应用FISH技术鉴定一个小冰麦易位系

以生物素（ｂｉｏｔｉｎ１６ｄＵＴＰ）标记的天蓝冰草（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍ（Ｈｏｓｔ）Ｐ．Ｂ．＝Ｅｌｙｔｒｉｇｉａｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ（Ｈｏｓｔ）Ｎｅｖｓｋｉ＝Ｔｈｉｎｏｐｙｒｕｍｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍ（Ｈｏｓｔ）ＢａｒｋｗｏｒｔｈａｎｄＤｅｗｅｙ）染色体组ＤＮＡ为探针,普通小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）“中国春”ＤＮＡ为封闭,用荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术对小冰麦３３号进行检测。结果表明：在一对染色体的端部显现出绿色荧光,这说明小冰麦３３号携带外源基因的冰草染色体片段位于小麦染色体端部,而且易位的染色体片段是较小的。从ＤＮＡ水平直接证明小冰麦３３是一个冰草染色体片段易位到小麦染色体端部的易位系。     

天兰冰草染色体对小冰麦外植体再生能力的影响及基因的染色体定位

本文研究了天兰冰草（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍ２ｎ＝４２）染色体导入小麦后对小冰麦外植体再生能力的影响,从而分析调控再生能力的基因所在天兰冰草染色体的定位。对异源八倍体小冰麦的研究表明,与天兰冰草强再生能力有关的基因主要分布在附加到中２的冰草染色体组上;对７个异附加系小冰麦的研究进一步表明,冰草强再生能力的性状由多基因调控,这些基因主要分布在附加到ＴＡＩ－１１、ＴＡＩ－１２、ＴＡＩ－１３的冰草染色体上。此外,小冰麦杂种Ｆ１的研究表明,在组织培养中同样能够表现出杂种优势。     

组织培养与普通小麦异源易位系选育

以中国春小麦品种中８６０１、澳大利亚栽培小麦品种Ｓｕｎｓｔａｒ、Ｍｉｌｌｅｗａ作母本,与抗大麦黄矮病毒病（ＢａｒｌｅｙＹｅｌｌｏｗＤｗａｒｆＶｉｒｕｓ,简称ＢＹＤＶ）的小麦－中间偃麦草异附加系Ｌ１杂交,取杂种的幼胚和幼穗作离体培养,获得大量再生植株。经酶联免疫吸附分析（ＥＬＩＳＡ）、限制性内切酶长度多态性分析（ＲＦＬＰ）、染色体数目的检查和田间抗性鉴定,在再生植株回交后代中获得了抗ＢＹＤＶ的杂合易位株,经自交和花药培养纯合,选育出Ｄ１０９１、Ｄ１０９４、Ｄ１６５８、ＴＣ５、ＴＣ６、ＴＣ７等一批抗性稳定或基本稳定的普通小麦选系。以白黑麦６Ｒ二体附加系为抗源,与严重感染白粉病的陕７８５９杂交,经幼胚培养在再生植株回交后代中筛选到白粉病免疫的普通小麦杂合易位系。研究结果表明：在小麦远缘杂交中,组织培养可以作为导入外源基因产生易位的手段之一加以利用。     

应用原位杂交及RAPD技术标记抗黄矮病小麦一中间偃麦草染色体异附加系

以生物素（Ｂｉｏｔｉｎ－１６－ｄＵＴＰ）标记中间偃麦草基因组 ＤＮＡ为探针,与抗黄矮病小麦－中间偃麦草染色体异附加系Ｚ６进行原位杂交,鉴定出附加的１对中间偃麦草染色体。对异附加系 Ｚ６和 Ｌ１及它们的小麦亲本进行了 ＲＡＰＤ分析,从 １２０个随机引物中,筛选出 ２个引物可以扩增出附加染色体的特异ＤＮＡ片段,可作为鉴定寻人小麦的中间偃麦草染色质的分子标记。     

用Langdon二体代换系统建立小麦染色体RAPD标记

以一套Ｌａｎｇｄｏｎ硬粒小麦二体代换系及其亲本Ｌａｎｇｄｏｎ、中国春和中国春双端体为材料,研究适于硬粒小麦和普通小麦的理想ＲＡＰＤ分析条件,进行小麦Ａ、Ｂ和Ｄ染色体组各个染色体的ＲＡＰＤ分析。结果表明,ＡｍｐｌｉＴａｑＳｔｏｆｆｅｌｆｒａｇｍｅｎｔ比ＴａｑＤＮＡＰｏｌｙｍｅｒａｓｅ优越。所用１２个随机引物中,７个引物扩增出的１３个特异产物,可确定在硬粒小麦ＬａｎｇｄｏｎＡ、Ｂ染色体组和中国春Ｄ染色体组中的１０个个别染色体上。４个标记进一步定位在相应的４个染色体臂上。结果还表明,用Ｌａｎｇｄｏｎ二体代换系统、中国春双端体为材料,容易得到重复性高、特异性强的ＲＡＰＤ标记。     

用分子原位杂交（GISH）鉴定小麦－簇毛麦双倍体、附加系、代换系和易位系

用生物素标记的簇毛麦（Ｈａｙｎａｌｄｉａｖｉｌｌｏｓａ）染色体组ＤＮＡ（ｔｏｔａｌｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡ）作探针,以普通小麦染色体组ＤＮＡ作遮盖（用量１：２００左右）,进行有丝分裂中期和减数分裂中期Ｉ染色体的分子原位杂交（ＧＩＳＨ）,经抗生物素蛋白－辣根过氧化物酶复合物（ｂｉｏ－ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）和联苯胺四盐酸（ＤＡＢ）检测显色后,小麦－簇毛麦双倍体、附加系、代换系和易位系中的簇毛麦染色体及染色体片段显棕色,与显浅蓝色的小麦染色体可明显区分。用ＧＩＳＨ不仅可以检测导入小麦中的簇毛麦染色质,而且可以清楚地显示出易位染色体断裂点的确切位置。将ＧＩＳＨ用于减数分裂期染色体配对分析,还可以清晰形象地显示出同源和非同源染色体之间的配对和分离情况。     

小麦—大赖草易位系的RFLP分析

利用辐射、花药培养及杀配子基因效应已创制出一系列小麦-大赖草易位系.为在其中找出可能的纯合易位系、明确易位所涉及的相关染色体以及易位断裂点的确切位置,利用了已被定位于小麦7个部分同源群染色体长、短两臂上的67个探针进行了RFLP分析,结果鉴定出3个纯合的易位系:T1BL*7Lr#1S、T4BS*4BL-7Lr#1S和T6AL*7Lr#1S.其中,易位系T1BL*7Lr#1S和T6AL*7Lr#1S中染色体7Lr#1的断裂点位于标记MWG808和标记ABG476.1之间,而1B和6A染色体上的断裂点都在着丝粒附近.易位系T4BS*4BL-7Lr#1S中染色体7L#1的断裂点位于标记BCD349和标记CDO595之间,4B染色体断裂点则位于标记CDO541和标记PSR164之间的长臂上.     

一个1B/1R小麦-黑麦染色体易位的鉴定

本研究对冬小麦品系73(36)9-1的1B/1R易位染色体进行了遗传分析。发现73(36)9-1有一对随体染色体,它的两个亲本矮丰四号及洛夫林10(Lovrin lo)分别有两对和一对随体染色体。观察用矮丰四号回交的F_1,绝大部分花粉母细胞的中期染色体都能正常配对,而用洛夫林10回交的,除了多数产生两个单价体之外,正常配对的情况也能经常看到。同时还发现,73(36)9-1和“中国春”双端体(CSDT)的1BL能很好地配对并形成一个棒状的异形二价体,而它和CSDT 1BS的染色体则主要产生20″+1′+t′的构型,从而证明易位发生在1B染色体的短臂,并且该易位的片段来自黑麦染色体1RL。本文还讨论了该易位发生的可能途径,推断是由于在F_1花粉母细胞中的两个单价体(一个是小麦染色体1B,一个是黑麦染色体1R)同时进行错分裂之后产生的两种端着丝点染色体(1BL和1RL)重新并合形成的,因而冬小麦73(36)9-1可能是一个自发产生的易位系。     

用RAPD和染色体原位杂交检测Elymus rectisetus染色体附加到普通小麦中

报道小麦×Elymusrectisetus属间杂种BC2F236个衍生系,通过染色体原位杂交和RAPD分析,检测Elymusrectisetus染色体及其特异染色体DNA标记。原位杂交结果表明,36个衍生系中大多数系含1对异源Erectisetus染色体,少数系含3条以上Ereclisetus染色体;RAPD结果表明,有13个随机引物（OPBA-08、OPB－14OPEA-09、OPF-05、OPF－09、OPJ-05、OPK-03、OPN-12、OPP-20、OPS－12、OPT-20、OPZ-09、OPZ-11）能够在这36个衍生系中分别扩增出普通小麦所没有的Erectisetus特异的染色体DNA片段。其中Erectisetus特异染色体DNA片段OPF－05480bp、OPF－09650bp和OPZ-11350bp只能够在“1048”系统的全部8个株系中扩增出;OPN-12350bp只能够在“1057”系统的全部6个株系中扩增出;OPB-14900bp和OPM-05420bp只能够在“1034”、“1026”2个系统的全部22个株系和“1057”－5－3株系中扩增出。直接获得了3个类型不同的异附加系,省去常规通过测配和附加系两两杂交F1PMCMI细胞学鉴定来确证异附加系之间的异同。由此说明染色体原位杂交和RAPD分析有机结合是鉴定异附加系（异代换系）快速有效的方法,且方法简单、易行．     

Identification of the 1RS rye chromosomal segment in wheat by RAPD analysis

The introgression of rye DNA into the wheat genome was studied using random decamer and specific primers with the polymerase chain reaction (PCR). DNA from paired near-isolines in Chisholm and Arkan backgrounds differing with respect to the presence of a 1 RS.1 BL translocation was amplified with 120 arbitrary sequence primers. Two of the primers (OPR 19 and OPJ07) amplified rye-specific DNA fragments. The OPR19 primer amplified a 1.35-kb fragment that appeared to be specific to the 1 RS.1 BL translocation, based on its presence only in lines carrying the 1 RS. 1 BL translocation. A fragment of the same size was also amplified in 1 RS.1 AL translocation lines. This 1 RS. 1 BL marker locus was designated Ximc 1. The other primer, OPJ07, amplified a 1.2-kb DNA sequence, that was designated Ximc 2, specific to the wheat-rye translocation in various wheat backgrounds. The sequences of the two marker loci were found to be different from each other. The Ximc 1 locus was a low-copy sequence which was also present in Balboa rye genomic DNA. Through the use of specific primers, the presence of the rye-specific marker was confirmed in hexaploid as well as in tetraploid wheat backgrounds. The use of RAPDs for the study of smaller alien introgressions into wheat is discussed.     

蓝粒小麦易位系的荧光原位杂交鉴定

普通小麦（Triticum aestivum L.)和长穗偃麦草（Agropyron elongatum (Host)Beauv=Elytriga elongatum(Host)Nevski=Thinopyrum ponticum (Host)Barkworth and Dewey,2n=10x=70)杂交后选育出的蓝粒小麦异代换系（蓝５８）,２n=42其中９９０６中被易位蓝粒片段的相对长度约占易位小麦染色体短臂的１／３,而９９０２中被易位蓝粒片段的相对长度约占易位小麦染色体长臂的１／２,并将９９０２的蓝粒易位片段定位在小麦Ｄ组染色体上;（２）９９１５易位附加和９９０４易位－易位附加,其体细胞染色体数均为４４,其中９９１５的体细胞染色体只有一对发生了易位,另外队了两条长穗偃麦草染色体;而９９０４有两对染色体发生了易位,并易位系中控制蓝粒性状的长穗偃麦草染色体片段的定位和蓝粒小麦易位系的应用进行了讨论。     

多个SPF鸡品系的RAPD分析

目的用RAPD方法分析三个品系SPF鸡的遗传变异,以指导SPF鸡群的育种工作.方法对三个SPF鸡品系F、M及B系和对照H纯系分别采血样30个,等量混匀为三个混合样,提取DNA,筛选随机引物,优化反应体系后进行PCR扩增,计算品系内平均相似系数,根据品系间遗传距离进行聚类分析并绘制树状聚类图.结果60个随机引物中有13个产生清晰稳定的多态条带,B系品系内平均相似系数为0.903,F系和M系分别为0.673和0.755,H系为0.968;聚类分析的结果是每个品系的三个样品先聚为一类,然后F系与M系、B系与对照H系分别聚为一类.结论F系和M系的纯合程度均较低,而B系较高;F系与M系的遗传距离较近,而与B系之间距离较远,三者亲缘关系以F系与M系较近,这与各个品系的引种背景相一致.