右归丸对大鼠膝骨关节炎的干预作用及其机制*

目的: 探讨右归丸对膝骨关节炎(KOA)模型鼠关节软骨组织骨诱导因子(OGN)、骨黏连蛋白(ON)和纤维蛋白原2(FBN2)的影响。方法: 将大鼠随机分为假手术组,模型组,硫酸氨基葡萄糖组(硫酸氨基葡萄糖),右归丸(高、中、低剂量)组,每组10只。采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,右归丸高、中、低剂量组分别灌胃给予右归丸4.8,2.4,1.2 g/kg,硫酸氨基葡萄糖组灌胃给予硫酸氨基葡萄糖 0.17 g/kg,连续给药8周。干预结束24 h后取鼠膝关节软骨,采用HE染色法观察各组软骨的病理改变,并进行Mankin评分;免疫组化法检测各组关节软骨组织中OGN、ON和FBN2的表达;Western blot法检测各组关节软骨组中糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的表达。结果: 与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织Makin 评分显著升高,软骨组织FBN2蛋白表达水平上显著增加,OGN、ON和GSK-3β蛋白表达水平上的显著降低(P＜0.01);模型组关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与模型组比较,右归丸高剂量干预组大鼠软骨组织Makin 评分和FBN2蛋白表达水平显著降低,GSK-3β蛋白表达水平上显著增加,且右归丸中、高剂量组OGN、ON蛋白表达水平均显著增加(P＜0.05或P＜0.01),软骨结构趋于正常,软骨细胞分布仅偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论: 右归丸能够延缓关节软骨退变,其可能机制是通过提高骨诱导因子和骨粘连蛋白的表达水平来促进关节软骨的骨化和重构。     

右归丸对鼠膝骨性关节炎的治疗作用及Wnt信号通路相关因子表达的影响

目的：分析右归丸对膝骨性关节炎（KOA）大鼠Wnt信号通路相关因子表达的影响,探讨右归丸对KOA大鼠的保护机制。方法：SPF级SD大鼠60只,按照体重法随机分为假手术组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组、右归丸高、中、低剂量组（n=10）。采用改良Hulth法复制膝骨关节炎大鼠模型。右归丸高中低剂量组分别按20、10、5 g/kg灌服相应的药物,硫酸氨基葡萄糖组按0.17 g/kg灌服硫酸氨基葡萄糖,假手术组和模型组灌服等体积的生理盐水,干预8周。末次给药后摘取膝关节,通过膝关节病理切片观察各组大鼠软骨组织病理改变;采用RT-PCR法对各组大鼠软骨组织DKK1、WISP1、Wnt1、β-catenin和LRP5 mRNA的表达水平进行对比分析;通过Western blot法检测各组大鼠软骨组织DKK1、WISP1、Wnt1、LRP5和β-catenin的蛋白质含量的变化。结果：与假手术组比较,模型组大鼠关节软骨受损严重,Mankin评分明显升高（P<0.05）;DKK1 mRNA表达水平和蛋白质表达水平明显降低（P<0.05）;WISP1、Wnt1、β-catenin、LRP5 mRNA表达水平及蛋白质表达水平明显升高（P<0.05）。与模型组比较,右归丸高剂量组和硫酸氨基葡萄糖组关节软骨病变明显减轻;Mankin评分明显减轻（P<0.05）;大鼠软骨组织中DKK1 mRNA表达水平和蛋白表达水平明显升高,WISP1、Wnt1、β-catenin、LRP5 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论：右归丸通过抑制Wnt信号通路中WISP1、Wnt1、β-catenin、LRP5的表达,促进DKK1细胞因子的表达,发挥对KOA的保护作用。     

化湿液对湿阻证大鼠下丘脑AchE、NOS活性及NO含量的影响

目的研究化湿液对湿阻证模型大鼠下丘脑AchE、NOS活性及NO含量的影响。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组及模型组 化湿液低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余4组用改进后的环境加疲劳法制造湿阻证模型,连续造模6d。造模成功后,正常组和模型组大鼠按2ml/100g的剂量灌胃给予生理盐水;化湿液低、中、高剂量组分别按含生药0.4g/100g、0.8g/100g、1.6g/100g的剂量灌胃给予化湿液。每天1次,连续8d。取大鼠下丘脑,检测下丘脑AchE、NOS活性及NO含量。结果与正常组比较,模型组大鼠下丘脑AchE活性明显升高,NOS活性及NO含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,化湿液可降低湿阻证模型大鼠下丘脑AchE的活性,提高下丘脑NOS活性及NO含量(P<0.05)。结论化湿液具有改善湿阻证大鼠下丘脑AchE、NOS活性及NO含量的作用,对研究化湿液治疗湿阻证的机制有一定价值。     

藿香蓟叶提取物对大鼠创伤性骨关节炎的治疗作用

摘要 目的：探究藿香蓟叶提取物（ACLE）对创伤性骨关节炎（PTOA）模型大鼠的治疗作用及其可能的分子机制。方法：SPF级雄性SD大鼠采用前交叉韧带切断法构建PTOA大鼠模型,然后将建模成功的大鼠随机分为模型组、藿香蓟叶提取物2.5 g组（ACLE 2.5 g组）、藿香蓟叶提取物5 g组（ACLE 5 g组）和藿香蓟叶提取物10 g组（ACLE 10 g组）,每组21只。另取21只SD大鼠设为假手术组,大鼠只执行前交叉韧带暴露手术,但是不切断。ACLE 2.5 g组、ACLE 5 g组和ACLE 10 g组大鼠在造模结束后分别灌胃给药,剂量分别为2.5 g/kg、5 g/kg和10 g/kg,持续给药处理8周。假手术组和模型组大鼠给予等量生理盐水每日灌胃处理,同样持续干预处理8周。给药结束后,收集各组大鼠的血清、膝关节灌洗液和膝关节软骨组织。采用HE染色（Mankin''s评分）和番红O+固绿染色（OARSI评分）评估大鼠关节损伤情况。采用ELISA试剂盒检测大鼠血清中ALP、BGP和CTX-Ⅰ水平,以及大鼠血清和关节灌洗液中TNF-α、IL-6和IL-1β水平。采用试剂盒检测大鼠血清和关节灌洗液中MDA、SOD、GSH-Px和ROS水平。采用Western blot检测大鼠软骨组织中Aggrecan、SOX-9、Col Ⅱ、MMP-13、Wnt1、β-catenin、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：模型大鼠的膝关节软骨组织损伤严重,软骨层状组织结构遭受破坏;ACLE 2.5 g组、ACLE 5 g组和ACLE 10 g组大鼠膝关节软骨组织结构和病理状态均得到不同程度的恢复。与模型组比较,ACLE 2.5 g组、ACLE 5 g组和ACLE 10 g组大鼠Mankin''s和OARSI的评分值均降低（P<0.01）。与模型组比较,ACLE 2.5 g组、ACLE 5 g组和ACLE 10 g组大鼠血清中ALP和BGP水平升高,CTX-Ⅰ水平降低（P<0.05）。与模型组比较,ACLE 2.5 g组、ACLE 5g组和ACLE 10 g组大鼠血清和膝关节灌洗液中IL-6、IL-1β、TNF-?琢、NO和MDA水平均降低（P<0.05）,SOD和GSH-Px水平均升高（P<0.05）。与模型组比较,ACLE 2.5 g组、ACLE 5 g组和ACLE 10 g组大鼠关节软骨组织中Aggrecan、SOX-9、ColⅡ和Bcl-2蛋白表达水平均升高（P<0.05）,MMP-13、Wnt1、β-catenin和Bax蛋白表达水平均降低（P<0.05）。结论：ACLE能够降低PTOA大鼠膝关节软骨组织中炎症反应水平,增强抗氧化能力;抑制Wnt/β-catenin通路的过度激活,通过升高Aggrecan、ColⅡ、SOX-9和Bcl-2的表达,促进软骨细胞外基质的恢复,并抑制软骨细胞的凋亡,从而改善PTOA大鼠软骨组织损伤程度。     

硫酸氨基葡萄糖氯化钾的制备及对大鼠骨关节炎模型

目的：制备硫酸氨基葡萄糖氯化钾,考察其对大鼠骨关节炎模型的治疗作用。方法：以甲壳素为原料,经盐酸水解得盐酸氨基葡萄糖,将其与硫酸钾置于水溶液中,通过充分的离子交换反应,并加入作为沉淀剂的有机溶剂,制备硫酸氨基葡萄糖氯化钾;考察反应温度、反应溶液中各离子平衡时间、反应原料配比以及沉淀剂的种类、加入量和加入时间等对最终产物的影响,优化制备工艺。建立木瓜蛋白酶诱导的大鼠骨关节炎模型,并灌胃给予硫酸氨基葡萄糖氯化钾,通过血清中丙二醛和一氧化氮含量测定、关节肿胀度观察和关节软骨病理切片检查,考察硫酸氨基葡萄糖氯化钾对模型大鼠骨关节损伤的保护作用。结果：确立优化的硫酸氨基葡萄糖氯化钾制备工艺：反应温度为45～55℃,离子平衡时间为0.5 h,盐酸氨基葡萄糖与硫酸钾的质量配比为22.5:7.15,作为沉淀剂的乙醇加入浓度约为75 %及加入时间为3 h。骨关节炎模型大鼠接受硫酸氨基葡萄糖氯化钾给药后,血清中丙二醛和一氧化氮含量显著降低（P<0.05或P<0.01）,关节肿胀度明显减轻（P<0.01）,且病理切片显示,仅有少许关节软骨细胞轻度变性,软骨未见明显坏死,细胞未见明显增生。结论：优化的硫酸氨基葡萄糖氯化钾制备工艺适用于工业化生产;硫酸氨基葡萄糖氯化钾对骨关节炎损伤具有显著保护作用,且效果好于盐酸氨基葡萄糖。     

宽筋藤对类风湿性关节炎模型大鼠踝关节组织病理学的影响

为了观察宽筋藤对弗氏完全佐剂(CFA)诱导的佐剂性关节炎(AA)大鼠踝关节组织病理改变的影响,除正常组外,其余各组大鼠足跖皮内注射CFA致AA大鼠模型,将模型大鼠随机分成模型组、宽筋藤高剂量组、宽筋藤中剂量组、宽筋藤低剂量组、阳性药物组,灌胃给药20 d,观察各组大鼠继发侧足爪肿胀度及踝关节滑膜、软骨、关节腔、周围软组织炎症反应等组织病理改变情况,进行综合评分。实验结果表明,与模型组比较,宽筋藤能减轻AA大鼠关节肿胀程度,并显著抑制炎症细胞的浸润和滑膜增生以及血管翳的形成,减轻软骨及骨质损伤程度(P0.05或P0.01)。实验证明,宽筋藤可显著改善AA大鼠关节组织病理改变。     

聚己内酯/柚皮素纳米纤维膜对白介素1β诱导的体外骨关节炎的作用研究

目的探讨聚己内酯(PCL)/柚皮素纳米纤维膜对白介素1β(IL-1β)诱导SD大鼠软骨细胞退行性变修复作用。方法使用静电纺丝技术分别制作PCL纳米纤维膜,PCL/柚皮素纳米纤维膜,使用扫描电子显微镜(SEM)观察纳米纤维膜的表征。提取3～5 d的SD大鼠软骨细胞,分为空白对照组、骨关节炎(OA)组、骨关节炎加PCL(OA+PCL)组、骨关节炎加PCL/柚皮素(OA+PCL/柚皮素)组,分别处理24 h后进行CCK-8实验检测各组SD大鼠软骨细胞的增殖情况,并进行活/死细胞染色,观察各组SD大鼠软骨细胞的毒性。提取各组SD大鼠软骨细胞的总RNA,使用qRT-PCR检测炎症及软骨标志基因的表达。结果与OA组相比,PCL/柚皮素纳米纤维膜组大鼠的细胞活性较高,细胞数量明显增多,炎症标志基因表达明显降低,软骨标志基因表达明显增高(均P0.05)。结论 PCL/柚皮素能降低IL-1β诱导的SD大鼠体外骨关节炎症标志基因的表达,对SD大鼠关节炎有一定治疗作用,且能上调关节炎细胞中软骨标志基因COL2a1的表达。     

刺五加胶囊对抑郁大鼠海马组织TH、TPH表达的影响

目的:探讨刺五加胶囊对抑郁大鼠海马组织TH、TPH表达的影响。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组和刺五加胶囊低、中、高剂量组,21d慢性轻度不可预见性应激刺激法(chronic unpredictable mild stress,CUMS)制备大鼠抑郁模型,对照组给予生理盐水1ml灌胃,刺五加胶囊低、中、高剂量组分别给予刺五加胶囊(300mg/kg,600mg/kg,1200mg/kg)灌胃,取大鼠海马组织。分别采用realtime RT-PCR和western blot方法观察大鼠海马组织酪氨酸羟化酶(TH)、色氨酸羟化酶(TPH)的表达。结果:刺五加胶囊低剂量组能明显升高海马组织中TH、TPH mRNA和蛋白的表达(P<0.05),中、高剂量组能显著升高海马组织中TH、TPH mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。结论:刺五加胶囊能升高抑郁大鼠海马组织中TH、TPH的表达。     

凝血酶法致大鼠血液高凝态模型的建立

目的探索静脉注射凝血酶造成大鼠高凝态模型,为高凝态的研究提供合适动物模型。方法 SD大鼠分为六组,分别于股静脉恒速注射生理盐水和2.5、5、10、20、40 U/kg凝血酶溶液,5 min内采血测活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB),并观察大鼠死亡情况以确定最佳凝血酶剂量。在此基础上,以最佳剂量凝血酶溶液股静脉注射给予大鼠,分别于0、10、30、60、120、180、300 s采血测APTT、PT、FIB以确定最佳采血时间。最后将大鼠分为生理盐水组与凝血酶组(最佳凝血酶剂量和采血时间),采集血样测定APTT、PT、FIB以及全血粘度。结果 10 U/kg凝血酶组大鼠血浆APTT、PT明显缩短,FIB明显升高,且大鼠死亡率低。注射凝血酶后60 s大鼠血浆APTT、PT缩短最多,FIB含量升至最高。同生理盐水组相比,凝血酶组大鼠血浆PT、APTT显著缩短,FIB、全血粘度显著增大,且差异有显著性(P0.05)。结论注射凝血酶溶液可复制大鼠血液高凝态模型,最佳凝血酶剂量为10 U/kg,凝血酶浓度为2U/m L,最佳采血测试时间为60 s。     

菊藤胶囊对应激性高血压大鼠血压及血液ET、NO含量的影响

目的:探讨了菊藤胶囊对应激性高血压(SIH)大鼠血压影响的可能机制。方法:采用电击足底应激刺激的方法制备应激性高血压大鼠模型,观察每天应激刺激前灌服菊藤胶囊对应激大鼠血压的影响,检测血清一氧化氮(NO)、血浆内皮素(ET)水平。结果:模型组血压显著升高,模型组与其它各组血压比较差异均有统计学意义(P<0.01)。正常组、卡托组、菊高组之间进行比较,差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,菊藤胶囊高中剂量组、西药组可使SIH血清NO水平显著升高(P<0.01),高中剂量组、西药组可使血浆ET水平显著下降(P<0.01);正常组、西药组、中药高剂量组之间进行比较并无显著性差异。结论:SIH形成与血清NO水平下降、血浆ET水平升高有关,菊藤胶囊能有效降低血压,其降压机制可能与调整血清NO、血浆ET水平有关。