神经肽样物质在两栖类胚胎发育过程中的定位研究(英文)

本工作以东方蝾螈为实验材料,选用时期为：卵裂期,神经胚早、中、晚期,尾芽早、中、晚期,及蝌蚪期等８个时期。各期胚胎经过固定、ＯＣＴ包埋、切片后,分别做抗胰岛素、抗胆囊收缩素、抗生长素和抗β内啡肽等免疫反应,ＡＢＣ法染色处理并观察。结果发现：一、在胚胎发育的一定时期,阳性细胞出现在胚胎的一定部位。最早于尾芽早期出现在内胚层,此时,个别细胞呈阳性反应。尾芽中期阳性细胞明显增多（Ｆｉｇ．１）。到蝌蚪期,在成形的肠道外缘可以看到阳性细胞（Ｆｉｇｓ．２＆３）,躯干部内胚层的外缘也有呈阳性反应的细胞（Ｆｉｇ．４）。可以认为：胚胎发育过程中,神经肽物质出现的时空程序与神经系统发育不相平行。从卵裂期到神经胚期,神经管从出现到闭合的管内外,都找不到阳性物质的存在。直到尾芽早期才发现神经肽样物质,而且分布在内胚层。到尾芽中期,可在表皮中发现。而神经系统则到了尾芽晚期,也就是神经管闭合后８６小时,在眼杯后才出现阳性细胞。到蝌蚪期,神经肽样物质仅存在于周边神经系统。二、在神经系统,阳性细胞最早出现在尾芽晚期,在眼杯后方可以观察到成群的阳性细胞。该位置很可能是脑神经节（Ｆｉｇ．５）。蝌蚪期,神经系统从前端往后都可观察到阳性细胞,它     

荔枝核离子交换树脂分离物对肝癌细胞体外增殖及凋亡的影响

为探讨荔枝核提取物对人肝癌细胞HepG-2增殖的影响，采用MTT法检测样品对HepG-2细胞的增殖抑制活性，选取活性最好的组分进行Hoechest 33258染色，检测其对HepG-2细胞的致凋亡能力；细胞凋亡率及细胞周期的改变采用PI染色和流式细胞术进行测定。结果表明，荔枝核提取物及纯化后的多个组分都显示出对HepG-2细胞的增殖抑制活性，其中组分L2．3效果最好，对HepG-2细胞有明显的剂量依赖性增殖抑制作用（P〈0．05）；倒置显微镜下可见经也．3处理72h后细胞形态明显变小变圆，正常存活的细胞随药物浓度增加而减少；Hoechest 33258染色后处理组HepG-2细胞染色质固缩，出现呈致密浓染蓝白色颗粒状荧光的凋亡小体；在100、50μg／mL浓度时，L2．3处理48h后HepG-2细胞凋亡率显著增高（P〈0．05），G0／G1期细胞减少（P〈0．05），S期细胞增多（P〈0．01），G2／M期细胞减少。以上结果证明荔枝核提取物可通过诱导细胞凋亡，影响细胞周期分布抑制HepG-2细胞增殖。     

蛇胸腺胚胎发育的组织学研究

该文应用光镜、电镜和细胞计数技术对胚胎发育期虎斑颈槽蛇胸腺的发育分化进行了研究。在胚胎发育１１期，胸腺原基内出现前淋巴细胞。从胚胎发育１２期至出生前（１６期），淋巴细胞不断增殖分化，小淋巴细胞逐渐增多，而淋巴母细胞和中淋巴细胞逐渐减少。胸腺皮质和髓质形成于１６期。巨噬细胞以及肌样细胞和胸腺ＡＰＵＤ细胞分别形成于胚胎发育１４期和１５期，随后数量有所增加，分别分布于胸腺皮质和髓质。     

白藜芦醇对人子宫内膜癌细胞系AN3CA增殖和凋亡效应及其机制探讨

目的：探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）对人子宫内膜癌细胞AN3CA的增殖抑制和凋亡诱导效应及可能存在的机制。方法：应用噻唑蓝（MTT）法检测Res对AN3CA的增殖影响;流式细胞术检测Res对细胞周期分布和凋亡影响：荧光实时定量PCR检测Res对细胞Bcl-2、Bax和MMP-9mRNA表达水平的影响;WesternBlot方法检测Res对PCNA、Bcl-2、Bax及ERK1／2、P—ERK1／2蛋白表达水平的影响。结果：Res对子宫内膜癌细胞AN3CA具有显著的生长抑制作用（P〈0．01）,呈时间-剂量依赖性;不同浓度Res处理细胞G0／G1期比例显著增加伴随S期细胞数的减少;细胞凋亡率明显增高,200Dmol／lRes处理48h凋亡率可达30．96％±2．041％（P〈0．01）。与对照组相比,Res能抑制PCNA的蛋白表达量,增加Bax和降低Bcl-2转录和蛋白水平的表达量。Res在短时间内（0．5—1h）激活ERK1／2的磷酸化表达但随着作用时间延长（4—48h）其表现为抑制效应。结论：Res具有抑制AN3CA细胞增殖,诱导细胞G0／G1期阻滞和凋亡的效应。Res诱导凋亡可能是通过上调Bax,下调Bcl-2发挥作用,其抗癌作用机制可能与ERK1／2通路失调相关。     

小鼠植入前胚胎GCN5和HDAC1表达模式及体外培养对其表达的影响

为探讨小鼠植入前胚胎组蛋白乙酰化酶GCN5（general control of nucleotide synthesis,GCN5）和组蛋白去乙酰化酶1（histone deacetylasel,HDAC1）的表达模式及常规体外培养对它们表达的影响,应用荧光免疫细胞化学技术,检测了体内和体外培养的小鼠2、4、8细胞期卵裂胚胎、桑葚胚和囊胚GCN5和HDAC1的表达。结果显示,GCN5在体内组各细胞期卵裂胚胎和桑葚胚的细胞浆内均呈高表达,细胞核内未见明显表达,而囊胚细胞的细胞浆和细胞核内均无表达：HDACl在体内组小鼠2细胞期胚胎中以细胞浆内表达为主,在其他各期胚胎均以细胞核内表达为主。囊胚期内细胞团部分细胞的细胞核内未见HDAC1表达。GCN5在体外组小鼠植入前各期胚胎均不表达。而HDAC1的表达强度明显低于体内组的。提示体外培养抑制小鼠植入前胚胎GCN5和明显降低HDAC1的表达,影响胚胎基因的正确性表达。     

小鼠生精细胞增殖与凋亡的年龄变化

为研究雄性小鼠睾丸在发生,发育过程生精细胞增殖与凋亡的年龄变化,本研究采用了免疫细胞化学,凋亡细胞原位检测,电镜及体视学图象分析等方法,对胚胎15天到生后10月后发育阶段生精细胞的超微结构,PCNA表达,凋亡情况进行了较深入地研究,结果：（1）精原细胞PCNA反应在胚胎15天为阳性,从胚胎18天到生后5天,降为弱阳性,而阳性的精原细胞在生后7天重新出现,一直到生后6月,仍可见部分精原细胞呈阳性反应;（2）生后3天,可见凋亡的精原细胞染色质浓缩,核膜出现明显的核周隙,核碎裂,凋亡细胞数从生后1天到生后第3周有增加的趋势,于生后第3周出现峰值,之后降低,之后降低,结论：（1）PCNA阳性细胞而密度到生后第2周出现峰值,而凋亡细胞数于生后3周出现峰值,生精细胞凋亡的高峰要滞后其增殖峰1周左右,而且与其所处生精周期的特定阶段有关;（2）精原细胞在胚胎发育过程中向曲细精管周边迁移,其排列由无序到有序;（3）在生后各发育 ,精原细胞始终保持DNA复制的能力。     

水飞蓟宾诱导肺腺癌Anip973细胞凋亡的分子机制研究

目的：探讨水飞蓟宾诱导肺腺癌Anip973细胞系细胞凋亡的分子机制。方法：采用MTT法、倒置显微镜和电子显微镜等形态学检测以及流式细胞仪（FCM）技术检测、DNALadder分析、凋亡分子PARP的表达检测细胞凋亡,同时进行凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9表达活性分析。结果：（1）水飞蓟宾对人肺腺癌Anip973细胞系细胞的增殖有显著抑制作用;（2）水飞蓟宾作用Anip973细胞48h后,随着浓度的增加,倒置显微镜下可见细胞数目减少,胞体变小、变圆,到高浓度时出现较多的死亡细胞;（3）扫描电镜观察发现,随着水飞蓟宾作用浓度的增加,Anip973细胞中出现增多的凋亡细胞,凋亡细胞表现出典型的超微结构特征;（4）流式细胞仪检测的结果发现,随着药物作用时间的延长,Anip973细胞的G1期细胞比例增多,S期细胞明显减少,G2期细胞略有减少,并出现明显的凋亡峰。（5）水飞蓟宾作用后的Anip973细胞出现明显的DNALadder和PARP降解增加等凋亡特征;（6）水飞蓟宾作用后,Anip973细胞中的凋亡相关蛋白Bax表达增加、caspase-3和caspase-9酶活性增加,而Bcl-2表达降低。结论：水飞蓟宾在体外有抑制人肺腺癌细胞Anip973的增殖作用,并通过激活线粒体依赖的caspase凋亡通路,诱导其凋亡。     

食蟹猴和恒河猴卵母细胞及早期胚胎玻璃化冻存

为了节省经费和使转基因模型动物品种资源得到妥善保存,该研究利用自制的梯度浓度冷冻液和解冻液结合玻璃化方式分别冷冻和解冻了非人灵长类动物的183个卵母细胞（GV期、MI期和MII期）、114个卵裂期胚胎（2-细胞期、4-细胞期和8-细胞期）及25个桑椹期胚胎。其中食蟹猴卵母细胞67个,卵裂期胚胎45个,桑椹期胚胎11个;恒河猴卵母细胞116个,卵裂期胚胎69个,桑椹期胚胎14个。复苏后存活率分别为56/67（83.58%）、36/45（80.00%）、9/11（81.82%）、102/116（87.93%）、55/69（79.71%）和11/14（78.57%）。结果表明,快速玻璃化冷冻法简便且胚胎存活率高,是一种较好的冷冻食蟹猴和恒河猴卵母细胞及胚胎的方法。     

蛹虫草对人胃癌细胞BGC-823生长抑制与诱导凋亡作用研究

目的研究蛹虫草水提物（the aqueous extract of Cordycep Militaris,AEoCM）对人胃癌细胞（BGC-823）生长抑制与凋亡诱导作用。方法采用不同浓度的AEoCM分别作用于胃癌BGC-823细胞,24、48和72h后,应用倒置相差显微镜观察胃癌细胞的形态变化,四氮甲基唑蓝（MTT）测定细胞生长抑制效应,流式细胞仪（FCM）检测细胞周期变化及凋亡率,免疫组化方法测定NK-k BP65的表达。结果AEoCM能显著抑制BGC-823细胞增殖,且在一定的浓度范围内呈时问和浓度依赖性。形态学观察发现,细胞变暗、皱缩,形状不规则;FCM检测结果显示,G2期的细胞于作用72h后分布显著增加,使细胞阻滞于G2期。0．5g／L AEoCM在24、48和72h凋亡率分别为4．655％、11．039％和19．368％,其凋亡程度与时间呈正相关,免疫组化方法测定NK-k BP65的表达下调。结论AEoCM能明显抑制BGC-823细胞的生长,诱导其细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的机制可能与下调NK—k BP65的表达有关。     

生命过程的相似性--从着床部位母体细胞的凋亡谈起

胚胎着床受许多因素的精确调控,其中着床部位母体细胞的凋亡在围植入期执行着重要的生理任务。但它自身的发生机制尚不完全清楚,在胚胎着床中的调节机制就更远远落后于凋亡在其他系统领域中的相知程度。因此,对细胞凋亡在着床部位母体细胞中出现的深入研究,将进一步完善我们对着床机制的理解,同时,因为肿瘤和胚胎对机体作用相似性也使这个领域的研究具有特殊的意义。