. The hard cellulosic fraction was hydrolysed with Aspergillus niger crude cellulase enzyme for 18 h at 50 degrees C. The substrate (15% w/v) yielded 84 g l(-1) sugars, representing 80% (w/w) hydrolysis of carbohydrate content present in the lignocellulosic material. The acid and enzyme hydrolysates were then equally mixed and used for fermentation with the developed fusant yeast (CP11). The fusant yeast gave an ethanol yield of 0.459 +/- 0.012 g g(-1), productivity of 0.67 +/- 0.015 g l(-1) h(-1) and fermentation efficiency of 90%. CONCLUSIONS: Protoplast fusion followed by sequential mutations method gave a stable and good performing fusant with maximum utilization of reducing sugars in the media. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: This new method could be applied to develop fusants for better biotechnological applications.     

酵母菌属间原生质体融合构建高温酵母菌株

酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) A001和克鲁维酵母(Kluyveromyces sp.) Y034属间原生质体融合构建高温酵母菌株。对制备高再生活性原生质体及融合子细胞形态、生理化特征、同工酶性质、遗传稳定性和高温发酵等方面进行了研究。结果表明,融合子AY023和AY680遗传性能稳定,表达了双亲优良性状,获得了在45℃培养条件下产酒率7.4%的属间融合菌株,是目前已见文献报道的产酒率最高的高温(45℃)酵母菌株。     

A glutathione reductase mutant of yeast accumulates high levels of oxidized glutathione and requires thioredoxin for growth.

A glutathione reductase null mutant of Saccharomyces cerevisiae was isolated in a synthetic lethal genetic screen for mutations which confer a requirement for thioredoxin. Yeast mutants that lack glutathione reductase (glr1 delta) accumulate high levels of oxidized glutathione and have a twofold increase in total glutathione. The disulfide form of glutathione increases 200-fold and represents 63% of the total glutathione in a glr1 delta mutant compared with only 6% in wild type. High levels of oxidized glutathione are also observed in a trx1 delta, trx2 delta double mutant (22% of total), in a glr1 delta, trx1 delta double mutant (71% of total), and in a glr1 delta, trx2 delta double mutant (69% of total). Despite the exceptionally high ratio of oxidized/reduced glutathione, the glr1 delta mutant grows with a normal cell cycle. However, either one of the two thioredoxins is essential for growth. Cells lacking both thioredoxins and glutathione reductase are not viable under aerobic conditions and grow poorly anaerobically. In addition, the glr1 delta mutant shows increased sensitivity to the thiol oxidant diamide. The sensitivity to diamide was suppressed by deletion of the TRX2 gene. The genetic analysis of thioredoxin and glutathione reductase in yeast runs counter to previous studies in Escherichia coli and for the first time links thioredoxin with the redox state of glutathione in vivo.     

克鲁维酵母与酿酒酵母属问原生质体融合构建高温酵母菌株*

通过PEG诱导碘乙酸灭活呼吸缺陷克鲁维酵母（Kluyveromycessp．Y034）原生质体与酿酒酵母（SaccharomycescerevisiaeA001）原生质体融合,获得45℃发酵产酒率高达8．7％的高温酵母菌株AY006。线粒体缺失和氯霉素抑制可显著降低高密度原生质体回复抑制效应。对融合子菌落形态、同工酶性质和高温发酵等方面分析,融合株表达了耐温和高产酒率双亲优良性状,证实其杂种特征。     

农用抗生素TS99高产菌株的选育

在明确链霉素对农抗TS99产生菌Streptomyces fungicidicus YH04孢子的致死浓度为1.2μg/mL的基础上,以链霉素致死浓度为选择压力,采用不同剂量的紫外线照射对菌株孢子进行诱变处理,获得了大量的链霉素抗性基因突变株,进而从中筛选到发酵效价较出发菌株提高60%以上,且遗传稳定性良好的高产菌株Streptomyces fungicidicus YH9407.     

重组人干扰素ω在对数生长期毕赤酵母中的高效表达特性研究

用不同比生长速率μ的毕赤酵母探讨其表达外源重组蛋白的差异性,通过起始pH值、甲醇诱导浓度和周期、菌体浓度、装液量等实验,优化具有较高μ的对数生长期毕赤酵母表达rhIFNω的摇瓶条件。结果表明,μ对毕赤酵母表达rhIFNω有显著影响。μ为0.1612h-1的毕赤酵母表达rhIFNω最高为558mg/L,较μ为0.1321、0.0505和0.0052h-1的毕赤酵母分别提高50%、68%和99%。对数生长期的毕赤酵母表达rhIFNω的最适摇瓶表达条件为:250mL摇瓶装入30mL BMMY,控制菌体浓度达到200~300g/L(WCW),起始pH值自然,每24h添加甲醇15g/L一次,诱导表达周期为4d。通过表达条件的优化,rhIFNω的表达量达到1070mg/L,较优化前提高149%。     

高生物量富硒酵母的选育及培养条件初步优化

通过筛选、单倍体分离、诱变和原生质体融合,从融合子中选育了一株高生物量富硒酵母菌株（编号为ZFF-28）,其细胞硒总含量分别是原始亲株ZY-67和ZY-198的2.8倍和2.0倍。通过单因素实验和正交试验设计,确定了优化培养条件：6%糖浓度的蔗糖糖蜜,添加0.5% (NH4)2SO4、0.1% H3PO4、60μg/mL Se,pH60～6.5,装液量50mL/250mL三角瓶,接种量10%,培养时间25h。在优化培养条件下,菌株ZFF_28的生物量可达8.2g/L,细胞中硒的含量达2050μg/g,硒总含量达到了16810μg/L,是培养条件优化前的1.3倍。细胞硒含量的91%为有机硒。