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相似文献
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1.
固定化青霉素酰化酶的研究   总被引:11,自引:4,他引:7  
将巨大芽孢杆菌胞外青霉素酰化酶通过共价键连接到醋酸纤维素载体上,制成的固定化青霉素酰化酶的表观活力达2000 u/g左右(PDAB法)。水解lO%(w/v)的青霉素G钾盐落液,使用30批,保留活力70%以上。6-氨基青毒烷酸(6-APA)总收率平均达88.37%。固定化青霉素酰化酶水解青霉素G的最适pH为9.95,最适温度为55℃,表观米氏常数为1.093×10-2mol/L,在pH 5.8-10.7,温度45℃以下酶的活力稳定。  相似文献   

2.
聚丙烯腈纤维固定化青霉素酰化酶合成头孢氨苄的研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
将巨大芽孢杆菌胞外青霉素酰化酶通过共价键结合到聚丙烯腈纤维的衍生物上。制成的丝状固定化青霉素酰化酶表现活力达 1 5 3U g(湿重 )。固定化酶合成头孢氨苄的最适pH为 6 5 ,最适温度为 40℃。 7 ADCA的投料浓度以 4%为好 ,7 ADCA与PGME的投料量比率为1∶2 ,最佳用酶量为 1 70U g 7 ADCA。在pH6 5、温度 3 0℃时 ,固定化酶对 7 ADCA的表观米氏常数K7 ADCA为 0 1 6 2mol L ,对PGME的表观米氏常数KPGME为 0 3 6 4mol L ,最大反应速度Vmax为0 0 4 6 2mol·L- 1·min- 1,用固定化酶合成头孢氨苄 ,使用 5 0次保留酶活力 83 9%  相似文献   

3.
颗粒状固定化青霉素酰化酶的研究   总被引:10,自引:0,他引:10  
韩辉  徐冠珠 《微生物学报》2001,41(2):204-208
将巨大芽孢杆菌 (Bacillusmegaterium)胞外青霉素酰化酶通过共价键结合到聚合物载体EupergitC颗粒环氧基团上 ,制成的颗粒状固定化青霉素酰化酶表现活力达 1 40 0 μ/g左右。固定化酶水解青霉素的最适 pH8 0 ,最适温度为 55℃。在pH6 0~ 8 5、温度低于 40℃时固定化酶活力稳定。在 pH8 0、温度 37℃时 ,固定化酶对青霉素的表现米氏常数Ka为 2×1 0 - 2 mol/L ;苯乙酸为竞争性抑制剂 ,抑制常数Kip为 2 8× 1 0 - 2 mol/L ;6 APA为非竞争性抑制剂 ,抑制常数Kia为 0 1 2 5mol/L。固定化酶水解青霉素 ,投料浓度为 8% ,在使用 2 0 0批后 ,保留活力 80 %左右 ,6 APA收率平均达 89 48%。  相似文献   

4.
谷胱甘肽硫转移酶(GST)的固定化及酶学特性研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
蔡俊  邱雁临 《生物技术》2003,13(5):11-12
对谷胱甘肽硫转移酶的固定化、游离酶和固定化酶的酶学特性进行了研究,通过试验,确定谷胱甘肽硫转移酶的最佳固定化条件为先用2%壳聚糖吸附酶,然后再加戊二醛交联,交联用戊二醛浓度为1.2%,交联时间6h;游离酶的最适温度为45—55℃,最适pH值为6.5-7.0:固定化酶的最适温度为45-50℃,最适pH值为7.0;游离酶和固定化酶的最适酶促反应时间为30min。  相似文献   

5.
巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶共价结合在新型环氧-氨基型载体ZH-HA 上,通过对酶浓度、固定化时间、pH以及缓冲液浓度等条件的考察,确定了最优固定化条件:50 mg比活力6000 U/g的巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶蛋白和1g ZH-HA悬浮于pH 9.01 mol/L磷酸缓冲液,室温搅拌6 h,制得固定化巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶,活力2126 U/g湿载体,活力回收率7.67%.比较研究了固定化酶与原酶性质,原酶最适温度45℃,最适pH为8.0.固定化酶则分别是50℃和9.0,分别比溶液酶偏移5℃、1.0个pH单位.经过40批连续水解青霉素G钾盐,固定化巨大芽孢杆菌青霉素酰化酶仍保持80%的活力,显示出良好的工作稳定性.  相似文献   

6.
 尼龙经CaCl_2和H_2O的甲醇溶液处理,稀HCl水解用戊二醛交联以制备固定化木瓜蛋白酶。在溶液酶浓度为1mg/mL pH7.5—8.0、4—15℃条件下固定3h,活力回收42.5%,相对活力46%,偶联效率52%,半衰期72天。溶液酶Km值和固定化酶K_m~(aPP)值(底物酪蛋白W/V,%)分别为0.28%和0.35%。溶液酶和固定化酶分别在pH6.5和pH8.0以下活力稳定;最适pH分别为7.0和8.0;在65℃处理30min活力分别为原有活力的89%和66%。当酪蛋白浓度为1.5%和2.5%以上活力分别受到抑制。固定化酶在6mol/L脲中连续浸洗5次共6h其活力稳定,仍有原活力的44.4%;用以处理啤酒浊度比对照下降了2-11倍;蛋白质含量下降了55%;冷藏(4℃)120天,无冷混浊发生;同时各项理化指标和风味不变。  相似文献   

7.
 用离子型多孔聚苯乙烯固定化了糖化酶。研究了制孔剂比例对载体孔径的影响。用麦芽糖做底物,三乙醇胺基聚苯乙烯载体使固定化糖化酶的最适pH向左移动约2个pH单位;磺酸基苯胺基聚苯乙烯载体使固定化糖化酶最适pH向右移动2个单位。固定化酶最适pH的移动值随缓冲液浓度的增加而减少。用可溶性淀粉为底物时固定化糖化酶的pH—活力曲线变宽。用dextrin作底物,天然糖化酶的Km为3.47×10~(-3)mol/L,固定化糖化酶的素质K_m为4.17×10~(-3)mol/L,表现K_m(app)为1.11×10~(-2)mol/L。延长重氮化反应时间,得到2000ug~(-1)干胶的高活力固定化糖化酶。  相似文献   

8.
产青霉素酰化酶的大肠杆菌AS1.76的固定化   总被引:3,自引:1,他引:2       下载免费PDF全文
用在有机溶剂中成型的琼脂凝胶包埋,结合戊二醛处理的方法,制备产青霉素酰化酶的大肠杆菌AS1.76固定化细胞,其细胞含量可达50%以上。固定化细胞水解青霉素 G 钾盐的最适 pH 为8.0,比原细胞约高0.3pH 单位;最适温度与原细胞一样,均为45℃。固定化后,Hg2+对酶抑制作用降低,但酶对Fe3+、Cu2+等金属离子敏感性增加。在无底物情况下,与原细胞相比,固定化细胞对 pH 和热的稳定性增加;4℃保存14个月无活力损失。固定化细胞装柱,在pH7.7,37℃下连续裂解青霉素 G,转化率达95%以上。155天无明显酶活力损失。  相似文献   

9.
固定化在多孔玻璃上的青霉素酰化酶性质   总被引:1,自引:0,他引:1  
从大肠杆菌As 1.76提取青霉素酰化酶,经纯化,用戊二醛圈定在氯烷基硅烷化多孔玻璃上。初步摸索了固定化条件。固定化酶的米氏常数为7.7 x 10-4M,比自然酶大10倍,但竞争性抑制剂苯乙酸对固定化酶和自然酶的抑制常数基本相同,固定化酶的最大反应速度为5.8×10-2M/min,比自然酶大2.5倍,水解NIPAB的最适pH为7.O,比自然酶低1个pH单位,最适反应温度比自然酶低i0℃,固定化酶在pH 5.8—8.0之间较稳定,较自然酶的范围略窄;固定化酶在40℃以下稳定,而自然酶在45℃以下稳定。  相似文献   

10.
多粘杆菌β-淀粉酶的产生及其性质的初步研究   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
多粘杆菌(Bacillus polymyxa) As1.546产β-淀粉酶的最适培养基成份(%)为:玉米粉4,豆饼粉2,酵母膏0.5,Na HPO4·12H2O 0.2,NaH2PO4·2H2O 0.03,MgSO4.7H2O 0.05,自然pH(7左右)。250毫升三角瓶装50毫升培养基,旋转式摇床(220转/分),温度为30a℃,培养时间为60小时,每毫升发酵液酶活力可达700单位。酶反应的最适温度为45℃,最适pH为6.5,水解可溶性淀粉生成麦芽糖可达96%。  相似文献   

11.
12.
Both pairs of -ll-desoxy- and -13- - -15, 16-dihydroxyprostaglandins have been synthesized via 1,4-conjugate additions of an appropriately functionalized -vinyl cuprate to the requisite cyclopentenone. These prostaglandin analogs are considerably less potent than PGE2 as gastric secretion inhibitors or as bronchodilators.  相似文献   

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The -glucan synthetase activity of the fungus Saprolegnia monoica was assayed by supplying UDP-glucose to membrane fractions of mycelial homogenate. The analysis of glucan products by hydrolysis with various -glucanases and by chromatography show that both -1-3- and -1-4-linkages are formed at high substrate concentrations. In the absence of MgCl2, -1-3-linked glucans are mainly produced. By increasing MgCl2 concentrations the total synthesis activity and -1-3-linkages production are reduced. At low substrate concentrations in the presence of MgCl2, -1-4-linked glucans are the only polysaccharide synthesized. Electron microscopy of radioactive products, synthesized by original membrane fractions or by membrane fractions isolated from continuous sucrose density gradients, shows microfibrils when the assays are conducted at high substrate concentrations in the absence of MgCl2.Abbreviations G.S. I glucan synthetase I - G.S. II glucan synthetase II - Dol. P dolichol phosphate  相似文献   

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Target of rapamycin signaling is a conserved, essential pathway integrating nutritional cues with cell growth and proliferation. The target of rapamycin kinase exists in two distinct complexes, TORC1 and TORC2. It has been reported that protein phosphatase 2A (PP2A) and the Far3-7-8-9-10-11 complex (Far complex) negatively regulate TORC2 signaling in yeast. The Far complex, originally identified as factors required for pheromone-induced cell cycle arrest, and PP2A form the yeast counterpart of the STRIPAK complex, which was first isolated in mammals. The cellular localization of the Far complex has yet to be fully characterized. Here, we show that the Far complex localizes to the endoplasmic reticulum (ER) by analyzing functional GFP-tagged Far proteins in vivo. We found that Far9 and Far10, two homologous proteins each with a tail-anchor domain, localize to the ER in mutant cells lacking the other Far complex components. Far3, Far7, and Far8 form a subcomplex, which is recruited to the ER by Far9/10. The Far3-7-8- complex in turn recruits Far11 to the ER. Finally, we show that the tail-anchor domain of Far9 is required for its optimal function in TORC2 signaling. Our study reveals tiered assembly of the yeast Far complex at the ER and a function for Far complex''s ER localization in TORC2 signaling.  相似文献   

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