叶绿体DNA的限制性内切酶谱分析在植物系统分类学中的应用

业已证明,叶绿体DNA为一共轭闭合环状分子。绝大多数植物叶绿体DNA均含有一对反向重复序列。对于所有已检测过的植物,叶绿体基因组所编码的基因数量、基因组成和基因排列是基本一致的。这表明叶绿体DNA具有进化上的保守性。由于其进化上的保守性,叶绿体DNA常为研究层次较高的分类单位间(属间、科间、目间、纲间等)进化关系和进化历史提供较准确的信息。1976年,Vedel等首先建立了叶绿体DNA的内切酶谱分析方法,并将其应用于植物系统分类学中。Vedel等用限制酶ECoRI酶切从豌豆     

DNA限制性内切酶与RFLP的研究

植物遗传进化及分类学的研究,通常以形态特征特性和数量性状为基础。尽管这些形态学特征都是遗传本质的表现,但环境因素却在遗传表现的过程中起了过大的作用。近年来,运用同工酶谱带和以生化指标为依据进行过不少研究,但仍不能克服环境的影响。当前,DNA限制性内切酶和衍生的限制性片段长度多态性(RFLP)方法,应用于遗传进化及分类学研究,在微生物中做了大量的工作。因为这种研究是直接针对遗传物质——DNA分子的,所以,更为精确和有效。     

团头鲂线粒体DNA的限制性内切酶图谱

用ＢａｍＨⅠ,ＢｇｌⅠ,ＢｇｌⅡ,ＥｃｏＲⅠ,ＨｐａⅠ,ＫｐｎⅠ,ＰｓｔⅠ,ＳａｃⅠＳａｌⅠ,ＸｂａⅠ,和ＸｈｏⅠ１１种限制性内切酶对团头鲂（ＭｅｇａｌｏｂｒａｍａａｍｂｌｙｃｅｐｈａｌａＹｉｈ）的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）进行了单酶切,其切点数依次为２,３,２,３,３,１、０,１,０,０和０;经琼脂糖凝胶电泳测算出各酶切片断大小,得出团头鲂ｍｔＤＮＡ分子长约１６０２０±３５６碱基对（ｂｐ）,分子量６．３７×１０１８ｕ（原子质量）,构建了团头鲂ｍｔＤＮＡ的限制酶图。     

猴脑线粒体DNA提取及限制性内切酶分析

本文用冷碱法从2只恒河猴和1只食蟹猴的脑组织中提取mtDNA,最后的得率大约为0.7μgmtDNA/g脑组织,是肝脏组织得率的1/3左右。与肝脏组织相比较,从脑组织中提取mtDNA有以下优点:1.匀浆方便。2.样品中蛋白杂质少,容易彻底抽提去除蛋白质。3.大分子RNA杂质极少,不经Sepharose-4B柱或RNawe处理,就可得到较纯的样品。加之哺乳动物脑的体积较大,哺乳动物脑组织不失为提取mtDNA的一个有用的组织来源。经16种限制性内切酶分析,并与来自同一个体肝脏组织的mtDNA比较,结果进一步证实,mtDNA无组织特异性。对12岁以上老年猴脑mtDNA的分析表明,在衰老中,动物mtDNA的序列可能没有变化,甲基化程度也无显著增高。     

对TMV不同抗性番茄品种叶绿体DNA限制性差异片段的克隆

对ＴＭＶ不同抗性番茄品种ｃｔ－ＤＮＡ经限制性内酶切后,将所获得的差异片段Ｂａｍ６克隆到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ中,经筛选、菌落原位杂交、斑点杂交及电泳鉴定,证明重组体为抗性品种Ｂａｍ６差异片段克隆,对探讨番茄ｃｔ－ＤＮＡ与抗ＴＭＶ的关系有重要意义。     

泥鳅线粒体DNA限制性酶切图谱

对鱼类线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）限制性内切酶图谱分析,有利于进行鱼类种间和种内遗传变异及进化的研究（张亚平等,１９９２）。目前国内外对鱼类的ｍｔＤＮＡ研究已有一些报道（陈关君等,１９８４;戴建华等,１９９４;Ａｖｉｓｅ等,１９８７;Ｂｒｏｗｎ,１９８...     

三种鱼mtDNA的限制性内切酶分析

鱼类线粒体DNA(mtDNA)的限制性酶切图谱分析,对于探讨鱼类的起源和演化等方面均有十分重要的意义。但是目前有关鱼类mtDNA酶切图谱的研究较少,这主要是受方法学的限制。为此我们改良了一种鱼类mtDNA的提取法,对鲤科的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)和鳙鱼(Aristi-chthys nobilis)的mtDNA进行了限制性内切酶酶切分析。     

限制性核酸内切酶或特异位点的DNA内切酶

目前对那些在原核生物中看来普遍存在的特异位点核酸内切酶的看法,由于探索重组DNA技术学的工具而受到了严重地歪曲。仅分离到了具有识别3-7个特异碱基范围序列的酶。当然这些内切酶在复合组基因的分析、“逆转遗传学”(“reverse genetics”)的兴起以及在真核中基因表达区的最近突破,特别是在了解肿瘤病毒RNA的作用过程中和免疫球蛋白的表达中基因重排等方面的用途上在过去的五年深为分子和细胞生物学家们体会到了。已发现了在识别顺序中有交错、对称、不对称及简并巨大多样性。同时考虑到特异位点重组和(或)DNA降解方面的遗传学资料,说明我们现在所收集的内切酶只能代表一个程度极其复杂的特异性窄谱。这些酶本身也为生物物理学家们和生物化学家们提供了探索DNA-蛋白质相互作用的微妙问题的丰富材料。     

限制性内切酶诱发的姊妹染色单体互换

用限制性内切酶PstⅠ,SalⅠ,PvuⅡ和BamHⅠ处理CHO细胞后,发现其SCE率升高,与对照相比,前三种酶具有显著性差异。但这些酶诱导SCE的效应与其致染色体畸变效应相比则较弱,提示引起DNA双链断裂的限制性内切酶不是SCE的强刺激物。实验结果表明,BrdU取代胸苷不能消除限制酶对底物DNA的识别及裂解。     

Sequence-specific endonucleases in strains of Anabaena and Nostoc

The complements of restriction endonucleases of 12 strains of cyanobacteria were determined in cell-free extracts, and were compared with the complements of restriction activities assessed by measuring the relative efficiencies of plating of cyanophages on those cyanobacteria. The hosts which were susceptible to all of the phages contained endo R · AvaI and endo R · AvaII, and in several cases probably endo R · AvaIII, or isoschizomers of these enzymes. Three hosts which were lysed by only a subset (1 or 3) of the phages contained different restriction endonuclease. Anabaena sp. PCC 7120 showed apparent phenotypic restriction of phage An-22 grown in hosts with (isoschizomers of) AvaI, II and III, but no corresponding endonuclease has yet been detected in vitro. Nostoc sp. ATCC 29131 (PCC 6705) was found to contain a restriction enzyme, NspBII, with hitherot unknown specificity, C(A/C)GC(T/G)G.     

三倍体草鱼染色体限制性内切酶带分析

本文报道运用Ｇｉｅｍｓａ染色、Ｃ－带显带、ＮＯＲ－显带和多种限制性内切酶消化对草鱼三倍体的染色体进行分析。其中,内切酶ＨａｅⅢ和ＨｉｎｄⅢ等使染色体产生Ｇ－带,其余内切酶产生与常规Ｃ－带不同的分化,即所谓修饰Ｃ－带。实验结果表明,限制性内切酶可使鱼类染色体产生多种带型,各种显带技术的结合使用,可探讨鱼类染色体及染色质结构与进化。     

猪线粒体DNA多态性与中国地方猪种起源分化的关系

用24种限制性内切酶分析了我国21个具代表性地方猪品种、1个引进品种和2个来自中国和越南的野生近缘种mtDNA的RFLP。结果表明:在74个个体中检出的32种限制性态型可归结成7种单倍型,其间的差异主要来源于少数几个限制性位点的点突变;地方猪种4种单倍型间的平均遗传距离为0.143％,遗传多态程度(π值)仅为0.007％,说明遗传多样性非常贫乏,提示中国地方猪种可能起源于一个野猪亚种。     

三江白猪线粒体DNA的多态性

采用22种限制性内切酶分析了三江白猪mtDNA多态性。在60头个体中检出30种限制性态型,归结为7种基因单倍型;其间的差异来自少数限制性位点的突变。单倍型间平均遗传距离为0．35％,群体遗传多态程度为0．044％。三江白猪遗传多样性非常贫乏,说明三江白猪与地方种猪起源于一个共同祖先,在品种形成早期受到创立者效应的制约。     

斜纹刺蛾核型多角体病毒及其核酸的限制性内切酶酶解分析

本文描述了从自然罹死的斜纹刺蛾(Oxyplax orhracea(moore))幼虫中分离出一种核型多角体病毒。用快速简便方法提取核酸,经限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ酶解,获得该病毒核酸的酶解带谱。以λDNA的EcoRⅠ酸解片段在凝胶中的迁移率与相应DNA片段分子量的对数值做标准曲线求得其平均分子量为102.09×10~6道尔顿,即为147.77kb。     

对TMV不同抗性番茄品种叶绿体DNA的RAPD分析

本实验对TMV抗性和敏感的两个番茄品种ct-DNA进行RAPD分析,结果发现在20个引物中有4个引物的扩增产物存在明显差异,共显示出14条差异带。这可能是由于ct-DNA碱基顺序变异或小片段DNA插入或缺失造成的,深入研究将对探讨番茄抗TMV的分子机理,进而用遗传工程方法培育抗病品种具有重要意义。