转望江南核糖体失活蛋白基因cassin烟草及其对烟草花叶病毒的抗性

通过构建植物表达载体,由农杆菌介导,将望江南核糖体失活蛋白基因cassin转入烟草。PCR和Southern blot杂交结果证明：外源基因已经以单拷贝整合到烟草基因组内,并且在后代发生遗传分离。RT—PCR和Northern blot杂交结果显示：外源基因可以正常转录。用不同浓度的TMV机械摩擦接种转基因T1、T2代各3个自交株系,以非转基因烟草为阴性对照,实验结果表明转基因烟草对TMV表现出不同程度的抗性。     

苦瓜的核糖体失活蛋白

核糖体失活蛋白是一类专一修饰核糖体的大亚基rRNA从而抑制蛋白质生物合成的蛋白毒素,可分为Ⅰ-型和Ⅱ-型两种类型。苦瓜中含有多种Ⅰ-型核糖体失活蛋白,如α-苦瓜素,β-苦瓜素和MAP30等,这些蛋白成分具有抗肿瘤、抗病毒和抗艾滋病等功能,因而近年来引起人们广泛的关注。对苦瓜核糖体失活蛋白的研究进展和应用前景进行了综述。     

丝瓜核糖体失活蛋白的分离与纯化

采用一种改进的方法,简便快速地从丝瓜(Luffa cylindrica)籽中得到丝瓜蛋白α和β.它们在SDS-PAGE上均呈一区带,其分子量分别为28000和29000.等电聚焦测定等电点均为10.它们对无细胞体系蛋白质合成都有强烈的抑制活性,其ID₅₀分别为10μg/L和50μg/L,是目前发现的单链核糖体失活蛋白中活性最高的.     

一组丝瓜籽小分子核糖体失活蛋白LuffinS的分离,纯化 …

通过硫酸铵分级沉淀、ＣＭ－５２阳离子交换层析、ＨＲＬＣ分子排阻层析及ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ Ｓ离子交换层析等步骤,从丝瓜籽中分离到一组分子量为８ｋＤ左右的小分子核糖体失活蛋白－ＬｕｆｆｉｎＳ１、ＬｕｆｆｉｎＳ２、ＬｕｆｆｉｎＳ３。末端分析结果表明,它们的Ｎ端氨基酸分别为Ａｌａ、Ｐｒｏ和Ｔｈｒ。氨基酸序列分析确定了ＬｕｆｆｉｎＳ２的Ｎ端９个氨基酸的序列是Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ａ     

玉米核糖体失活蛋白基因z108在烟草原生质体中的转化及其表达

利用与根癌农杆菌共培养的方法将玉米核糖体失活蛋白基因z108及其融合基因GUS导入烟草叶肉原生质体细胞。试验结果表明,烟草叶片在含有1.0%纤维素酶和0.5%离析酶的裂解液中,以0.5M甘露醇、5000.0mg/LCaCl2为渗透压调节剂,25℃保温12-14h,可获得纯化的原生质体细胞;纯化的叶肉原生质体细胞与根癌农杆菌菌株pCam1301/91-108共培养30min,经25mg/L潮霉素筛选,转化率可达17.84%。转化体细胞经X-Gluc染色、PCR和RT-PCR检测证明玉米核糖体失活蛋白基因z108已整合到烟草原生质体细胞的核基因组中并获得表达。     

核糖体失活蛋白研究进展

核糖体失活蛋白是一类毒蛋白, 主要存在于植物当中, 在真菌和细菌中也有发现。其共同特点是具有N-糖苷酶活性, 能水解生物核糖体大亚基rRNA颈环结构上特定位点的腺嘌呤, 使核糖体失活, 从而抑制了蛋白质合成。本文对核糖体失活蛋白的主要性质、应用以及国内外有关这类蛋白的研究进展加以概述。     

核糖体失活蛋白研究进展

核糖体失活蛋白是一类毒蛋白,主要存在于植物当中,在真菌和细菌中也有发现.其共同特点是具有N-糖苷酶活性,能水解生物核糖体大亚基rRNA颈环结构上特定位点的腺嘌呤,使核糖体失活,从而抑制了蛋白质合成.本文对核糖体失活蛋白的主要性质、应用以及国内外有关这类蛋白的研究进展加以概述.     

一种金针菇核糖体失活蛋白的分离纯化研究

获得一种为研究其他菌类核糖体失活蛋白的对照品,并论述一种金针菇核糖体失活蛋白的分离纯化及其活性的研究结果。实验中采用了DEAE和CM-离子交换纤维素与Bio-Gel 100柱层析方法。从1 000 g新鲜金针菇中得到5.58 mg的核糖体失活蛋白-Velutin,并证明其具有明显的抑制蛋白质的翻译作用,同时简要介绍了它的应用及展望。分离纯化到具有活性的Velutin,分子量为13.8 ku。     

核糖体失活蛋白研究新进展

核糖体失活蛋白是一类可使真核细胞核糖体失活而抑制蛋白质合成的植物毒蛋白。它广泛存在于植物界,具有抗肿瘤、抗病毒、免疫调节、骨髓净化等多种生物活性。本文就核糖体失活蛋白在植物中的分类、分布和性质、功能特性、在生物医学中应用及其应用前景等作简要全面的阐述。     

八棱丝瓜籽核糖体失活蛋白的分离纯化及其生化性质

通过盐溶液抽提、硫酸铵分级沉淀、CM 5 2纤维素阳离子交换层析、反相毛细管液相色谱 (re verse phasecapillaryliquidchromatography ,RP CLC)等步骤 ,从八棱丝瓜籽中分离到 2种单链核糖体失活蛋白luffaculin 1和luffaculin 2 .在SDS PAGE和IEF上均显示为单一条带 ,表观分子量均为 2 8kD ,其等电点分别为 8 86 (luffaculin 1)和 9 0 5 (luffaculin 2 ) .实验表明 ,它们具有RNAN 糖苷酶活性 .蛋白质合成抑制活性测试表明 ,它们对蛋白质合成具较强的抑制作用 .体外抑制肿瘤细胞生长活性检测表明 ,luffaculin 1和luffaculin 2对人白血病细胞株K5 6 2有较强的毒性 ,IC50 分别为 1 1×10 -6mol L和 2 0× 10 -7mol L .八棱丝瓜籽核糖体失活蛋白具有可以用于或构成免疫毒素治疗癌症的应用前景     

Purification and Characterization of a New Ribosome Inactivating Protein from Cinchonaglycoside C-treated Tobacco Leaves

A new ribosome-inactivating protein(RIP)with a molecular weight of 31 kDa induced by Cinchonaglycoside C(1)designatedCLP31,was isolated from tobacco leaves.Analysis of this protein sequence indicated that it belongs to the RIP family and itwas distinct from the other plant RIPs reported previously at its N-terminal amino acid sequence.CIP31 can directly impairsynthesis of coat protein(CP)of tobacco mosaic virus(TMV),which resulted in inhibition of TMV long distance movementand multiplication in tobacco plants at concentrations of ng/mL.Furthermore,no toxicity was shown to the growth andfertility of the plants.CIP31 was synthesized only in the presence of Cinchonaglycoside C(1)and was independent of thesalicylic acid(SA)signal pathway.We provided evidence for the SA-independent biological induction of resistance.     

苦瓜多糖的提取、分离纯化及组成性质

正交实验确定提取工艺后,用热水提取法得到苦瓜多糖(MCP).对MCP进行DEAE-32离子交换层析分离,得到3个多糖组分MCP1、MCP2和MCP3. 进一步采用Sephacryl S-400凝胶层析进行分离,经凝胶层析和高效液相色谱检测表明,MCP1、MCP2为均一性多糖组分.通过高效液相凝胶色谱法测定了两者的相对分子质量分别为1.16×106和7.45×105.用PMP衍生化法测定其单糖,结果表明: MCP1系由Man、Rham、GlcUA、GalUA、Glu、Gal、Xyl、Ara等单糖组成的杂多糖,摩尔比为1.03:2.93:1.00:14.95:2.16:30.70:2.85:4.50.MCP2系由Rham、GalUA、Gal、Xyl、Ara等单糖组成的杂多糖,对应的摩尔比为1.63:21.88:4.66:1.00:1.29.紫外光谱表明该多糖不含蛋白质和核酸.     

繁缕核糖体失活蛋白基因克隆及序列分析

采用同源克隆结合RACE法,克隆了繁缕核糖体失活蛋白的全长cDNA,命名为q3(GenBank accession GQ870262)。序列分析结果表明,q3的开放阅读框(ORF)长780 bp,编码259个氨基酸。序列G+C含量为41.5%,与大部分Ⅰ型RIP基因相近。q3编码的蛋白质命名为Q3,理论分子量为28.16 kD,pI为9.44,均与Ⅰ型核糖体失活蛋白相近;包含由23个氨基酸组成的信号肽。功能结构域分析发现,该蛋白含有3个蛋白激酶磷酸化位点、4个络氨酸蛋白激酶磷酸化位点和7个N-肉豆蔻酰化位点。三级结构预测发现,有35.52%的氨基酸残基参与了α螺旋,24.32%的氨基酸残基组成延伸链,40.15%的氨基酸残基随机缠绕其中。基于繁缕及其近缘种核糖体失活蛋白的氨基酸序列构建的系统发育树显示,其结构与经典分类结果基本一致。     

苦瓜籽蛋白的PEG/（NH4）2SO4双水相分离及抑菌作用的研究

优化试验条件影响因素,建立PEG/(NH4)2SO4双水相系统,确定出分离苦瓜籽蛋白的最适PEG6000和(NH4)2SO4质量分数分别是22%、25%,分配系数为0.089,回收率为96%。双水相分离的苦瓜籽蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳显示,主要蛋白质是50 KD4、3 KD和10 KD亚基结合形成的多聚体12S(327 KD)球蛋白,还原条件下出现诸多小于35 kD的蛋白组分,表明蛋白质亚基是通过二硫键结合。抑菌试验显示苦瓜籽蛋白对受试细菌菌和真菌产生明显的抑菌活性,其MIC远低于苯甲酸钠,而且在不同盐离子浓度、温度、pH及紫外线等因素处理时,均具有一定的稳定性。此外试验还表明苦瓜籽蛋白也具有较强的清除羟自由基能力和总抗氧化能力。     

比色法测定苦瓜中的总皂甙

本试验通过对高氯酸和硫酸体系进行比较,选择香草醛-冰醋酸-高氯酸体系作为测定苦瓜皂甙的合适显色条件,并对体系中各个因素逐一考察,确定比色法测定苦瓜皂甙的条件为：0．2mL冰醋酸,0．8mL高氯酸,5％香草醛．冰醋酸溶液,70℃条件下反应20min。试验以苦瓜皂甙建立了苦瓜皂甙测定回归曲线,线性和稳定性可靠,平均加标回收率100．78％,变异系数为1．910％。     

苦瓜化学成分和生物活性的研究进展

本文就近年来国内外对苦瓜的研究情况进行综述,主要概述了其化学成分、生物活性(药理活性和抗虫作用)的进展情况。     

黑木耳菌丝体核糖体失活蛋白的研究

目的：由悬浮培养的黑木耳菌丝体中分离纯化黑木耳的核糖体失活蛋白,对其生化性质及生物学活性进行研究。方法：实验中采用了DEAE-离子交换纤维素,Affi-Gel Blue Gel亲和与Bio-Gel 100柱层析方法。结果：从100g悬浮培养黑木耳菌丝体中得到4.14mg的核糖体失活蛋白,命名为Auriculin。同时证明它在家兔网织红细胞裂解系统中具有抑制蛋白质的翻译活性。结论：经试验证明和文献检索,Auriculin为黑木耳菌分离纯化获得的核糖体失活蛋白,一种新蛋白质。     

Identification of triterpene biosynthetic genes from Momordica charantia using RNA-seq analysis

Cucurbitaceae plants contain characteristic triterpenoids. Momordica charantia, known as a bitter melon, contains cucurbitacins and multiflorane type triterpenes, which confer bitter tasting and exhibit pharmacological activities. Their carbon skeletons are biosynthesized from 2,3-oxidosqualene by responsible oxidosqualene cyclase (OSC). In order to identify OSCs in M. charantia, RNA-seq analysis was carried out from ten different tissues. The functional analysis of the resulting four OSC genes revealed that they were cucurbitadienol synthase (McCBS), isomultiflorenol synthase (McIMS), β-amyrin synthase (McBAS) and cycloartenol synthase (McCAS), respectively. Their distinct expression patterns based on RPKM values and quantitative RT-PCR suggested how the characteristic triterpenoids were biosynthesized in each tissue. Although cucurbitacins were finally accumulated in fruits, McCBS showed highest expression in leaves indicating that the early step of cucurbitacins biosynthesis takes place in leaves, but not in fruits.

Abbreviations: OSC: oxidosqualene cyclase; RPKM: reads perkilobase of exon per million mapped reads     

苦瓜中苦瓜甾苷的提取工艺研究

本研究通过单因素实验和正交实验,采用HPTLC检测方法,以苦瓜甾苷浸提量为考察指标,对影响苦瓜甾苷提取效果的各因素进行了研究。结果表明各因素对苦瓜甾苷提取效果的影响程度从高到低依次为:乙醇浓度>固液比>浸提时间>浸提温度。确定了苦瓜甾苷的最佳提取工艺参数为乙醇浓度80%,浸提温度55℃,浸提时间5h,固液比1:10。     

长白大苦瓜高效再生系统的建立

目的:长白大苦瓜是蔬菜新品种,其高效再生系统的建立有助于蔬菜的快速生产,克服季节性、地域性对蔬菜生产的影响。方法:通过不同激素之间的配比寻找合适的种子萌发、不定芽分化和生根培养基。结果:预处理可有效提高种子萌发率,并获得长势整齐、健壮的无菌苗。添加6-BA 0.5mg/L NAA 0.5mg/L的培养基诱导的不定芽分化率较高,而激素组合6-BA 2mg/L NAA 0.5mg/L则对诱导丛生芽具有较好的效果。添加NAA 0.5mg/L能使试管苗的生根率达到50%。经过3d炼苗,移入腐叶土和泥炭土比例为1∶1的基质土壤中就可以正常生长。结论:长白大苦瓜可以建立高效的再生系统,实现试管苗的快速生产。