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1.  2006年广州登革热病原体的分离鉴定及其生物学性质的观察  
   于曼  韩剑峰  陈水平  邓永强  姜涛  秦成峰  秦鄂德《生物技术通讯》,2008年第19卷第6期
   目的:对2006年广州流行登革热病原进行分离鉴定及生物学性质研究。方法:采用传代蚊细胞微量培养方法对2006年广州登革热病原进行分离,并通过脑内途径观察其对乳鼠的致病性;经间接免疫荧光和RT-PCR技术,对患者血清标本中的病毒特异抗体及新分离的病原体进行检测和鉴定;将此次分离的病原体与1980年分离的同型毒株进行生物学性质比较。结果:从57份患者血清标本中分离出10株病毒,在传代蚊细胞中可产生稳定的细胞病变并对乳鼠致病;其基因组为登革1型病毒特异的RNA分子,经鉴定为登革1型病毒;此次分离的登革1型病毒与1980年分离的同型毒株在致细胞产生病变的时间和严重程度,蚀斑的大小、形态以及致乳鼠发病的时间等生物学性质上有所不同。结论:2006年广州流行登革热病原为登革1型病毒,且与1980年分离的同型毒株在生物学性质方面存在明显差异。    

2.  冠状病毒是引起广州地区严重急性呼吸综合征(SARS)的主要病因  被引次数:3
   狄飚  何丽娟  周端华  高阳  吴新伟  杨卫路  王鸣  杜琳  刘宇飞  邱季春  陈小双  陈芳  张玮  鲁恩洁  杨焕明  毕胜利《病毒学报》,2003年第19卷第3期
   为查找引起广州地区流行的严重急性呼吸综合征(SARS)的病原体,采集患者漱口液及尸解标本,用组织培养法接种人胚肺细胞、MDCK细胞、Hep-2细胞和鸡胚分离病毒,用间接免疫荧光法检测患者恢复期血清lgG抗体,确定分离的病原是SARS的主要病因,再用套式RT—PCR、免疫电镜法鉴定病原。结果用人胚肺、Hep-2细胞在75份漱口液和3例尸解组织中分离出13株病原体,经套式RT—PCR扩增出110bp的特异产物,经测序证实为冠状病毒。制备冠状病毒的抗原,检测30份SARS病人恢复期血,其中26份血清lgG抗体阳性。同时检测30份普通发热病人血清作对照,IgG抗体全部阴性。由此证明,经组织培养分离到的病原体是引起SARS的致病因子,用分子生物学方法测序后证实为冠状病毒。    

3.  SARS冠状病毒的分离培养与鉴定  被引次数:7
   江丽芳  赵卫  晏辉钧  方丹云  周经姣  龙北国  吴义芳  周俊梅  梁瑜  张文炳  吴强  郭辉玉《中国病毒学》,2003年第18卷第6期
   采集急性期病人的咽拭子或漱口液,用Vero 、Vero E6、MDCK、Hela 、Hep-2等传代细胞,人胚肺二倍体细胞(HEL)和人胚肺(HP)细胞分离培养严重急性呼吸系统综合症(SARS)的病原体.结果用Vero、Vero E6、MDCK和HP细胞从标本中分离到一株病毒.间接免疫荧光试验发现,恢复期病人血清可与所分离的病毒起反应,在胞膜和胞浆中出现翠绿色荧光;中和试验结果表明,恢复期病人血清能中和病毒对细胞的致细胞病变作用;电镜下可观察到冠状病毒样颗粒;RT-PCR法可扩增到冠状病毒特异性基因片段,且其核苷酸序列与国内外发表的SARS冠状病毒(SARS-Cov)相应的基因序列相符,同源性达到100%.从传染性非典型肺炎病人的漱口液中分离到SARS冠状病毒,这种病毒与传染性非典型肺炎密切相关.    

4.  SARS冠状病毒的分离培养与鉴定  
   江丽芳 赵卫 晏辉钧 方丹云 周经姣 龙北国 吴义芳 周俊梅 梁瑜 张文炳 吴强 郭辉玉《Virologica Sinica》,2003年第18卷第6期
   采集急性期病人的咽拭子或漱口液,用Vero、Vero E6、MDCK、Hela、Hep-2等传代细胞,人胚肺二倍体细胞(HEL)和人胚肺(HP)细胞分离培养严重急性呼吸系统综合症(SARS)的病原体。结果用Vero、Vero E6、MDCK和HP细胞从标本中分离到一株病毒。间接免疫荧光试验发现,恢复期病人血清可与所分离的病毒起反应,在胞膜和胞浆中出现翠绿色荧光;中和试验结果表明,恢复期病人血清能中和病毒对细胞的致细胞病变作用;电镜下可观察到冠状病毒样颗粒;RT-PCR法可扩增到冠状病毒特异性基因片段,且其核苷酸序列与国内外发表的SARS冠状病毒(SARS-Cov)相应的基因序列相符,同源性达到100%。从传染性非典型肺炎病人的漱口液中分离到SARS冠状病毒,这种病毒与传染性非典型肺炎密切相关。    

5.  一株引起普通棉耳狨猴死亡病毒的分离与鉴定  
   石建党 李晓眠 刘凤勇 金孟珏 张国际 刘民 李梅《Virologica Sinica》,2003年第18卷第4期
   1999年6月,天津医科大学动物中心饲养的珍贵灵长类实验动物——普通棉耳狨猴群体中暴发急性呼吸道传染病,病死率高达33%。在排除细菌感染的基础上,通过死亡狨猴肺组织匀浆接种鸡胚和MDCK细胞的分离培养,分离出一株具有高血凝效价的病毒株。经双份血清试验及动物接种试验,确认该病毒是本次疾病流行的病原体。又进一步通过与常见呼吸道病毒标准毒株及血清进行交叉血凝抑制试验、电镜观察、RT—PCR技术并结合生物信息学方法对该毒株进行鉴定,确认本次疾病流行的病原体是副流感1型病毒中的仙台病毒。    

6.  一株引起普通棉耳狨猴死亡病毒的分离与鉴定  被引次数:11
   石建党  李晓眠  刘凤勇  金孟珏  张国际  刘民  李梅《中国病毒学》,2003年第18卷第4期
   1999年6月,天津医科大学动物中心饲养的珍贵灵长类实验动物--普通棉耳狨猴群体中暴发急性呼吸道传染病,病死率高达33%.在排除细菌感染的基础上,通过死亡狨猴肺组织匀浆接种鸡胚和MDCK细胞的分离培养,分离出一株具有高血凝效价的病毒株.经双份血清试验及动物接种试验,确认该病毒是本次疾病流行的病原体.又进一步通过与常见呼吸道病毒标准毒株及血清进行交叉血凝抑制试验、电镜观察、RT-PCR技术并结合生物信息学方法对该毒株进行鉴定,确认本次疾病流行的病原体是副流感1型病毒中的仙台病毒.    

7.  从SARS患者血清发现双相型深部真菌的报告  
   余国华  李丽  向军  郭海亮《中国实验动物学报》,2005年第13卷第3期
   目的从临床诊断的SARS病人血清中分离病原微生物。方法采用SARS患者血清通过NIH小鼠腹腔、脑和鸡胚卵黄囊和尿囊接种、人胚肺细胞呼吸道病毒培养和系列细菌培养分离病原体,所获微生物经形态学、血清学、生化学和法国梅里埃(Vitek)全自动微生物系统鉴定,复制动物模型和病理学检查。结果从SARS病人血清分离的微生物,检定结果为一种双相型深部嗜肺性真菌,属流行性肺组织胞浆菌(球状酵母菌)。结论分离的肺组织胞浆菌(球状酵母菌)是呼吸系统深部真菌。    

8.  在传染性非典型肺炎患者组织和血液中发现冠状病毒  被引次数:7
   李德新  于建石  胡孔新  段淑敏  毕胜利  许文波  崔爱利  张燕  洪涛  吴昊  窦志勇  何雅慧  韩玉霞  刘刚  杜润蕾  张全福  刘琴芝  梁米芳  王建伟  郭元吉  徐红  戴淑玲  董小平  梁国栋  阮力《病毒学报》,2003年第19卷第2期
   用RT-PCR从广东两例传染性非典型肺炎(非典型肺炎)死亡病例的肺和脾标本中,以及北京、辽宁和宁夏非典型肺炎患者血清中,扩增出冠状病毒核苷酸序列。这些PCR产物为冠状病毒RNA聚合酶基因部分片段,所有测定的序列和国内外SARS病毒序列相同。这些发现提示,冠状病毒和非典型肺炎关系密切,有助于确定我国非典型肺炎的病因。所建立的套式PCR方法可以用于检测临床标本。由于血液中存在SARS病毒,进行血清操作时需要注意安全保护。    

9.  临床死亡川金丝猴心肌炎病例的诊断及病因分析  
   贺文琦  陆慧君  宋德光  成军  盖显英  陈启军  高丰《兽类学报》,2008年第28卷第1期
   对临床送检的急性死亡川金丝猴进行解剖,观察各组织脏器的大体病理变化并对其进行中性甲醛固定、石蜡包埋切片和病理组织学分析;无菌操作进行肉汤法分离培养细菌和细胞培养法分离病毒,通过形态学、动物回归试验和RT-PCR方法对分离的病原进行培养、鉴定.结果,眼观心肌呈局灶性坏死,镜下心肌纤维断裂、崩解,肌间有大量炎性细胞浸润,呈典型的病毒性心肌炎变化;从肺脏中分离获得大肠杆菌;电镜负染可见心肌组织匀浆液和心包积液以及其Vero细胞培养物中均有直径在20~25 nm,形似小RNA病毒的粒子存在;RT-PCR检测结果说明所分离病毒为柯萨奇B型病毒;动物回归试验证实,分离的大肠杆菌对昆明种小鼠无致病性,而分离的病毒对小鼠有致病性,且病理组织学变化与金丝猴相似.根据临床症状、病理剖检和病理组织学变化特征,结合病原分离结果综合分析,推测该金丝猴死亡的原因可能与该病毒感染有关.    

10.  冠状病毒S蛋白及其受体的结构和功能  
   沈媚  陈冰清  于瑞嵩  朱于敏  李震《微生物学通报》,2017年第44卷第10期
   冠状病毒是有包膜的单股正链RNA病毒。作为人和动物的重要致病原,冠状病毒感染主要导致宿主呼吸系统、肝脏、胃肠道以及神经系统出现急性或慢性症状。2000年以来,传染性非典型肺炎和中东呼吸综合征的暴发,以及猪流行性腹泻病毒在全球猪群中的暴发流行,引起大家对动物冠状病毒的极大重视。S蛋白具有受体结合活性和膜融合活性,是冠状病毒感染细胞的关键蛋白;S蛋白在病毒的组织或宿主嗜性和毒力等方面发挥重要作用。本文重点对近年来冠状病毒S蛋白的结构、功能以及S蛋白与受体相互作用的研究进行综述,以期为冠状病毒的入侵机制和反向遗传学研究以及受体阻断药物的开发提供参考。    

11.  SARS冠状病毒分离培养和鉴定的实验研究  被引次数:1
   鲍琳琳  涂新明  蒋虹  佟巍  丛喆  魏强  朱华  张扬清  高虹  邓巍  黄澜  刘亚莉  王健伟  秦川《病毒学报》,2005年第21卷第1期
   建立严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒分离、培养方法,为SARS冠状病毒动物模型的建立提供实验依据,并根据病毒在体内存活的时间确定检测指标。选用已鉴定为SARS冠状病毒的毒株,经过鼻腔接种感染恒河猴。定期采集咽拭子标本,分离血清或血浆,用Vero细胞进行病毒培养、分离。结果显示,在SARS冠状病毒感染恒河猴后2、5、7天,可以从拭子中分离到病毒,5~15天可在猴肺、脾、肝、肾和淋巴组织中分离到病毒,并用免疫荧光法和RT-PCR方法进行了确定。首次实验证实了SARS冠状病毒可在恒河猴体内复制。SARS病毒的成功分离是SARS冠状病毒动物模型建立的主要依据,在进行疫苗安全性和药效评价等工作中,病毒分离可作为药物筛选、疫苗评价的重要指标。    

12.  中国首次分离的Tahyna病毒毒株的生物学特性及分子进化特征分析  
   吕志  付士红  吕新军  张松  童苏祥  高春代  姚新华  梁国栋《病毒学报》,2011年第2期
   2006年夏季,本课题组在新疆喀什地区伽师县库蚊标本中分离到我国首株Tahyna病毒XJ0625株,并发现当地不明原因发热患者存在该病毒感染。本研究通过细胞培养、动物实验、电镜观察、间接免疫荧光及交叉保护中和试验等研究对XJ0625病毒株的细胞易感性、动物致病性、形态学及抗原性等特征进行观察,并应用分子生物学软件对其分子进化特征加以分析。结果发现该毒株可以引起BHK-21细胞病变,乳鼠颅内接种该毒株可以引起死亡。与其他布尼亚病毒形态相似,Tahyna病毒为球形有包膜病毒。该病毒与国际流行Tahyna病毒Bardos92株的抗体作用,在间接免疫荧光试验中呈现阳性荧光信号。空斑减少中和试验结果显示该抗体对XJ0625病毒株的中和效价为1∶3 200。核苷酸序列分析显示,该病毒与Bardos92株处于同一个进化分支,二者S节段同源性为91.8%,M节段同源性为81.9%。    

13.  江苏省不明原因轻型呼吸道传染病暴发的病因学研究  被引次数:5
   许文波  崔爱利  史智扬  汪华  张勇  唐震  刘和平  李显  朱贞  唐浏英《病毒学报》,2005年第21卷第5期
   自2004年4月18日起至6月末,江苏省东台市发生以发热、咽部充血、扁桃体肿大为临床表现的原因不明的疫情暴发,发病人群以中小学生、幼儿为主,地域以许河镇、新街镇以及临近乡镇为主。疫情涉及东台市9个镇,合计报告709例,分布在75个学校,240个班级。暴发的特点为传染性强,短期内出现大量的患者,发病有班级聚集性特点,未发现成人感染。临床表现以发烧(100%)、咽部充血(91.40%)、扁桃体肿大(60.22%)、咽痛(50.00%)为主;X线检查可发现肺纹理增强(90.3%)。用Hep-2细胞从患儿20份咽拭子标本中分离到12株病毒,经PCR扩增腺病毒L3部分基因及其PCR产物的序列测定和分析,证实这12株病毒为腺病毒3型;对28份咽拭子标本直接进行DNA提取和PCR扩增,有17份标本PCR扩增L3部分基因呈阳性,经序列测定和分析,也为腺病毒3型。这29个阳性标本L3基因的1446个核苷酸的序列与GenBank上所发表的腺病毒3型序列同源性高达99,5%。双份血IgG检测:对江苏省采集10份患儿急性期和恢复期双份血清,以从患儿咽拭子分离到的腺病毒3型作为抗原,进行病毒抗体测定,6份患儿的双份血清腺病毒总IgG滴度呈4倍以上增高。患儿急性期血IgA检测:对暴发疫情34例患儿急性期血清(发病时间为1~3天)进行腺病毒IgA抗体测定,结果有9份标本为阳性,1份标本为可疑阳性,阳性率为26.47%。IgA阳性率低可能与血清采集时间过早有关,机体还未全部产生IgA。另外,还对江苏省送检的从患儿血培养基培养的细菌毒株进行了鉴定,对其16S rRNA基因进行了基因扩增及序列分析,序列测定和分析提示为A组M3型化脓性链球菌。实验研究结果并结合此次疫情的流行病学和患儿的临床表现,证实腺病毒3型是引起此次儿童不明原因轻型呼吸道传染病暴发的病原体,部分病例伴有原发或继发化脓性链球菌感染。    

14.  钙化胎盘中纳米细菌的分离培养与鉴定  
   郭亚楠  张名均  张德纯  陆合  沈学成《中国微生态学杂志》,2010年第22卷第12期
   目的分离、培养与鉴定钙化胎盘中的纳米细菌,为进一步探讨纳米细菌致胎盘钙化的机制奠定基础。方法剖腹产手术收集25份钙化胎盘组织标本,通过脱矿、过滤、离心处理,用细胞培养的方法进行纳米细菌培养,观察其生长情况。运用透射电镜、扫描电镜观察培养物形态。结果 (1)培养3~4周后,对钙化组织培养标本进行观察,发现部分培养管底部出现紧贴管壁生长的白色沉淀物。(2)扫描电镜见纳米细菌为大颗粒成簇分布。(3)透射电镜可见纳米细菌为针状物的聚集体,大小不一。结论首次从钙化胎盘组织中分离培养鉴定出纳米细菌,表明其感染与胎盘钙化有关,需进一步研究其矿化机制以及所致钙化对后代的影响。    

15.  急性出血性结膜炎爆发中柯萨基病毒A_(24)变种的分离与鉴定  
   吴家驹  张齐良  胡必勇  陈茂义  胡希民  潭顺华  宋平《Virologica Sinica》,1990年第1期
   1988年7—11月湖北沙市出现了一次急性出血性结膜炎(红眼病)的爆发流行,市区发病率为7%,累计患者不少于1.7万人。用Hela细胞从38例典型红眼病患者眼拭中分离出病毒28株(74%),理化试验与电镜观察提示为肠道病毒,根据其生物学特性与特异性中和实验证明为柯萨基A组24型变种(CA24V)。检测的两个毒株中一株对乳鼠有致病性,而另一株无致病性。流行后红眼病48名患者恢复期血清CA24V特异性中和抗体阳性率(以≥1:4为阳性计)为81.2%,非红眼病对照血清阳性率为14.6%,差异极显著(P<0.01),结合流行病学与临床特征,认定是CA24V引起的AHC爆发流行。    

16.  水痘-带状疱疹病毒分离和鉴定  被引次数:2
   王桂秋  彭佩霞  王常玉  庞成华  戚艺华  王用楫《病毒学报》,1986年第4期
   本文报告了用7份水痘或带状疱疹病人的皮肤病变水泡液,在人胚肺二倍体细胞(2BS)中培养传代,分离到7株病毒分离物,第一株是由带状疱疹病例分离到的,经细胞病变、核内包涵体和电镜形态学观察,认为此分离物属于疱疹病毒科成员;经血清学鉴定,证实为水痘-带状疱疹病毒(VZV),其宿主范围与疱疹病毒(HSV)不同,余6株分离物经ELISA、IFA及CF血清学试验鉴定均为VZV。    

17.  大林姬鼠体内流行性出血热病毒的分离与鉴定  被引次数:2
   何亦祥  李忠义  刘江秋  胡玲美  温青莉  崔微《微生物学杂志》,1985年第1期
   本文报告用A-549细胞从5份流行性出血热(EHF)免疫荧光(IF)阳性的中国东北林区的大林姬鼠鼠肺中分离出两株与EHF相关的病原体,现已稳定传至第10代。用第8代感染细胞制成滴片标本,经IF染色检查,细胞浆内有特异性颗粒荧光。并对其中一株(A54)进行了系统鉴定,经特异性阻断试验、过    

18.  登革病毒流行株的分离鉴定及其毒力位点变异研究  被引次数:3
   方丹云  周经姣  黄骥斌  韩艳平  江丽芳《生物技术》,2006年第16卷第2期
   目的:从登革热患者血清中分离登革病毒,鉴定流行株的血清型及其毒力。对其中两分离株E基因进行序列测定,分析其可能的毒力位点变异。方法:采集临床诊断为登革热患者急性期血清91份,接种于C6/36细胞分离病毒,应用间接免疫荧光法鉴定及分型。并通过乳鼠脑内接种和空斑试验,测定分离株的毒力。扩增2株分离株E基因,克隆到pGEM-T载体进行序列测定,分析变异位点。结果:在91份血清中经2~3次传代分离出8株病毒,鉴定为登革1型病毒。在E蛋白影响毒力的3个区段中,两分离株有3处存在变异。结论:推测此次广州地区流行登革热可能由DEN 1型病毒感染引起,流行株的毒力较弱。毒力减弱可能和其基因位点变异有关。    

19.  五、轮状病毒的细胞培养  
   白植生  方悦群《微生物学免疫学进展》,1985年第4期
   近10年来发现的与人急性胃肠炎有关的病毒的共同特征之一就是难于在细胞培养或器官培养中生长。这些病毒包括轮状病毒、副轮状病毒、Norwalk病毒群、腺病毒、冠状病毒及其它小圆病毒如星状病毒、萼状病毒等。ECHO病毒和Coxsackie病毒虽较容易分离培养,但它们与急性腹泻关系不大。因此,细胞培养法在腹泻病毒研究方面没有发挥更大的作用。腹泻病毒的分类鉴定主要是靠电镜法。    

20.  初断乳大鼠视网膜微血管周细胞的分离培养  
   杨密清  刘光辉  王航  黄陈稳  郑永征  任秉仪  周子鑫  杨巍  纪斌峰  孟春《中国细胞生物学学报》,2014年第7期
   探讨、优化初断乳大鼠视网膜微血管周细胞(retinal microvascular pericytes,RMPs)的分离、培养方案。分别从15只初断乳大鼠及15只成年大鼠中剜取眼球,采用眼科显微手术器械分离获取视网膜,经碎化、消化、过滤处理,收集视网膜微血管片段,予接种培养。MTT法测绘RMPs生长曲线,通过倒置显微镜观察RMPs形态,免疫荧光法鉴定周细胞标记物。比较2组之间视网膜分离操作时间、完整性、原代细胞数量、周细胞形态和表面标记物表达。结果显示,初断乳大鼠视网膜均成功分离,其中24眼视网膜呈整片分出,6眼视网膜破裂呈碎片状,单个眼球视网膜分离时间为14.3~45.5 s。视网膜分离操作时间及完整性与成年大鼠差异无统计学意义(P0.05),初断乳大鼠原代RMPs细胞产量较成年大鼠高,细胞增殖能力强,细胞形态及表面标记物与成年大鼠一致。研究结果表明,初断乳大鼠视网膜是一种可用于RMPs培养的良好组织原料,该实验成功建立了初断乳大鼠RMPs分离培养体系。    

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