两种核酸染料染色效果的比较研究

用前染和后染两种不同的染色方法,研究比较SYBRGreenI和溴化乙锭(EB)两种核酸染料对凝胶中DNA的染色效果和灵敏度,及SYBRGreenI取代EB用于常规凝胶中核酸染色的可能性。结果表明,用前染法染色SYBRGreenI对琼脂糖凝胶中的核酸染色效果与EB相当;用后染法染色前者要优于后者,可显示5ng以下的DNA条带,在完全相同的操作条件下,其染色DNA条带背景清晰,灵敏度较高。因此,无致突变性新型染料SYBRGreenI可替代强致突变性染料EB用于检测凝胶中DNA片段大小、含量等,从而减少由于使用EB带来的环境污染和人体健康危害。     

核酸染料对DNA条带形态产生的影响分析

使用核酸染料对DNA片段进行前染色时,DNA条带会出现弯曲、变形、拖尾等现象。这些现象是由核酸染料造成的,并且与核酸染料的浓度及DNA的上样量成正相关,另外,还与分子量大小、琼脂糖凝胶的质量与浓度、电压相关。选择合适的核酸染料及染色方式可以减少DNA条带形态改变的概率,得到较好的电泳结果。     

2种核酸染色方法的比较

目的:比较前染和后染等2种核酸染色方法对凝胶中DNA的染色效果,及其对染料染色灵敏度的影响,并验证新型核酸染色剂SYBRGreenⅠ能否代替传统染料溴化乙锭(EB)用于常规电泳中DNA的染色。方法:分别用SYBRGreenⅠ与EB采用2种不同的方法对凝胶中的DNA进行染色。结果:前染和后染的染色效果无显著差别,2种染料都能显示出10ng以下的DNA条带。结论:前染和后染方法的染色效果相当,染料SYBRGreenⅠ和EB均可用于这2种染色方法;新型染料SYBRGreenⅠ可代替强致癌性染料EB,用于常规凝胶中DNA的染色。     

核酸染料Genefinder使用方法的比较

目的:使用核酸染料Genefinder检测琼脂糖凝胶中的核酸,通过比较预染样品法、胶内染色法和后染法三种染色方法的染色效果,了解该染料的染色特性,以期找到性能稳定,染色效果好的染色方法.方法:在琼脂糖凝胶电泳中,以不同的染色方法使用核酸染料Genefinder进行染色,对染色结果进行比较分析.结果:使用电泳后染色方法染色效果较好,胶内染色法次之,预染样品法效果最差.结论:核酸染料Genefinder会干扰DNA的迁移效率,因此,使用Genefinder进行电泳后染色是一种较好的染色方法.     

黄连素作为核酸染料染色效果的探讨

目的:黄连素作为核酸染料与EB染色效果的比较。方法:通过不同种的提取工艺来提取黄连素,测定荧光光谱,选择合适的溶剂,进行琼脂糖凝胶电泳。结果:各种方法提取的黄连素都能够进行染色。结论:黄连素作为核酸染料染色效果低于EB,还有待进一步探讨。     

为什么点样孔会发亮

分析和检测核酸的一般办法是琼脂糖凝胶电泳．并且用溴化乙锭(EB)显色。除目的条带以外,人们还经常发现点样孔上或点样孔四周也能被EB染色而发亮。许多学生就此问过老师。老师们一般将其解释为核酸样品不纯,有蛋白质污染或有其他杂质污染。还有些人认为这是琼脂糖凝胶本身的因素造成的。但真正的原因是什么,     

琼脂糖凝胶电泳技术

九、碱性琼脂糖凝胶 科学家们认为,琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段的一种极好的方法。这种技术操作简单,快速,并且还能解决在密度梯度离心中所存在的DNA片段不能充分分离的难题。此外,还能直接确定凝胶中DNA的位置:其方法是先用低浓度的能发荧光的具有插入本领的染料(溴乙锭),对胶中DNA条带进行染色;然后,把电泳胶置于紫外光下进行直接检测,其灵敏度可达1毫微克(ng)。     

大剂量地塞米松快速高效诱导巨噬细胞凋亡

运用透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、原位末端标记法(TUNEL)染色等技术,检测了大剂量地塞米松处理小鼠腹腔巨噬细胞的各种变化.结果显示,大剂量地塞米松处理的巨噬细胞发生胞体皱缩、染色质凝聚、胞质浓缩;TUNEL染色呈阳性;0.5 h后DNA凝胶电泳即呈梯状条带;流式细胞术作周期分析出现凋亡峰等明显的凋亡特征.并且随处理时间延长凋亡率升高.结果表明,大剂量地塞米松快速、高效诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡.     

第11届国际生物奥林匹克竞赛(2000)实验试题(Ⅲ)

(续 2 0 0 1年第 3期第 43页 )实验三　生物化学试题 :DNA和染色剂样品的琼脂糖凝胶电泳注意 :3个学生使用 1个电泳电源 ,在加样以后除去电泳槽下的黑纸 (图 1)。图 1　　引言 :电泳是用于分子生物学和医学的 1种分析方法。分子的净电荷在所应用的电场中影响它的迁移速度 ,电泳技术就基于这种原理。琼脂糖凝胶电泳用于提供如下信息 :·用于分离 DNA和 RNA的鉴定·用于检验 DNA的纯度·用于检验核酸的构型·用于鉴定 DNA的大小纯的琼脂糖是粉状的 ,在室温下是不溶于水的 ,为了溶解它 ,给 1个沸水浴。当开始冷的时候 ,它是 1个多聚体的…     

一种简便的DNA定量分子量标准的制备

目的：制备一种具有琼脂糖凝胶电泳定量功能的DNA分子量标准。方法：以pMD18-TSimple载体为基础骨架构建了长度为4.7kb的质粒,应用定点突变的方法,在载体上分别间隔100bp、200bp、400bp、800bp、1200bp处,加入了HindⅢ限制性内切酶的酶切位点,将该质粒扩增后并应用HindⅢ酶切后,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果：获得的分子量条带大小依次为100bp、200bp、400bp、800bp、1200bp和2000bp,每次使用4μl可获得质量范围为10ng、20ng、40ng、80ng、120ng和200ng的定量标准品。结论：应用该方法制备标准品,具有制备简单、成本低、定量快速等优点。