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真空渗透遗传转化法首先在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中获得成功,是一种简便、快速且无需经过组织培养阶段即可获得大量转化植株的基因转化方法。该研究以不同遗传背景的3个甘蓝型油菜(Brassica napus)品种(系)陕3B、L45和Mg23为材料,对真空渗透遗传转化方法中真空渗透时间和Silwet L-77浓度与遗传转化效果的关系进行了比较,同时对转化种子的筛选方法进行了优化。结果表明,卡那霉素(Km)对油菜种子的萌发影响不显著,但对其生长发育有明显的抑制作用。不同油菜品种对卡那霉素的敏感性不同,各自的致死浓度也不一样。在0%-0.05%的浓度范围内,随着Silwet L-77浓度的增加,在相同的真空渗透时间内,3个油菜品种的转化率逐渐升高。当Silwet L-77浓度为0.05%时,10分钟的真空渗透时间可获得最高转化效率,此时陕3B、L45和Mg23的转化率分别达到1.97%、2.09%和2.30%。 相似文献
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真空渗透法转化油菜及转化种子的筛选 总被引:4,自引:0,他引:4
真空渗透遗传转化法首先在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中获得成功, 是一种简便、快速且无需经过组织培养阶段即可获得大量转化植株的基因转化方法。该研究以不同遗传背景的3个甘蓝型油菜(Brassica napus)品种(系)陕3B、L45和Mg23为材料, 对真空渗透遗传转化方法中真空渗透时间和Silwet L-77浓度与遗传转化效果的关系进行了比较, 同时对转化种子的筛选方法进行了优化。结果表明, 卡那霉素(Km)对油菜种子的萌发影响不显著, 但对其生长发育有明显的抑制作用。不同油菜品种对卡那霉素的敏感性不同, 各自的致死浓度也不一样。在0%-0.05%的浓度范围内, 随着Silwet L-77浓度的增加, 在相同的真空渗透时间内, 3个油菜品种的转化率逐渐升高。当Silwet L-77浓度为0.05%时, 10分钟的真空渗透时间可获得最高转化效率, 此时陕3B、L45和Mg23的转化率分别达到1.97%、2.09%和2.30%。 相似文献
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大麦转化体系的改进及TrxS基因的转化 总被引:4,自引:0,他引:4
以啤酒大麦品种“晋引6号”的幼胚为转化起始材料,用基因枪法将分别携带有目的基因(TrxS)和除草剂基因(筛选基因,Bar)的两个质粒进行了共转化,同时对基因转化的相关技术和植株再生的培养方案进行了优化。结果表明,受体材料宜选用预培养15d的幼胚;在培养前2周添加1mg/L ABA可抑制胚芽萌发而且有助于胚性愈伤组织的形成;1.0mg/L ZT与0.1mg/L IAA激素配比可有效促进愈伤组织的分化。利用优化的培养条件,经在含3~5mg/L筛选剂PPT的培养基上筛选、再生及生根培养。共在178块抗性愈伤组织上获得11株再生植株,再生率达到6.2%,经对T0、T1、T2代PCR、nested PCR和Southern杂交检测表明,TrxS基因已经稳定整合到大麦基因组中且遗传稳定、结构完整。 相似文献
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在保证其他条件一致的情况下.设置质粒浓度梯度并建立阴性对照进行研究来确定大肠杆菌DH50t氯化钙转化法时的最佳质粒浓度,结果表明质粒浓度为10^2ng/μL时的转化效率最高。与其他质粒浓度相比,质粒浓度为10^2ng/μL时的转化效率最高,实验重复性好,成本低廉,操作简便,而且对目的基因的克隆也具有重要意义,因此值得推广使用。 相似文献
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高等植物的遗传转化 总被引:2,自引:0,他引:2
自1944年Avery首次阐明肺炎双球菌的遗传转
化机理后,人们一直在探索适合高等植物的转化途径,
但早期用DNA直接处理种子或细胞均未取得成功。,。
197;年,Van LarebekeEs',等在根癌农杆菌中发现一
种与双子叶植物肿瘤诱导有关的质粒,即Ti质粒‘
1977年ChiltonL",等用限制性内切酶谱法证明,在植
物的冠廖瘤组织中存在农杆菌Ti质粒的一个片段,称
为转移DNA (T-DNA), T-DNA在植物基因组中的
整合和表达导致肿瘤的发生。此后以Ti'质粒为基础
的植物遗传转化研究获得迅速发展,在理论和应用方
面均取得很大成就“,‘。本文主姿对植物转化的机理
和方法进行综述。 相似文献
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本研究使用电击法成功地将带有标记基因NPTⅡ的质粒pCaMVNEO转入欧白英的原生质体,并获得了再生转化植株。通过用pDW2质粒进行的CAT基因短暂表达研究,确定了欧白英原生质体转化的电击条件为:电容30nF、电场强度l 500V/cm、时间衰变常数59.4微秒;质粒DNA浓度为20μg/2×106原生质体。在以上条件下,欧白英原生质体的相对转化率为12.4%,绝对转化率为2.4×10-4在大多数抗性愈伤组织和从抗性愈伤组织再生的植株中检测到新霉素磷酸转移酶活性。分子杂交结果也证明了在转化植株中存在NPTⅡ基因序列,而未转化的对照植株则没有。 相似文献
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《中国细胞生物学学报》2013,(2):251-252
转化医学作为医学研究的一个分支,从其概念的提出到现在十多年间发展迅速,引起了世界各国学者的广泛关注和重视。转化医学的核心是将医学生物学基础研究成果迅速有效地转化为可在临床实践中应用的理论、技术、方法和药物,并在实验室与病房之间架起一条快速通道,实现基础研究与临床研究的双向转化,是沟通基础医学与临床医学的桥梁,也是当前医学研究的热门话题。 相似文献
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