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1.
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茯苓原生质体制备与再生条件的研究 被引次数：9
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王伟霞 李福后《菌物研究》,2006年第4卷第4期
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研究了酶、酶解时间、菌龄、稳渗剂等对茯苓原生质体制备与再生的影响。茯苓原生质体制备的最佳条件为:纤维素酶(1．5%)和蜗牛酶(1．5%)的等量混合酶解系统,酶解时间3h,7d菌龄菌丝,产量可达1．77×10~7个/mL。以甘露醇为稳渗剂,采用CYM再生培养基,酶解时间3h,7d菌龄菌丝,其原生质体再生率最高,为0．164%。这一结果为茯苓通过原生质体技术进行菌种改良提供了重要技术参数。
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2.
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斜卧青霉原生质体制备和再生的研究 被引次数：2
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赵晨 易宗春 荣龙 孙艳《微生物学杂志》,2009年第29卷第1期
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研究了斜卧青霉原生质体制备和再生的条件，确定了培养方式、菌龄、渗透压稳定剂、酶的配比、酶解时间等因素对原生质体制备和再生的影响。最佳条件：菌丝体培养12h，用1％溶壁酶＋1％纤维素酶＋1％蜗牛酶的混合酶液酶解，将NaCl作为渗透压稳定剂，酶解时间为1．5h。在此条件下原生质体的形成量达到5．3×10^5个／mL，再生率为19．4％。
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3.
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卷枝毛霉孢子原生质体的制备与再生
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陈清霞 江贤章 刘锦清 宋芬芬 黄建忠《生物加工过程》,2011年第9卷第2期
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为了构建高产γ-亚麻酸的卷枝毛霉稳定遗传转化体系,利用酶解法对卷枝毛霉(Mucor circinelloides sp.)EIM-10的孢子进行原生质体制备。研究酶液组成、渗透压稳定剂、酶解温度、酶解时间等对卷枝毛霉孢子原生质体形成和再生的影响,建立了制备卷枝毛霉孢子原生质体的最适条件:1%纤维素酶和2%溶壁酶为酶解体系,0.5mol/L NaCl作为渗透压稳定剂,酶解温度32℃,酶解时间2.5 h,再生培养基为0.5 mol/L NaCl高渗培养基。用双层平板培养法进行原生质体再生,在此条件下原生质体的形成量为1.2×106个/mL,再生率为70.5%。
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4.
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冬虫夏草原生质体形成和再生的初步研究
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张华 钱秀萍 袁萍《生物技术》,2004年第14卷第2期
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研究冬虫夏草菌丝体的菌龄、酶种类、酶解温度、酶解时间、pH、稳渗剂和几种再生培养基对原生质体形成和再生的影响。最佳条件为 :生长 6d的菌丝体 ,组合酶 (1%蜗牛酶 +1%纤维素酶 ) ,酶解温度 36℃ ,酶解时间 2 .5h,pH6 .4 ,稳渗剂 0 .4M甘露醇溶液 ,RM3再生培养基。在此条件下原生质体的形成为 2 .0 4× 10 9个 ml,再生率为 0 .0 91%。
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5.
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桃褐腐病菌(Monilia fructigena)原生质体制备及再生条件 被引次数：1
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薛伟 赵筱萌 刘素花 赵晓燕 刘正坪《微生物学通报》,2010年第37卷第1期
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以桃褐腐病菌(Monilia fructigena)为供试菌株, 研究了酶系组成、液体培养基、菌龄、酶解温度、酶解时间对原生质体制备的影响, 以及等渗液、固体再生培养基、酶解时间对原生质体再生的影响。结果表明: Fries(1/2)液体培养基培养24 h, 在10 mg/mL崩溃酶 + 5 mg/mL纤维素酶 + 20 mg/mL蜗牛酶 + 10 mg/mL溶菌酶的混合酶液中28?C酶解4 h为桃褐腐病菌原生质体制备的最佳条件。采用液体再生涂布平板法, 以含Ca2+的STC为等渗液的液体培养基和含蔗糖及Ca2+的Fries(1/2)固体培养基为桃褐腐病菌原生质体再生的最佳条件。经过观察与测定, 再生菌株保持了原有的培养性状和致病性, 接种桃果实后发病率为100%。
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6.
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杏鲍菇原生质体制备与再生条件初探 被引次数：4
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刘敏 李娟 周波 贾乐《生物技术》,2005年第15卷第1期
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研究酶浓度、酶解时间、酶解温度、培养时间、稳渗剂种类、pH值和几种再生培养基对杏鲍菇原生质体制备与再生的影响。最适条件为 :在 30℃、pH5 .5、1.5 %溶壁酶条件下 ,以 0 .6mol L甘露醇作为稳渗剂 ,酶解 2 .5h ,原生质体产量达到 2 .90× 10 7个 mL。将所得原生质体过滤、纯化、稀释后涂布再生培养基 ,再生率为 0 .18%。为利用原生质体技术进行杏鲍菇育种奠定了基础。
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7.
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丝状真菌AL18的原生质体制备和再生条件的优化 被引次数：2
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卢明锋 张月杰《生物技术》,2012年第22卷第3期
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目的:为了建立起产苝醌类光敏剂丝状真菌AL18原生质体制备和再生体系。方法:采用单因素实验法研究了预处理方式、渗透压稳定剂和酶解条件对原生质体制备率和再生率的影响。结果:原生质体制备及再生的最佳条件是用0.3%的β-巯基乙醇预处理15 min,酶解液以0.6 mol/L的MgSO4·7H2O作为渗透压稳定剂,0.02 mol/L的磷酸盐缓冲液pH值为5.8,纤维素酶:蜗牛酶=2:3,酶的总浓度为15mg/mL,36℃酶解2h;以0.6mol/L的蔗糖作为再生培养基的渗透压稳定剂。结论:原生质体的制备率和再生率可分别达到1.42×107/mL和3.2%。
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8.
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黄曲霉菌原生质体的制备和再生技术优化
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储韬 黄国玉 赵志伟 陶芳《激光生物学报》,2014年第4期
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黄曲霉菌的遗传转化是研究黄曲霉菌致病相关功能基因的前提和基础,而原生质体是研究和建立真菌遗传转化系统的重要工具。本文分别以黄曲霉孢子和菌丝为材料,研究不同条件下黄曲霉原生质体的形成和再生,结果表明,黄曲霉孢子在酶液浓度为纤维素酶∶蜗牛酶∶溶壁酶=1.5%∶1.5%∶1.5%,30℃酶解3 h,原生质体制备率高达97.3%,再生率达89.2%;黄曲霉菌丝在菌龄为42 h,酶液浓度为纤维素酶∶蜗牛酶∶溶壁酶=1.5%∶1.5%∶1.5%,30℃酶解1 h,可获得最高原生质体产量为2.0×10^6个/m L,再生培养基中以1 mol/L蔗糖作为渗透压稳定剂时,原生质体再生率达5.5%。故本实验条件下,黄曲霉孢子原生质体的形成和再生优于菌丝。
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9.
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碱性普鲁兰酶产生菌的原生质体制备与诱变选育 被引次数：1
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马晓军 陈拓 张晓君 章高森 王锐《西北植物学报》,2003年第23卷第9期
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研究报道了Bacillus sp SX—12原生质体制备与再生最佳条件。实验表明，在液体完全培养基中加入2％的甘氨酸培养10h，原生质体制备最佳条件为：溶菌酶浓度0．5mg／mL，酶解温度37℃，酶解时间1．5h时原生质体形成率为93．8％。原生质体形成最佳高渗稳定剂为甘露醇，再生率26．4％。在原生质体制备的最佳条件下，用紫外线诱变技术选育产碱性普鲁兰酶的高产菌株。筛选到1株高产菌株SX—12C87，酶活由出发菌株的2．42μ／mL提高到6．87μ／mL，提高了约1．8倍。
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10.
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原生质体激光诱变选育少根根霉脂肪酶高产菌株
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冀颐之 李政 谭天伟 杜连祥 林强《工业微生物》,2011年第41卷第3期
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对少根根霉BUCT-11原生质体制备、再生条件及激光诱变育种进行了研究.结果显示,少根根霉BUCT-11原生质体形成及再生最佳条件为：菌龄24 h,混合酶由27 mg/mL的蜗牛酶和53 mg/mL的纤维素酶组成,酶解时间1.5 h,酶解温度30 ℃,渗透压稳定剂为0.6 mol/L NH4Cl、0.02 mol/L MgSO4＊7H2O、0.4 mol/L CaCl2的磷酸盐缓冲液.所得原生质体经激光诱变选育获得具有稳定遗传特性的高产突变菌株Y007,在摇瓶发酵条件下,测得脂肪酶水解酶活为151 U/mL,较出发菌株酶活提高了41%.
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11.
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产琥珀酸放线杆菌的原生质体制备与再生
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毛雨 王丹 李强 邢建民 黄占斌《中国生物工程杂志》,2010年第30卷第6期
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基因组重组技术是一项重要的菌种改造技术，原生质体制备和再生是进行基因组重组的前提和基础。目前少有关于产琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)CGMCC 2650原生质体研究的报道。为了优化该菌的原生质体制备和再生条件，及利用基因组重组技术构建优良菌种提供参考，研究了甘氨酸预处理，菌龄，酶浓度，作用时间，温度对产琥珀酸放线杆菌原生质体制备和再生的影响，并考察了不同渗透压稳定剂对其再生的影响。结果表明，菌体在添加了0.6mg/ml甘氨酸的TSB培养基中培养5 h后收集，用SMM稀释到OD660=1.0，用0.025 mg/ml溶菌酶在37℃下酶解45 min制备原生质体，将原生质体涂布于含0.3 mol/L蔗糖的再生培养基中，再生率最大，达到40.9%。确定了产琥珀酸放线杆菌原生质体制备和再生的最佳条件，所用的原生质体制备的方法对琥珀酸的产生没有影响，这为进一步开展该菌的原生质体诱变及基因组重组等研究奠定了基础。
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12.
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花脸香蘑原生质体的制备及再生条件
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陆欢 王春晖 姜性坚 徐宁《菌物学报》,2018年第6期
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以珍稀食用菌花脸香蘑菌丝为原材料,对原生质体制备与再生条件进行系统研究,并通过响应面法优化酶解液种类、酶解温度、酶解时间和稳渗剂等影响因素。结果表明以0.6mol/mL甘露醇作稳渗剂,在以1%溶菌酶+1%蜗牛酶+1%纤维素酶为复合酶解液,酶解温度为30℃,60–70r/min摇床振荡培养条件下,酶解4h,原生质体产量达到2.31×10~7CFU/mL,在以蔗糖为稳渗剂的液体培养基上再生率达到25%。研究结果可为花脸香蘑后期研究提供依据。
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13.
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疏绵状嗜热丝孢菌原生质体的制备与再生 被引次数：3
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周庆新 陈静 于恺 李多川《菌物研究》,2006年第4卷第2期
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以疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)为供试菌株,研究了菌龄、酶的种类及浓度、酶解时间、酶解温度和稳渗剂对原生质体制备的影响及稳渗剂对原生质体再生的影响。结果表明,制备嗜热丝孢菌原生质体比较适宜的条件为:PDB液体培养基培养28 h,以0.7 mol/L NaCl为稳渗剂,0.15 mol/L的溶壁酶,30℃酶解4 h。原生质体再生以0.7 mol/L蔗糖作稳渗剂为最佳。
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14.
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姬松茸原生质体形成和再生的研究 被引次数：7
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张卉 刘长江《微生物学杂志》,2003年第23卷第3期
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报道了溶壁酶系统、酶浓度、不同菌龄、脱壁促进剂、渗透压稳定剂和酶解温度对姬松茸原生质体释放率及不同再生培养基、渗稳剂种类、菌丝酶解时间和单双层平板对原生质体再生的影响。结果表明 ,菌龄为3～ 5d的菌丝以 1.5 %溶壁酶、0 .5 %蜗牛酶和 0 .5 %纤维素酶组成的酶系统在 30℃以KCl为渗透压稳定剂时 ,形成率为 1.4～ 1.5ⅹ 10 7/mL酶液 ;以蔗糖为渗透压稳定剂 ,菌丝酶解 1.5～ 3h ,以SMY和MYP为再生培养基 ,姬松茸原生质体再生率为 1.1‰～ 1.3‰。
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15.
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原生质体融合构建高效产脂肽工程菌
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梁小龙 赵峰 史荣久 周纪东 韩斯琴 张颖《中国生物工程杂志》,2014年第11期
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芽孢杆菌因其可产生多种生理活性物质,在环境污染修复、生物防治、微生物采油等领域具有广阔的应用前景。莫哈韦芽孢杆菌Bacillus mojavensis JF-2和解淀粉芽孢杆菌B.amyloliquefaciens BQ-6是从油田筛选出的产脂肽类表面活性剂菌株,但在微生物采油实际应用中受到氧气浓度、盐度及p H的限制。原生质体融合是改变微生物代谢功能的一种简便有效的方法,以上述两株芽孢杆菌为对象,利用4因素3水平正交试验来探索菌龄、溶菌酶浓度、酶解温度和酶解时间对原生体制备、再生的影响。此外,对两菌株进行了双亲灭活原生质体融合,通过筛选得到了一株工程菌HY-4,并对其进行了初步的评价。结果表明:菌龄、溶菌酶浓度和酶解时间显著影响芽孢杆菌原生质体制备率及再生率(P0.05),且在溶菌酶处理前用生理盐水多次洗涤菌体细胞,可提高制备率。两种芽孢杆菌原生质体制备及再生的最优条件均为:菌龄7 h、溶菌酶浓度2.5 mg/ml、酶解时间30 min、酶解温度42℃。融合子HY-4的最高耐盐度为15%,可耐50℃高温,代谢产脂肽的p H范围为4.0~9.5,且在好氧及厌氧条件下均能够代谢产脂肽,在厌氧条件下生长迅猛(细胞干重1.6 g/L)。综上所述,融合子HY-4具有较大的应用潜力,该研究为芽孢杆菌的遗传育种打下了方法学基础,并对驱油微生物菌种的选育具有指导意义。
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16.
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玉米大斑病菌原生质体的制备与再生* 被引次数：6
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宋庆涛 张国珍 董金皋 《微生物学通报》,2003年第30卷第2期
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以玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)0109—8为供试菌株，研究了菌龄、液体培养基、酶系统、酶解时间、稳渗剂对玉米大斑病菌原生质体制备的影响及稳渗剂对原生质体再生的影响。结果表明制备玉米大斑病菌原生质体适宜的条件为：Fries液体培养基培养分生孢子24h，1％Lywallzyme、1％Drislase和1％S创5nailase3种酶溶液混合使用，酶解5h,0.7mol/L KCl为稳渗剂；原生质体再生以0．6mol/L蔗糖作为稳渗液为佳。
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17.
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无花果曲霉原生质体形成与再生条件的探讨 被引次数：7
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宛晓春 丁霄霖《应用生态学报》,1998年第9卷第4期
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根据正交试验得出无花果曲霉原生质体形成的最佳条件，用１％的混合酶液（０．５％纤维素酶＋０．２５％蜗牛酶＋０．２５％溶菌酶）作用无花果曲霉菌体细胞，原生质体产量达３．２×１０７个·ｍｌ－１，渗透压稳定剂为０．６ｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ于０．２ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＯ３＋４（ｐＨ５．８）中，酶解时间和酶解温度分别为３．０ｈ、３０℃．比较不同酶解时间、再生稳定剂和碳源等因素对原生质体再生的影响，可确定最佳再生条件，再生率达３０％以上．
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18.
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黄绿木霉原生质体诱变育种研究 被引次数：1
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杨谦 孙冬梅 张晶《微生物学通报》,2005年第32卷第4期
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利用正交实验方法研究了影响黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)原生质体形成的因素,并利用紫外线、硫酸二乙酯、氯化锂几种因素复合诱变原生质体筛选高产纤维素酶菌株。影响原生质体形成的因子顺序是酶系统>菌龄>酶解时间>酶解温度,原生质体形成的最佳条件是0.5%蜗牛酶 0.5%溶菌酶 1.0%纤维素酶,菌龄为18h,酶解时间为3.0h,酶解温度为32℃;在该条件下原生质体产量可达到4.25×106个mL-1。Ca2 和PEG对提高原生质体再生率的作用明显;复合诱变后得到酶活显著提高、遗传性能稳定的诱变株T-14,其EG酶活与BG酶活分别提高了58.43%、44.48%。
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19.
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金线莲一促生真菌原生质体制备和再生研究 被引次数：4
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张集慧 郭顺星 曹文芩 杨峻山 肖培根 《微生物学通报》,1999年第26卷第5期
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从药用植物内生真菌中筛选到对植物生长有显著促进作用的粘帚霉属的一种真菌（Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍｓｐ.简称Ｙ菌），以它为出发菌株，进行原生质体制备与再生条件的研究。将培养４８ｈ的Ｙ菌菌丝体经过巯基乙醇处理３０ｍｉｎ，并用１％的纤维素酶和溶壁酶混合液于２８℃酶解３ｈ，原生质体得率可达２．１４Ｘ１０７个／ｍＬ，在含０.５Ｍ的甘露醇为稳渗剂的再生培养基上，其原生质体的再生率可达３．８６ｘ１０４。
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20.
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轮梗霉原生质体的制备*
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董宏平 袁生 徐旭士 幸定坤《菌物学报》,2001年第20卷第4期
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本文比较了酶浓度、菌龄、渗透压稳定剂以及酶解温度和时间等因素对轮梗霉原生质体得率的影响。结果基本获得了制备原生质体的适宜条件:用0.6mol/L甘露醇稳渗剂配制成的4%纤维素酶和0.5%蜗牛酶混合酶,35℃酶解培养了30h的菌丝1.0h,即可得到较高产量的原生质体。对该原生质体进行了再生实验,其再生率约为23.8%。
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