复合酶法提取黄秋葵嫩果多酚的工艺优化

对复合酶法提取黄秋葵嫩果多酚的工艺进行优化。通过单因素及正交试验,确定复合酶中纤维素酶、甘露聚糖酶和果胶酶的最佳配比浓度,分别是2%、3%、1%;在此基础上,以提取温度、料液比、提取时间为自变量,黄秋葵多酚提取含量为响应值,采用Design-Expert软件中的Central Composite Design模块设计3因素组合试验,建立多项式回归方程,经响应面回归分析优化组合条件,得到复合酶法提取黄秋葵嫩果多酚的最佳提取工艺为:提取温度44.97℃,液料比(mL:g)58.80∶1,提取时间3.99 h,预测多酚提取值为29.193 mg/g,验证值为29.156 mg/g。研究结果可为黄秋葵多酚的批量提取工艺提供参考。     

响应曲面法优化菌丝体中红曲色素的提取条件

以红曲菌丝体为原料,通过单因素实验及Box-Behnken设计响应曲面分析优化了红曲色素的提取工艺条件。通过实验,得到了提取率的回归方程Y=0.923-0.011X1-0.011X2-0.017X12-0.027X22-0.026X32-0.028X1X2-0.019X1X3,通过对模型解逆矩阵得优化方案:乙醇浓度X1=66%、超声功率X2=200 w、提取温度X3=52℃,模型预测结果为92.5%。在该工艺条件下进行验证实验,提取率达到92.1±0.6%(n=3)。     

利用响应面分析法优化山楂中总黄酮提取条件

通过响应面分析法对山楂中总黄酮的提取工艺进行优化。利用响应面实验设计考察乙醇浓度、提取温度、提取时间、液固比四因素对总黄酮提取率的影响。用自编MATLAB程序对实验数据进行二次响应面分析。得出山楂总黄酮的最佳提取条件为:乙醇浓度66%、提取温度83℃、提取时间2 h、固液比19∶1,提取率为74.72%,与模型预测值基本相符。     

响应面法优化荞麦胰蛋白酶抑制剂固定化条件

目的:以大肠杆菌表达的重组荞麦胰蛋白酶抑制剂为原材料,研究其固定化方法及条件。方法:以0.2%聚乙烯醇-3%海藻酸钠溶液为载体,CaCl2为固定剂,用物理包埋法对荞麦胰蛋白酶抑制剂进行固定化;在CaCl2浓度、载体与抑制剂体积比以及固定化时间3个单因素基础上,利用响应面法对荞麦胰蛋白酶抑制剂固定化的影响因素进行优化。结果:建立了响应面法优化固定荞麦胰蛋白酶抑制剂的模型,经优化后得到如下最佳固定化条件:CaCl2浓度为5.5%,载体与抑制剂体积比为1.6∶1,固定化时间为31min。在此条件下实际测得固定化抑制剂抑制率为72.4%,而模型预测此条件下的抑制率为74.3%,实测值与理论值相差很小。结论:所建模型拟合程度较高,用该模型优化荞麦胰蛋白酶抑制剂固定化的工艺条件参数准确可信,可为进一步开发胰蛋白酶的应用提供重要参考。     

金钗石斛原生质体的制备与融合

以金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)再生苗的幼嫩叶片为实验材料,以原生质体活力率为评价指标,用正交试验设计对原生质体制备过程中的纤维素酶浓度、果胶酶浓度、离析酶浓度和酶解时间四个关键因素进行最佳组合筛选,发现当纤维素酶为9.5 mg/m L、果胶酶为5.0 mg/m L、离析酶为6.0 mg/m L、酶解时间为3.0 h的组合条件下,制备的原生质体活力率最高,为94.42%。在此基础上,采用高钙高pH值结合PEG4000诱导法进行原生质体融合研究,以高活力的赤水和瑞丽金钗石斛原生质体为材料,以异核体融合率为评价指标,用响应面法优化设计对原生质体融合过程中的PEG浓度、CaCl_2浓度、pH和融合时间四个因素进行最佳组合筛选,发现当PEG4000浓度为38.41%、CaCl_2浓度为0.44 mol/L、pH为9.26、融合时间为28.87 min的组合条件下,异核体融合率达到最高,为0.924%。同时,响应面法分析还发现,PEG浓度和CaCl_2浓度之间、PEG浓度和pH之间、CaCl_2浓度和融合时间两个因素共同对异核体融合率有显著影响。此外,响应面分析还发现,当pH为9.26时,PEG浓度、CaCl_2浓度和融合时间的值在一定范围内变化并不会显著影响异核体融合率的值,数值均维持在0.94%左右。该研究完善了金钗石斛原生质体制备和融合的技术体系,为金钗石斛种质资源的保护、拓展和新品种选育提供了实验材料,为其他近缘物种的相关研究提供了实验参考。     

产粉红色素红曲霉M4菌株发酵培养基的优化

利用响应面法对红曲霉M4产粉红色红曲色素的发酵培养基进行了优化。研究了不同碳源、氮源对红曲霉M4产色素的影响,利用Central composite试验设计对碳源、氮源浓度进行了试验,得到红曲色素优化培养基回归方程为Y=31.80001+12.02669X1+0.698225X2-12.33755X12+1.75X1X2-0.337496X22经分析,确定出红曲色素的最佳发酵培养基碳、氮源浓度为:红薯粉10.37%,大豆蛋白0.85%,发酵后红曲色素最高色价为每毫升41 u。     

巴西橡胶树染色体制片方法的改良及FISH信号检测

本研究以巴西橡胶树热研7-33-97品种幼叶为材料,通过改良配制纤维素酶与果胶酶混合酶的溶剂、酶解时间等参数,对酶解去壁低渗方法进行了相应改良。结果表明,在37℃下,采用磷酸盐缓冲液(NaH2PO4,31.21 g/L; Na2HPO4, 71.64 g/L; Na Cl, 8 g/L; pH=5.5)作为溶剂,配制终浓度为5%纤维素酶、4%果胶酶的酶混合液时,酶解时间为1.0 h,大大缩短了酶解时间。用该法制备的中期标本,染色体形态分散、清晰、细胞膨大良好,荧光原位杂交信号检测后,信号正常。本研究可为橡胶树细胞遗传学、基因定位提供细胞学方法。     

响应面法优化酶解辅助提取翅果油树叶总黄酮

利用酶辅助法对翅果油树(Elaeagnus mollis Diels)叶中总黄酮的提取工艺进行优化。在单因子试验结果的基础上,采用响应面法(RSM)研究了酶用量、酶解时间、pH值和酶解温度对翅果油树叶总黄酮提取得率的影响。结果表明:纤维素酶具有较好的酶解能力,当酶用量为6.5 mg.g-1,酶解时间为1.5 h,pH4.7,温度为46℃时,总黄酮得率达到7.1%。     

响应面法优化粪产碱菌Alcaligenes faecalis DL-08产纤维素酶培养工艺

利用粪产碱菌Alcaligenes faecalis DL-08,进行产纤维素酶培养,在Plackett-Burman设计基础上,通过Design-Expert中心组合实验,建立了培养条件优化的二次回归模型,并通过响应曲面分析,确定了最佳培养条件。由响应面分析结果可知,产纤维素酶条件:温度37.98℃,碳氮比1∶1,接种量2%,初始p H 7,时间24 h。在此条件下,预测值OD520为1.237。经3组平行试验,OD520平均值为1.229,与模型预测值基本一致,且与未优化条件相比,纤维素酶活力提高了5.6%,可达1 303.2 U/m L。     

响应面法优化灵芝菌丝体胞内灵芝酸的提取

利用单因子试验和响应面法优化了影响灵芝菌丝体灵芝酸的提取过程。基于3因素3水平的中心组合设计,得到了描述胞内灵芝酸提取得率与操作参数之间的二次响应面模型。在乙醇浓度为93.6%(v/v)、提取温度79.1℃、提取液固比42.2∶1、提取次数2次、每次提取时间2 h的条件下,最大灵芝酸理论提取得率为28.36 mg胞内灵芝酸每克干菌丝。模型优化条件下的实际灵芝酸提取得率(28.72 mg/g干菌丝)与理论灵芝酸提取得率(28.36 mg/g干菌丝)相符。