MTT法和CCK-8法检测人肝癌细胞活性的对比研究

目的对比分析MTT法和CCK-8法检测人肝癌细胞活性的准确性。方法:同时采用MTT法和CCK-8法检测顺铂浓度在0.05、0.5、5umol/L时,肝癌细胞的致死率。结果:MTT法检测的偏大较大,而CCK-8法始终保持较小的偏差,CCK-8法要比MTT法更为准确,且存在统计学差异显著(P0.05)。结论:CCK-8法检测肝癌细胞优越于MTT法,可以在检测其他细胞增殖上推广应用。     

MTT法检测细菌细胞数的主要影响因素分析

MTT法是生物活细胞计数的灵敏、快速和便捷方法。报告对MTT法应用于细菌细胞数定量分析时的分析前培养时间、MTT反应时间、MTT剂量和检测波长等主要影响因素的分析结果,同时报告MTT反应产物溶解检测与直接检测,以及MTT法与平板菌落计数法定量检测的结果比较。结果如下：Formazan生成量与细菌活细胞数呈正相关,对数生长期变化最明显;MTT为0.25 mg/mL,反应2 h时吸光值与菌落数具有良好的线性关系（r=0.999 8）;Formazan的最大吸收波长为570～580 nm;MTT反应产物溶解检测和直接检测结果经统计学分析无显著性差异（P〉0.05）;细菌细胞数在107～109 cfu/mL范围内,MTT法与菌落计数法定量结果呈现良好的线性关系（r≥0.991 7）。     

两种新型培养细胞数量检测技术的探索

将SRB比色法和结晶紫比色法与MTT比色法与MTT比色法在96孔板培养HeLa细胞的数量及活力测量精确度和操作方法上进行了对比。试验结果显示：SRB比色法和结晶紫比色法的最佳检测波长均为490nm。最佳染液浓度分别为0.4%和0.25%。SRB比色法的检测精确度略逊于MTT法，结晶紫比色法与MTT法无显著差异。另外，此两种检测方法的操作过程更为简便，所需时间也较短，可在一定范围内取代MTT比色法。     

褪黑素对骨肉瘤MG-63细胞的增殖和抑制作用的体外实验研究

目的：研究褪黑素对人成骨肉瘤细胞株MG-63增殖和抑制作用。方法：不同浓度的褪黑素作用于体外培养的MG-63细胞,倒置显微镜下观察MG-63细胞的形态学变化,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度褪黑素对MG-63存活率,细胞计数试剂8（CCK-8）法检测褪黑素对MG-63细胞增殖抑制能力,AnnexinV／PI双染法标记检测细胞凋亡情况以及黏附实验测定细胞黏附能力和培养液中LDH释放量的检测。结果：MTT法检测经褪黑素作用后的MG-63细胞存活率以及细胞黏附能力明显下降,LDH的增加提示MG-63细胞死亡率上升;褪黑素可抑制骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖,5mmol／L的褪黑素对MG-63细胞诱导凋亡作用最明显,不同浓度的褪黑素之间实验结果具有统计学意义。结论：褪黑素能够诱导MG-63细胞凋亡,降低存活率,抑制细胞增殖,是治疗骨肉瘤潜在的靶向药物。     

干扰SET8在胃癌细胞肿瘤进展和顺铂敏感性中的作用

目的 探究SET8对胃癌的进展以及对顺铂敏感性的影响。方法 采用免疫组织化学和蛋白质免疫印迹分析胃癌癌组织中SET8表达,采用qRT-PCR检测胃癌细胞中SET8 mRNA水平;胃癌BGC-823细胞转染SET8-shRNA后,采用CCK-8法检测细胞增殖,采用细胞集落形成实验检测细胞集落形成能力,采用transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力;最后,采用CCK-8法检测干扰SET8表达对胃癌BGC-823细胞顺铂敏感性的影响。结果 胃癌组织及胃癌细胞中SET8表达明显升高;干扰SET8表达可抑制胃癌BGC-823细胞增殖、集落形成、迁移与侵袭,并提高胃癌细胞对顺铂敏感性。结论 干扰SET8表达可抑制胃癌细胞进展并提高顺铂敏感性。     

CCK-8法检测九香虫血淋巴对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用

为了明确九香虫血淋巴对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,本文利用Bradford法检测九香虫血淋巴浓度,用不同浓度的九香虫血淋巴处理体外培养的MCF-7细胞,采用CCK-8法检测九香虫血淋巴对MCF-7细胞的抑制作用。结果表明:九香虫血淋巴能显著抑制人乳腺癌MCF-7细胞的生长,且对MCF-7的抑制率呈时间、剂量依赖关系。     

测定昆虫细胞存活或死亡的MTT方法的改进

MTT方法具有灵敏、简便、稳定可靠、不需同位素等特点。为了摸索测定昆虫细胞存活（或死亡）的MTT方法的各种最适条件,本文以中国棉铃虫细胞系为对象,确定了一些基本参数、并比较了三种MTT测定方法。结果表明：改进的方法所选用的溶剂——pH为4.5的3％SDS异丙醇效果最好,溶解甲所需时间短、OD值高。测定昆虫细胞范围为每孔500～60000细胞,测试波长为560nm,参考波长为690nm.     

620nm低能量红光对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

为研究发光二极管(LED)发射的红光对大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化的影响,体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,620 nm波长的LED置于细胞上方2 cm处,照射剂量分别为0,1,2和4J/cm2.采用CCK-8法检测照射后第2、4天的增殖活性,碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒与von kossa矿化结节染色法检测骨髓间...     

尼罗红荧光优化法快速检测微拟球藻细胞内油脂含量

【目的】利用尼罗红荧光染色法快速检测微拟球藻细胞内的油脂含量。【方法】系统性地调整激发波长与发射波长,确定最佳二甲基亚砜(DMSO)浓度、尼罗红终浓度、染色时间和细胞密度的范围,比较重量法和Triolein标准品的油脂含量分别与荧光强度之间的关系。【结果】分析得出了尼罗红荧光强度与微拟球藻细胞油脂含量的关系,确定优化后染色条件为:二甲基亚砜浓度为5%,尼罗红终浓度为1 mg/L,染色时间为6 min,且细胞密度为(0.5-3.0)×10~6 cells/m L的范围内,激发波长和发射波长分别为515 nm和570 nm。重量法和Triolein标准品的油脂含量分别与尼罗红染色荧光强度之间的关联性,表明尼罗红荧光染色方法可以用来快速准确地检测细胞内的油脂含量,且油脂含量与荧光强度之间正相关,相关系数R~2为0.997 3。尼罗红染色优化后油脂的检测下限达到2μg,大大减少了测定油脂含量所需细胞量。【结论】针对不同种属系统性地确认了荧光激发波长和发射波长,并优化验证得到了最佳尼罗红荧光染色条件,可以快速准确地检测微量微拟球藻细胞内的油脂含量,便于大规模筛选高产油突变藻株。     

MTT法用于药物对L2细胞毒性的实验研究

目的：评价噻唑蓝（MTT）法检测药物对细胞的毒性作用的可靠性。方法：大鼠肺泡上皮L2细胞以叔丁基对苯二酚（TBHQ）10．100μM,BsO以1-10mM分别处理,用MTT法检测细胞活性、JC-1（5,5’,6,6’-四氯．1,1’,3,3’-四乙基苯并咪唑羰花青碘化物）荧光染料法检测细胞线粒体电位改变、台盼蓝排斥实验检测细胞死亡率,分析各指标的情况。结果：在处理剂量范围,MTT法检测到的光密度（OD）值未能达到一般判断的半数抑制浓度（ic50）水平,最高抑制率仅达到30％左右;台盼蓝排斥试验检测数据表明TBHQ的LC50值为50μM,丁硫氨酸亚砜胺（BSO）为5mM;利用JC-1荧光染料判断的半数凋亡剂量分别为50μM和7mM。结论：MTT法作为最常采用的细胞生长抑制检测手段,但在某些特定实验中可能不能客观地反映细胞的活性,建议多种方法结合进行评价。     

猫爪草多糖对小鼠腹腔巨噬细胞活力的调节作用

此次研究旨在探讨猫爪草多糖对体外培养的正常状态下的原代小鼠腹腔巨噬细胞活性的调节作用,以及小鼠腹腔巨噬细胞在体外培养条件下的活力变化情况。以原代培养的小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,设对照组(加入100μL DMEM培养基)和实验组(分别加入25μg/mL, 50μg/mL, 100μg/mL, 200μg/mL,400μg/mL的猫爪草多糖),分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、CCK-8法、乳酸脱氢酶释放法和中性红吞噬实验检测不同浓度的猫爪草多糖对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞活力的调节作用;同时设置24 h、36 h、48 h、60 h和72 h的不同培养时间,观察在体外培养条件下,小鼠腹腔巨噬细胞活力的变化情况。结果表明:与对照组相比,不同浓度的猫爪草多糖均能增强小鼠腹腔巨噬细胞的活力,且猫爪草多糖浓度在100~400μg/mL的细胞活力极显著增强(p<0.01)。此外,各处理组的巨噬细胞在体外培养24~72 h不更换培养液的条件下,48 h处活性最佳。体外培养条件下,一定浓度的猫爪草多糖可以激活小鼠腹腔巨噬细胞,通过猫爪草多糖激活巨噬细胞,可能是猫爪草发挥提升机体免疫力的作用机制之一。此外,体外培养的巨噬细胞虽能存活长达一个月,但仍有一个最佳活力时间。     

α－synuclein对小剂量鱼藤酮导致的线粒体损伤的调控作用研究

建立稳定表达 -synuclein基因的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞,,鱼藤酮作用1、2、4周后分别提取各组细胞线粒体,检测其complexⅠ功能、线粒体膜肿胀度和超氧阴离子的含量。结果显示在1、2周时过表达 -synuclein基因的细胞与对照组细胞相比,前者的complexⅠ的活性高,线粒体膜肿胀度轻,线粒体超氧阴离子的含量少。但4周后,前者的complexⅠ活性明显低于后者,且线粒体膜肿胀度及线粒体内超氧阴离子的含量均显示前者高于后者,也是前者多于后者。由此可见过表达 -synuclein基因的细胞在早期对鱼藤酮的损伤有一定的抵抗作用,但长期作用后可能有加重损伤的作用。提示PD患者多巴胺能神经元内 -synuclein的增高可能对小剂量鱼藤酮导致的线粒体损伤存在双重调节作用,初期可能由于 -synuclein上调引起的预适应改变起到一定的保护作用。而失代偿后,可能由于神经元内积累的 -synuclein聚变,对线粒体膜稳定性的损伤,导致神经元变性死亡。     

miR-142通过靶向HMGB1对宫颈癌细胞生物学行为影响的实验研究

摘要 目的：通过实验探究miR-142靶向高迁移率族蛋白1（high-mobility group box 1 protein,HMGB1）对宫颈癌（cervical cancer,CC）细胞生物学行为的影响及其潜在的作用机制。方法：采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测CC组织和正常组织中miR-142和HMGB1 mRNA及蛋白表达水平,采用荧光素酶报告实验分析miR-142与HMGB1的靶向关系,CCK-8法检测CC细胞生存能力,克隆形成实验检测CC细胞增殖能力,划痕修复实验检测CC细胞迁移能力,基质胶侵袭实验检测CC细胞侵袭能力。结果：CC组miR-142 mRNA和蛋白表达水平显著低于正常组（P<0.05）,HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常组（P<0.05）,且CC癌组织中miR-142和HMGB1 mRNA和蛋白表达水平均呈显著负相关（r=-0.399,P=0.002;r=-0.429,P=0.001）;miR-142与HMGB1存在靶向关系;CCK-8法实验、克隆形成实验、划痕修复实验和基质胶侵袭实验结果显示,miR-142 mimic组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著低于miR-NC组（P<0.05）,miR-142 inhibitor组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著高于miR-NC组;Western Blot实验结果显示,HMGB1过表达时miR-142 mimic+plasmid组HMGB1蛋白表达水平显著高于miR-142 mimic+control plasmid组（P<0.05）,显著低于miR-NC+plasmid组（P<0.05）;CCK-8法实验、克隆形成实验、划痕修复实验和基质胶侵袭实验结果显示,HMGB1过表达时miR-142 mimic+plasmid组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著高于miR-142 mimic+control plasmid组（P<0.05）,显著低于miR-NC+plasmid组（P<0.05）。结论：miR-142可通过靶向负调控HMGB1表达,进而抑制CC细胞生存、增殖、迁移和侵袭。     

正交优化冬虫夏草菌种油混悬制剂

利用油混悬剂独有的剂型特性可提高人工培育冬虫夏草中的接种侵染率, 因而研制高活力冬虫夏草菌种油混悬剂可推动其产业化的发展。根据油混悬剂的特殊性, 对MTT法进行改进及优化, 结果为: 反应时间120 min、反应温度37°C、以甲苯为萃取剂, 活细胞量与琥珀酸脱氢酶活力线性相关。依据该方法筛选制剂中助剂的种类及浓度, 并通过正交试验进一步优化, 获得冬虫夏草菌种油混悬剂高活力配方为: 菌种量0.15 g/mL、硬脂酸铝60 mg/mL、司班-80 50 μL/mL。稳定性试验结果表明, 该制剂在4°C下保     

MTT方法评价微生物细胞活性的探讨

对MTT比色法用于评价微生物细胞活性进行了探讨。本文以大肠杆菌为模式菌株,研究了不同浓度MTT、不同用量、在不同时间对试验结果OD570值的影响,结果表明细菌数在4.9×107－4.9×108个/mL范围内测出的OD570值与细菌浓度呈良好的正相关,0.5 mg/mL MTT用量20 &#61549;L,反应时间20 min时效果最佳,其相关回归方程为y = 0.1769x + 0.03,R2 = 0.9983。     

Assessment of bovine sperm viability by MTT reduction assay

The MTT reduction assay depends on the ability of metabolically active cells to reduce the tetrazolium salt (3[4,5-dimethylthiazol-2-y1]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) to formazan. This study was conducted to examine and validate a simple and less costly MTT test to determine bovine sperm viability and compare the efficiency of this test with a flow cytometer. Fresh ejaculates from eight bulls were included in this study. Semen sample was diluted to 30x10(6) sperms/ml in a Hepes 0.1% BSA. The rates of MTT reduction were measured in microtiter plates after incubation for 1h at 37 degrees C using spectrophotometer (MS2 Reader) at wave length 550nm. Simultaneously split samples of the same semen were tested, using a flow cytometer for sperm viability, mitochondrial activity, and acrosomal integrity using SYBR-14, Rhodamine 123 and LysoTracker Green DNA-26, respectively. The correlation between the results of these tests was calculated using the Pearson correlation coefficients. The results revealed a strong correlation (P<0.001) between the results of MTT reduction rate and the results that simultaneously determined by flow cytometer, yielding correlation coefficients of r=0.950 for sperm viability, of r=0.926 for mitochondrial activity and of r=0.959 for acrosomal integrity. The same correlation coefficient was observed between the values of sperm viability calculated on the basis of MTT reduction rates and the results of flow cytometer. In conclusion, the MTT reduction test was found to be a reliable method in evaluating bovine semen viability and can be used successfully, especially in routine analysis, where practical aspects such as time, costs and practicability are important.     

Resveratrol mobilizes Ca2+ from intracellular stores and induces c-Jun N-terminal kinase activation in tumoral AR42J cells

Resveratrol (3,4',5-trihydroxy-trans-stilbene), a phytoalexin naturally found in grapes and red wine, is a redox-active compound endowed with significant positive activities. In this study, the effects of resveratrol on intracellular free Ca(2+) concentration ([Ca(2+)](c)) and on cell viability in tumoral AR42J pancreatic cells are examined. The results show that resveratrol (100 μM and 1 mM) induced changes in [Ca(2+)](c), that consisted of single or short lasting spikes followed by a slow reduction toward a value close to the resting level. Lower concentrations of resveratrol (1 and 10 μM) did not show detectable effects on [Ca(2+)](c). Depletion of intracellular Ca(2+) stores by stimulation of cells with 1 nM CCK-8, 20 pM CCK-8 or 1 μM thapsigargin, blocked Ca(2+) responses evoked by resveratrol. Conversely, prior stimulation of cells with resveratrol inhibited Ca(2+) mobilization in response to a secondary application of CCK-8 or thapsigargin. In addition, resveratrol inhibited oscillations in [Ca(2+)](c) evoked by a physiological concentration of CCK-8 (20 pM). On the other hand, incubation of cells in the presence of resveratrol induced a reduction of cell viability. Finally, incubation of AR42J cells in the presence of resveratrol led to activation of c-Jun N-terminal kinase (JNK), a mitogen-activated protein kinase responsive to stress stimuli. Activation of JNK was reduced in the absence of extracellular Ca(2+). In summary, the results show that resveratrol releases Ca(2+) from intracellular stores, most probably from the endoplasmic reticulum, and reduces AR42J cells viability. Reorganization of cell's survival/death processes in the presence of resveratrol may involve Ca(2+)-mediated JNK activation.     

A new procedure to asses pollen viability

We tested pollen viability of eight species using four vital dyes, a new peroxidase test together with three other established methods (MTT, Baker’s and X-Gal), to determine their potential to differentiate fresh pollen from pollen heated for 2 h and 24 h at 80°C (killed pollen) and compared the results with in vitro germination. We found that two of three dyes previously employed to determine viability also stained killed pollen, while the new peroxidase test and MTT did not. We suggest that the latter two are the best methods to test pollen viability, since they do not normally stain either killed or aborted pollen. Received: 7 May 1999 / Revision accepted: 25 October 1999