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利用枯草杆菌的分泌系统构建分泌型表达载体表达和分泌外源基因产物具有重要的商业价值。我们用鸟枪法克隆了枯草杆菌染色体的启动子和信号肽序列,将克隆的序列连接到能在枯草杆菌中复制的质粒ｐＵＢ１８上,获得分泌型表达载体ｐＵＳ１８６。为了测试构建的载体ｐＵＳ１８６的功能,将地衣杆菌α－淀粉酶基因的缺失了启动子和信号肽序列的片段重组进该质粒,经过Ｂａｌ３１酶切,Ｔ４ＤＮＡ聚合酶补齐等处理,获得ｐＵＳＡ１８６Ⅱ及ｐＵＳＡ１８６Ⅰ系列质粒,将这些重组质粒转化枯草杆菌ＱＢ１１３０（ａｍｙ－）后都能向胞外分泌淀粉酶,酶活测定结果表明,基因表达水平比用原有的启动子高１－２倍,蛋白质分泌率在８４－９６％之间。 相似文献
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枯草杆菌α-淀粉酶大部分可分泌于培养基中,少量存在于细胞内部,为此α-淀粉酶是枯草杆菌的胞外酶,而且是枯草杆菌主要的胞外酶之一。在培养基中积聚的α-淀粉酶至少在细胞内存在两个调节系统:即α-淀粉酶结构 相似文献
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以自构的质粒pBEl为载体,采用鸟枪法克隆枯草杆菌168突变株GRl0的α－淀粉酶基因,获得了在大肠杆菌中的表达。该基因片段位于7367bp的Bgl Ⅱ酶切片段上。利用质粒pUB110。将此片段亚克隆到枯草杆菌中,同样也获得了表达。本文还测定了该基因克隆子是否有GR10的抗葡萄糖阻遏效应。 相似文献
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利用枯草杆菌的分泌系统构建分泌型表达载体表达和分泌外源基因产物具有重要的商业价值。我们用鸟枪法克枯草杆菌染色体的启动子和信号肽序列。将克隆的序列连接到能在枯草杆菌中复制的质粒ｐＵＢ１８上,获得分泌型表达载体ｐＵＳ１８６。为了测试构建的载体ｐＵＳ１８６的功能,将地衣杆菌α－淀粉酶基因的缺失了启动子和信号肽序列的片段重组进该质粒,经过Ｂａｌ ３１酶切,Ｔ４ ＤＮＡ聚合酶补齐等处理,获得ｐＵＳＡ１８６Ｉ 相似文献
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短短小芽孢杆菌大肠杆菌穿梭分泌表达载体的构建 总被引：3，自引：0，他引：3
应用PCR技术从具有分泌蛋白能力强且没有胞外蛋白酶活性的短短小芽孢杆菌50中分离出细胞壁蛋白基因的多启动子和信号肽编码序列,利用它与质粒pUB110和pKF3-起构建成穿梭分泌表达载体pBKE50,将α0淀粉酶基因引入该载体转化短短小芽孢杆菌50后,发现α－淀粉酶可以活性形式分泌表达,此工作为下一步建立短短小芽孢杆菌高效分泌表达系统奠定了基础。 相似文献
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双功能枯草杆菌诱导型高效表达分泌载体的构建与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
利用大肠杆菌质粒pSP72和枯草杆菌质粒pUB18共整合得到双功能克隆载体pSB。在pSB多克隆位点依次引入枯草杆菌果聚糖蔗糖酶基因启动子-信号肽序列sacBp.s.、地衣芽孢杆菌淀粉酶基因终止子序列α-amyT和短小芽孢杆菌增强子基因degQ,最终构建了双功能枯草杆菌诱导型高效表达分泌载体pSBPTQ。将VasostatinⅠ基因作为靶基因检测sacBp.s.、α-amyT和degQ在pSBPTQ进行外源基因表达时的功能,结果表明,在蔗糖诱导下,sacB启动子有效启动了Vasostatin I基因的表达和分泌,α-amy T提高了VasostatinⅠ基因的转录效率,而degQ明显增强了VasostatinⅠ基因的表达水平。VasostatinⅠ基因在蔗糖诱导下成功表达并分泌到枯草杆菌细胞外,蛋白质分泌效率达到90%左右。质粒稳定性试验结果表明,经过40个世代之后,质粒pSBPTQ在枯草杆菌DB1342中仍旧保持在83%以上。 相似文献
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《生物化学与生物物理进展》1978,(4)
以枯草杆菌168(trp~-)为受体菌,枯草杆菌SH-16(str~R)和枯草杆菌209(lin~R)为供体菌,通过DNA转化而获得抗链霉素,抗林可霉素和色氨酸缺陷回复原养型的各种枯草杆菌转化体。其中,有小部分转化体产生的α-淀粉酶比供体菌高达24%,大部分转化体产生的α-淀粉酶与供体菌差不多或较低,但均比受体菌高。结果表明用DNA转化方法来选育新菌种是有一定价值的。 相似文献
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以枯草杆菌168(trp~-)为受体菌,枯草杆菌SH-16(Str~R)和枯草杆菌209(lin~R)为供体菌,通过DNA转化而获得抗链霉素,抗林可霉素和色氨酸缺陷回复原养型的各种枯草杆菌转化体。其中,有小部分转化体产生的α-淀粉酶比供体菌高达24%,大部分转化体产生的α-淀粉酶与供体菌差不多或较低,但均比受体菌高。结果表明用DNA转化方法来选育新菌种是有一定价值的。 相似文献