香菇C91-3菌发酵液的抑菌作用的初不探讨

香茹C     

香菇C91-3转录本Unigene14872基因Pkinase结构域的克隆表达及其生物信息学分析

旨在克隆香菇C91-3转录本Unigene 14872基因中的Pkinase结构域,并对其进行生物信息学分析。提取香菇C91-3菌丝体中总RNA,根据转录组测序结果,用3'-Full RACE、5'-Full RACE方法获得Unigene 14872基因全长。用NCBI对其进行生物信息学分析,预测其具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Pkinase)结构域。设计引物PCR扩增Pkinase结构域,然后克隆至pET32a(+)载体,再热转化至JM109中保存并进行质粒测序。重组质粒pET32a(+)-Pkinase构建成功,并成功诱导表达重组蛋白,初步鉴定该蛋白具有抗肿瘤活性,为进一步研究重组蛋白的活性及作用机制奠定基础。     

香菇C91-3转录本Unigene 24277基因克隆表达及其生物学活性的研究

通过对香菇C_91-3转录本Unigene 24277基因的生物信息学分析,克隆表达含RCC1结构域的Unigene 24277基因,并研究其抗肿瘤活性。从香菇C_91-3菌丝体中提取总RNA,反转录合成cDNA,并利用Rapid Amplification of cDNA Ends（RACE）技术获得基因全长。NCBI数据库分析提示其含有RCC1结构域。PCR扩增RCC1结构域,将其克隆产物与pET-32a（+）载体连接,热转化至E.coil Rosetta-gami（DE3）中诱导表达,纯化、复性后,通过MTT法研究其抗肿瘤活性。结果显示原核表达载体构建成功,重组蛋白成功诱导表达,并初步证明了重组蛋白具有抑制肿瘤细胞增殖活性的功能,为后续抗肿瘤机制的探究奠定了基础。     

C3、C4和CAM途径的生态学意义

本文通过C_3,C_4和CAM植物在不同环境中的分布,从3个方面阐述了这3种碳同化途径在利用环境资源时的生态学意义——资源分隔: 1.光合途径的空间分异:(1)不同光合类型植物的气候带(水平和垂直带)和地理区域分布;(2)不同光合类型植物在微环境中的分布。 2.光合途径的时间分异。 3.光合途径在资源分隔中的重叠。     

C3与C4植物的环境调控

环境条件决定着不同光合类型植物的地理分布范围和区域 ,一般来说 ,C4 植物分布于高温、强光的环境而 C3植物分布于阴凉、湿润的环境 ,且 C4 比 C3植物光合速率高。但环境条件影响着不同光合类型植物的光合潜能的发挥 ,C4 植物在高温、强光、干旱条件下所表现出来的优势在其它环境条件下未必就显现出来。环境条件甚至可以引起 C3、C4 光合途径间的相互转化 ,这使得目前几种鉴别植物光合类型的方法出现不一致的结果。因此 ,在判断植物的光合类型时 ,要注意多种手段的综合利用 ,同时注意植物所处环境条件的影响。     

基于CRISPR/Cas9系统高通量筛选研究功能基因

利用功能缺失型(Loss-of-function)或者功能获得型(Gain-of-function) 策略高通量筛选功能基因,是研究人员快速寻找调控特定表型的重要或关键基因的主要方法。RNA干扰(RNA interference,RNAi)的遗传筛选方法因操作简单、成本相对较低等优势,尽管已经得到了广泛的应用,然而其抑制效果不完全、脱靶效应明显等劣势依然存在。近年来兴起的CRISPR/Cas9 (Clustered regularly interspaced short palindromic repeat sequences/ CRISPR-associated protein 9)技术能快速、简便、准确地实现基因组敲除等编辑功能,因而成为一种强大的遗传筛选工具;在各种细胞系、人和小鼠及斑马鱼等多种模式动物中,大规模运用该方法筛选功能基因已经取得了巨大成功。本文总结了CRISPR/Cas9技术的特点,将其与传统基因工程方法进行了分析比较,回顾了近期相关的高通量功能基因筛选工作,最后探讨了该技术未来的发展趋势。     

C3和C4植物叶片对光氧化响应的日变化

田间生长的C3植物花生和C4植物玉米分别于晴天上午9：00、中午12：00、下午15：00取样。中午12：00花生叶片的Fv／Fm较早上9：见下降16％,出现了光抑制现象,玉米叶片的Fv／Fm则未下降。不同时间取样的花生和玉米叶片经甲基紫精（MV） 强光的人为光氧化处理,叶绿素和类胡萝卜素出现不同程度的氧化降解,中午12：00降解幅度最大,15时降幅最小。植物叶片的抗氧化能力与其SOD活性相关,而与PEPCase的活性没有明显的相关性。光氧化处理后,花生和玉米的叶绿素荧光参数FV／Fm、qp、pSII都下降,花生在12：00的降幅最小,玉米的降幅最大。光氧化引起花生的qN和热耗散系数（KD）上升,玉米则都下降．结果显示C3植物花生和C4植物玉米对光氧化的响应可能存在不同的机制。     

C3和C4植物寄主对华北地区棉铃虫越冬代和第一代的影响

确定华北越冬代棉铃虫虫源及其对第一代棉铃虫种群的影响是制定棉铃虫防治策略的基础。以越冬代棉铃虫蛾翅的稳定同位素δ¹³C为天然标记直接判定这些成虫的幼虫期寄主类型,并将雌虫接到春小麦植株上,调查其产卵、孵化、幼虫发育至化蛹、羽化等特征。结果表明,越冬代来自C₃植物(主要为棉花)的成虫个体数量占全部越冬羽化种群的53.1%,所产生的下一代老熟幼虫也较C₄来源的多(55.1%);雌蛾受精率都比较高;卵孵化率较高(52.9%>41.6%);幼虫发育在低龄阶段较比后者快,存活率低,但在高龄幼虫阶段相对后者慢,存活率高;与C₄植物(主要玉米)的来源个体后代的幼虫发育总历期接近,总存活率也相近。显示寄主植物小麦提供的营养条件在第一代棉铃虫的幼虫发育中具有决定性意义,即小麦只在特定阶段才适合幼虫的发育;而且不论是C₃还是C₄寄主来源的越冬代棉铃虫已经适应了这一限制。有效地评价了玉米和棉花等寄主植物对华北地区越冬代和次年第一代棉铃虫的影响,对于分析越冬代棉铃虫的虫源性质和第一代棉铃虫的防治及Bt抗性的治理有重要参考价值。     

中国南亚热带和北温带地区禾本科C3与C4草本植物花果期差异研究

为揭示不同地区禾本科C₃与C₄植物花果期受气候因子的影响,以广东省和内蒙古自治区分别代表南亚热带和北温带地区,从植物志中分别获得两地395和265种禾本科草本植物的3个花果期特征(始花期、末花果期和生殖期长),比较开花物候的差异,并通过一般线性模型探究其与气候因子(年均温与年均降水量)的相关性。结果表明,南亚热带与北温带地区C₃植物的始花期均比C₄植物早。两地C₄共有种在南亚热带地区具有更早的始花期、更晚的末花果期和更长的生殖期,而C₃共有种的末花果期在两地无显著差异,但在南亚热带地区始花期更早,生殖期更长。随年均温升高,北温带地区禾本科植物的始花期提前,而南亚热带地区则延后;随年均降水量升高,两地禾本科植物始花期与末花果期均延迟;禾本科植物生殖期长与年均温和年均降水量均不存在相关性。跨地区分析表明,末花果期、生殖期长与年均温和年均降水量均正相关,而与始花期不相关。禾本科C₃植物比C₄植物对地区间气候差异响应更敏...     

基于光谱法-图像灰度法高通量筛选高效固定CO2的苯甲酸脱羧酶*

目的:苯甲酸脱羧酶能够催化羧化反应固定CO₂,为了获得高效的苯甲酸脱羧酶,需要利用高通量分子克隆与突变体筛选系统对产生的大量突变体进行筛选,因此建立、开发高效的筛选评价方法对于获得高羧化效率的突变体至关重要。方法:利用2,3-二羟基苯甲酸脱羧酶催化邻苯二酚固定CO₂的反应体系,建立了光谱法-图像灰度法高通量筛选和评价固定CO₂的苯甲酸脱羧酶突变体。利用分光光度法在308 nm快速定量羧化产物2,3-二羟基苯甲酸。同时利用高效液相色谱(HPLC)法对分光光度法的测定结果进行了校正,确定了分光光度法估算的2,3-二羟基苯甲酸浓度与HPLC方法测定的准确浓度之间具有良好的线性关系(R² = 0.996)。利用HPLC-分光光度法的相关性可以获得实际样品中准确的2,3-二羟基苯甲酸浓度。利用Image J软件获得蛋白质标准品和突变体的灰度均值,根据灰度法定量蛋白质标准品的标准曲线计算突变体的蛋白质表达量。利用单位酶量催化邻苯二酚获得2,3-二羟基苯甲酸的浓度比较突变体的催化活性。结果:纯酶和粗酶体系下HPLC法测定的2,3-二羟基苯甲酸浓度与分光光度法测定的吸光度值的关系分别为C₁=0.500A₁-0.010(R² = 0.996)和C₂=1.458A₂+0.431 9(R² = 0.991)。从13个突变体中获得了两个正向突变体,羧化活性分别是WT的3.5倍和1.7倍。结论:基于光谱法-图像灰度法可以实现高通量筛选固定CO₂的苯甲酸脱羧酶,该方法可用于具有相似功能的苯甲酸脱羧酶对其他取代基的酚类和水杨酸类似物的底物选择性筛选。     

CA125、CA199、CEA 联合检测在妇科肿瘤临床诊断中的应用价值

目的：探讨CA125、CA199、CEA联合检测在妇科肿瘤临床诊断中的应用价值。方法：选择妇科恶性肿瘤组65例、妇科良性肿瘤组55例、健康对照组70例,采用自动荧光磁微粒酶免分析法检测血清中CA199、CA125的含量,采用光激化学发光法检测血清中CEA的含量。结果：妇科恶性肿瘤组血清中CA125、CA199、CEA的水平明显高于妇科良性肿瘤组及对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;妇科良性肿瘤组血清中CA125、CA199、CEA的水平高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;CA125、CA199、CEA联合检测对早期妇科肿瘤诊断的阳性率较单独检测高,差异有统计学意义（P〈O．05）;良性组、恶性组联合检测ROC曲线下面积大于单项检测曲线下面积。结论：联合检测可提高对妇科肿瘤早期诊断的阳性率,对妇科良恶性的诊断及鉴别诊断有重要价值。     

肿瘤标志物联合检测在乳腺癌早期诊断中的应用

目的：探讨肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）、糖链抗原19-9（CA19-9）、糖链抗原15-3（CA15-3）联合检测在乳腺癌早期诊断中的应用价值。方法：检测87例乳腺癌患者,55例乳腺良性肿瘤患者和35例健康人血清中CEA、CA19-9、CA153等肿瘤标志物的水平及3种标志物不同组合对乳腺癌的阳性检出率。结果：乳腺癌患者3种肿瘤标志物显著高于正常对照组及乳腺良性肿瘤组（P〈0.01）。3项标志物不同组合对不同分期乳腺癌检出的敏感性均高于单项标志物。其中CEA＋CA199＋CA153组合的检出敏感性较其他组合均高,特别是对早期患者检出率明显提高。结论：CEA＋CA199＋CA153联合检测能提高乳腺癌的早期诊断率。     

肿瘤标志物联合检测在乳腺癌早期诊断中的应用

目的:探讨肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖链抗原19-9(CA19-9)、糖链抗原15-3(CA15-3)联合检测在乳腺癌早期诊断中的应用价值。方法:检测87例乳腺癌患者,55例乳腺良性肿瘤患者和35例健康人血清中CEA、CA19-9、CA153等肿瘤标志物的水平及3种标志物不同组合对乳腺癌的阳性检出率。结果:乳腺癌患者3种肿瘤标志物显著高于正常对照组及乳腺良性肿瘤组(P<0.01)。3项标志物不同组合对不同分期乳腺癌检出的敏感性均高于单项标志物。其中CEA+CA199+CA153组合的检出敏感性较其他组合均高,特别是对早期患者检出率明显提高。结论:CEA+CA199+CA153联合检测能提高乳腺癌的早期诊断率。     

基因组学与表观遗传学在肿瘤标志物研究中的应用

肿瘤标志物是一类能反映肿瘤存在与生长状态的生化物质,它们在肿瘤的早期筛查、辅助诊断、预后判断、疗效评价、复发和转移监测中具有重要意义. 随着细胞与分子生物学领域的发展,人类基因组计划大量研究成果的涌现,人们对肿瘤的发生和发展机理有了越来越清楚的认识,肿瘤标志物的研究也得到了极大的拓展与更新,特别是基因组学和表观遗传学的进展大大促进了新型肿瘤标志物的发现. 文章就肿瘤标志物发展历程,常用肿瘤标志物的种类和临床应用进行介绍,分析了现有肿瘤标志物的局限性,重点阐述了新型肿瘤标志物,如多种表观遗传学标志物及循环核酸的研究及应用. 同时,对肿瘤标志物的研究前景提出了一些观点.     

Tumor galectinology: Insights into the complex network of a family of endogenous lectins

β-Galactosides of cell surface glycoconjugates are docking sites for endogenous lectins of the galectin family. In cancer cells, primarily galectins-1 and -3 have been studied to date. With the emergence of insights into their role in growth control, resistance to or induction of apoptosis and invasive behavior the notion is supported that they can be considered as functional tumor markers. In principle, the same might hold true for the other members of the galectin family. But their expression in tumors has hitherto been a subject of attention only to a very limited extent. Pursuing our concept to define the complexity of the galectin network in cancer cells and the degree of functional overlap/divergence with diagnostic/therapeutic implications, we have introduced comprehensive RT-PCR monitoring to map their galectin gene expression. The data on so far less appreciated galectins in this context such as galectins-4 and -8 vindicate this approach. They, too, attach value to extend the immunohistochemical panel accordingly. Our initial histopathological and cell biological studies, for example on colon cancer progression, prove the merit of this procedure. Aside from the detection of gene expression profiles by RT-PCR, the detailed molecular biological monitoring yielded further important information. We describe different levels of regulation of galectin production in colon cancer cells in the cases of the tandem-repeat-type galectins-8 and -9. Isoforms for them are present with insertions into the peptide linker sequence attributed to alternative splicing. Furthermore, variants with distinct amino acid substitutions (galectin-8, Po66-CBP, PCTA-1, CocaI/II and galectin-9/ecalectin) and generation of multiple mRNA species, notably those coding for truncated galectin-8 and -9 versions with only one lectin site, justify to portray these two family members not as distinct individuals but as groups. In aggregate, the ongoing work to thoroughly chart the galectin network and to disentangle the individual functional contributions is expected to make its mark on our understanding of the malignant phenotype in certain tumor types. Published in 2004. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.     

芒果畸形病病原菌Fusarium mangiferae的快速分子检测

芒果畸形病是芒果上的重要病害之一,由镰孢菌侵染引起,其中以Fusarium mangiferae为主要致病菌.该病害诊断困难,且难于有效控制,因此,一旦发生则对芒果生产造成严重威胁.研究基于ISSR分子标记技术,从50条已知引物中筛选得到一条目的引物UBC 888,该引物可稳定扩增出大小为479bp的F. mangiferae特异性条带(GenBank Accession No. KJ526382).根据获得的特异性片段序列设计引物,成功地将ISSR标记转化为SCAR标记,并获得一对SCAR特异性引物(W342,W1772)和一段大小为1 376bp的特异性扩增片段(GenBank Accession No. KJ526383).通过优化特异性引物扩增条件,获得最适退火温度,构建芒果畸形病病原菌F. mangiferae的快速分子检测技术.此技术操作简单,特异性强,可检测真菌DNA的含量最低为10pg,适用于F. mangiferae和田间带菌芒果组织高灵敏度快速检测,为芒果畸形病的早期诊断和及时预防提供可靠理论依据和技术方法.     

Immunodiagnosis of childhood malignancies

Immunodiagnosis utilizing immunohistochemical techniques is currently the most commonly utilized and readily available method of ancillary diagnosis in pediatric oncopathology. The methodology comprises relatively simple steps, based on straightforward biologic concepts, and the reagents used are generally well characterized and widely used. The principle of cancer immunodiagnosis is based on the determination of neoplastic lineage using detection of proteins typical of cell differentiation pathways. Methodology sensitivity varies and has become greater with each new generation of tests, but technical drawbacks should be considered to avoid excessive background or nonspecific results. Automated instrumentation offers a degree of accuracy and reproducibility not easily attainable by manual methods.     

Detection of tumor marker CA125 in ovarian carcinoma using quantum dots

The fluorescent labeling of biological materials usingsmall-molecule organic dyes is widely employed in bio-logical imaging and clinical diagnosis. Organic fluoro-phores, however, have certain characteristics that limittheir advantages in some applications. These limitationsinclude narrow excitation bands and broad emissionbands with red spectral tails, which make the simultaneousevaluation of several light-emitting probes difficult due tospectral overlap. Also, many organic dyes exhibit highp…     

Binding properties of biotinylated epidermal growth factor to its receptor on cultured cells and tissue sections

A biotinylated derivative of murine epidermal growth factor (EGF) was prepared by covalent attachment of the terminal amino group of EGF to N-biotinyl-epsilon-aminocaproyl-N-hydroxysuccinimide. The stoichiometry of biotin incorporation was in the range of one biotin moiety per EGF molecule. The biotinylated EGF (biotinyl-epsilon-caproyl-EGF, BioEGF) binds to EGF receptors on intact Ehrlich ascites carcinoma (EAC) cells with an affinity similar to that of native EGF and displays the same mitogenic activity as EGF in a soft agar test system with normal rat kidney (NRK) cells. BioEGF was visualized on cultured cells and tissue sections of a head and neck tumour by commercial streptavidin/avidin detection systems. Cytochemical analyses of certain tumour forms can be easily performed using the BioEGF probe.