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小麦丛矮病毒M蛋白基因的序列测定,表达和鉴定 总被引:2,自引:2,他引:0
从小麦丛矮病毒(WRSV)基因文库含磷蛋白NS基因的质粒中,经亚克隆、测序,得到NS蛋白基因的下游序列,其中含有一读框453nt、编码一分子量约17kD蛋白。用PCR方法获得该读框全长片段并克隆到表达载体pGEX-3X,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以IPTG诱导表达,产物由谷胱甘肽S-转移酶(GST)亲和层析柱纯化后,用蛋白质印迹分析鉴定,结果表明,该读框为编码病毒基质蛋白M的基因。 相似文献
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以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物的总RNA为模板,通过反转录-PCR扩增获得BNYVVRNA3全长cDNA。将其克隆到pGEM-7Zf(+)上,得到重组质粒pGBY56。序列分析结果表明,内蒙分离物RNA3基因组全长为1775nt,其中包含3个开放阅读框架,分别编码25kD蛋白、4.6kD蛋白和一种由59个氨基酸组成的N蛋白。与法国F2分离物、德国G1分离物和日本S分离物相比,其核苷酸序列的同源性分别为96.4%、96.8%和97.3%。将25kD蛋白编码基因克隆到pJW2上,构建了该基因的原核表达载体。SDS-PAGE和Westernbloting分析结果表明,25kD蛋白基因在E.coliBL21(DE3)中经温度(42℃)诱导后,可特异地表达25kD蛋白 相似文献
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小麦丛矮病毒NS蛋白基因的克隆及序列分析 总被引:2,自引:2,他引:0
利用与N蛋白mRNA3'末端顺序相同的20寡聚核苷酸引物,通过点杂交、限制性内切酶分析从小麦丛矮病毒(WRSV)cDNA文库中筛选到编码N蛋白基因下游顺序的cDNA克隆。序列分析表明,该cDNA片段含有一编码的40kD蛋白的开放读框。将该读框的全长cDNA经PCR扩增后,克隆到pGEX-3X上,在大肠杆菌DE3中用IPTG诱导表达,经蛋白质印迹鉴定,该基因为小麦丛矮病毒NS蛋白基因。 相似文献
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将抗癌胚抗原(CEA)单克隆抗体的重链可变区与人的恒定区(Cγ3)连接,制备抗癌胚抗原嵌合重链用于放免治疗及其他导向治疗,可减少人抗鼠抗体反应(HAMA)。为纯化及核素标记抗体,将嵌合重链基因与核心链霉亲和素基因融合。融合基因在大肠杆菌得到高效表达,表达量占菌体总蛋白的24%。SDS-PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为70kD,与其基因编码蛋白质的理论推算值相符。以HRP标记的生物素作为 相似文献
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粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素—3融合蛋白的表达研究 总被引:1,自引:1,他引:0
利用PCR扩增得到粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)完整基因片段,将其分别克隆pGEM-T构建成GM-CSF/IL-3融合蛋白基因,DNA序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克隆对72RNA聚合酶表达载体pT7zz,得到表达质粒pFu,经转化至表达宿主E.coli BL21(DE3),在IPTG诱导下获得融合蛋白目的产物的直接表达。经SDS-PAGE电泳鉴 相似文献
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在所有研究过的人体肿瘤组织或细胞中,p53似乎是突变频率最高的一个基因,研究和检测p53基因及其编码产物的变化将具有重要的意义。我们将野生型p53基因编码区3’端703bp的cD-NA片段插入到大肠杆菌表达载体pBV220中,得到了一个重组体表达质粒pRR33,经热诱导表达,用SDS-PAGE和Western印迹法证实p53蛋白多肽在大肠杆菌中得到了表达,它不仅可用于抗p53蛋白抗体的制备,而且也可用于对p53蛋白羧基端多肽功能的研究。 相似文献
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霍乱毒素B亚单位基因(CtxB)的克隆及其表达 总被引:7,自引:0,他引:7
从霍乱弧菌中抽提基因组DNA,用PCER方法获取霍乱毒素B亚单位基因(CtxB)。序列分析结果表明,CtxB基因编码124个氨基酸,其中编码62位Thr的密码子与文献报道有差异。将CtxB基因插入质粒pGEX-4T-2,构建pGEX-CTXB表达质粒,转化大肠相菌BL21(DE30,筛选表达菌株CTXB/BL21。工程株经IPTG诱导表达,可产生大量的表达蛋白,经SDS-PAGE分析,融合蛋白分子 相似文献