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1.
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银离子对辣根过氧化物酶的影响
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刘成 韩宏岩 张颖 许维岸《生物技术》,2006年第16卷第4期
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实验研究Ag 对HRP的影响对检测银的污染有重要意义。以ABTS[2,2-连氮-双-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)]和H2O2为底物,在pH值5.0的条件下,用分光光度法考察了Ag 存在下的辣根过氧化物酶催化氧化反应。Ag 对辣根过氧化物酶的催化活性显示出抑制作用,并进一步分别探讨了对两种底物的抑制类型和对酶结构的影响。结果表明Ag 对底物H2O2而言,对酶的抑制效应属于反竞争性抑制类型,抑制常数Ki=14.83mmol/L;对底物ABTS而言,对酶的抑制效应属于非竞争性抑制,抑制常数Ki=16.139mmol/L。不同浓度Ag 分别与酶作用后,测定酶的内源荧光光谱。光谱结果表明Ag 影响酶活性的同时也影响酶的构象。
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2.
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植物过氧化物酶的生理作用 被引次数：13
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吴明江 于萍《生物学杂志》,1994年第6期
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过氧化物酶(EC·1·11·1·7)是一种以血红素为辅基的氧化酶。生物学研究中常用的过氧化物酶(POD)为辣根过氧化物酶(HRP),该酶为糖蛋白。 POD能催化H_2O_2氧化酚类物质、细胞色素C、维生素C、亚硝酸盐、无色染料、吲哚、胺,以及无机离子,特别是碘离子。可
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3.
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反相胶束体系中辣根过氧化物酶的活力和动力学性质 被引次数：6
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王顺光 吉鑫松《生物化学与生物物理学报》,1995年第27卷第4期
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本文系统研究辣根过氧化物酶在ＣＴＡＢ／Ｈ２Ｏ／ＣＨＣ．３－ｉｓｏｏｃｔａｎｅ（１∶１，Ｖ／Ｖ）反相胶束体系中的催化行为。在一定条件下酶反符合Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ动力学。研究水含量、底物浓度、ＰＨ、温度、表面活性剂的浓度等对酶反应的影响，结果表明表面活性剂对酶表现非竞争性抑制作用，高浓度的过氧化氢抑制酶活，最适ＰＨ为７．０。在低水含量（Ｗ０＜５）的胶束体系中保温后，酶的活力发生不可逆的改
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4.
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毛细管内均相辣根过氧化物酶（HRP）与核酸杂交偶联HRP催化化学发光比较研究
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向安 汪钦 包晗 颜真 郭晏海《生物磁学》,2011年第5期
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目的：了解毛细管内核酸偶联和游离辣根过氧化物酶（HRP）催化化学发光差异。方法：不同浓度HRP和经核酸杂交固定于毛细管内壁HRP催化化学发光反应。结果：①游离HRP催化化学发光线性检测范围窄（2.7×10-5-1.3×10-6mg/ml,R2〉0.96）,下限为1.0×10-7mg/ml;②2.0×1014-2.0×106copies/ml的5μl单链DNA杂交后,1.0-10min时DNA浓度M对数（lgM）与化学发光I值线性相关（R2〉0.99）,且大于阴性I值平均数＋3倍标准偏差（s.d）;③5.0×1011-5.0×106copies/ml的5μl PCR产物杂交后,10min内PCR产物对数lgM与I值线性相关（R2〉0.97）,且大于阴性I值平均数＋3倍标准偏差（s.d）。4.0-7.0min内lgM与I值的R2〉0.99,3次平行检测标准偏差〈5.0%。结论：毛细管内核酸杂交的HRP催化化学发光检测线性范围宽、灵敏度高、底物用量少,有望用于临床核酸分子杂交检测。
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5.
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毛细管内均相辣根过氧化物酶(HRP)与核酸杂交偶联HRP催化化学发光比较研究
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向安 汪钦 包晗 颜真 郭晏海《现代生物医学进展》,2011年第11卷第5期
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目的:了解毛细管内核酸偶联和游离辣根过氧化物酶(HRP)催化化学发光差异。方法:不同浓度HRP和经核酸杂交固定于毛细管内壁HRP催化化学发光反应。结果:①游离HRP催化化学发光线性检测范围窄(2.7×10-5-1.3×10-6mg/ml,R2>0.96),下限为1.0×10-7mg/ml;②2.0×1014-2.0×106copies/ml的5μl单链DNA杂交后,1.0-10min时DNA浓度M对数(lgM)与化学发光I值线性相关(R2>0.99),且大于阴性I值平均数+3倍标准偏差(s.d);③5.0×1011-5.0×106copies/ml的5μl PCR产物杂交后,10min内PCR产物对数lgM与I值线性相关(R2>0.97),且大于阴性I值平均数+3倍标准偏差(s.d)。4.0-7.0min内lgM与I值的R2>0.99,3次平行检测标准偏差<5.0%。结论:毛细管内核酸杂交的HRP催化化学发光检测线性范围宽、灵敏度高、底物用量少,有望用于临床核酸分子杂交检测。
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6.
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基于“酶-邻氨基苯酚”体系的电化学免疫传感方法及其应用
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胡海燕 邓王平 宋世平 樊春海《生物物理学报》,2010年第12期
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本研究建立了一种新的电化学免疫传感方法,并将其应用于实际样本的检测。采用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)的新型底物邻-氨基苯酚(O-aminophenol,O-AP)构建了基于酶-邻氨基苯酚体系的电化学免疫传感方法,并用于血吸虫抗体检测。邻-氨基苯酚在辣根过氧化物酶催化双氧水(H2O2)时被氧化,生成的产物3-氨基吩噁嗪能通过电化学方法检测。实验结果验证了基于酶-邻氨基苯酚的新型蛋白检测体系用于检测人血清中血吸虫抗体的可操作性,实现了实际样本的检测。并且,采用方波伏安法作为最终检测方法,具有更高的灵敏性。
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7.
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脱落酸的酶标免疫测定 被引次数：1
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季本仁 段金玉《云南植物研究》,1986年第2期
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使用国产辣根过氧化物酶(HRP)合成酶标记物,用竞争法进行了植物内源激素脱落酸(ABA)的酶标免疫测定研究。测定范围为0.0125ng—100ng,在此范围内logitB/B。与ABA浓度的对数之间呈较好的线性关系。检测的灵敏度达到5×10~(-14)克分子。比较了两种酶标记方法对于测定的影响,结果发现直接使ABA共价结合到HRP上形成ABA-HRP酶标记物比先将ABA与牛血清白蛋白(BSA)结合后,然后进一步再与HRP反应形成ABA—BSA—HRP复合物灵敏度高,非特异性吸附小,而且合成步骤较少。酶标记物的稀释度直接影响测定的灵敏度和浓度对数与logit B/B。之间的线性关系好坏;在以每毫升3—6微克免疫球蛋白包埋免疫吸附板进行测定时,用每毫升5微克酶标记物的浓度获得了最佳结果。
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8.
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生物酶催化聚合的研究进展 被引次数：1
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马艳芬 吕生华 刘岗 董凌霄 李芳 王飞 郑新建《生物技术通报》,2010年第4期
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酶催化聚合反应是近年来的研究热点之一,氧化还原酶是应用广泛的一类催化聚合酶.概括总结了近年来酶促聚合反应的研究进展,重点叙述了辣根过氧化物酶(HRP)、大豆过氧化物酶(SBP)和漆酶(laccase)的结构、催化机理以及它们在酶催化聚合中的应用概况.
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9.
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应用异型双功能交联剂制备酶-抗体结合物
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王世中 乔梅《中国生物化学与分子生物学报》,1985年第1卷第2期
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酶标免疫测定法(ELISA)中最关键的化合物是酶-抗体结合物,将酶和抗体交联起来需用交联剂。本文作者使用了N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(简称SPDP)将辣根过氧化物酶(HRP)和兔抗小鼠IgG(兔IgG)交联起来。我们试验了SPDP/HRP,SPDP/IgG和HRP/IgG的不同比例,以期获得活性高的酶-抗体结合物。此外还研究了从结合物中去除自由HRP和自由IgG的方法。用SDS-PAGE及硝酸纤维膜电泳转移法证明本法制备的结合物不含HRP及IgG的自身聚合物。用ELISA法鉴定结合物制品时,一般稀释度可达到1:10,000以上,有的可达到1:20,000(当结合物浓度A_(280nm)=1.0,底物显色A_(492nm)=1.0时)。
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10.
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酶免疫组织化学技术
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曾玉明《微生物学杂志》,1984年第3期
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酶免疫组织化学技术,是以辣根过氧化物酶(Horsenadish peroxidase 简称HRP)结合在抗体、抗原或中间体上,对组织或细胞进行的免疫化学反应。由于酶对底物的对数放大作用和成色反应,增强了分辨力,使抗原抗体反应具有较高的的敏感性和特异性。本法具有操作简便,试剂稳定和不需用特殊设备等优点;在细胞涂片、冰冻切片和石腊切片中,均可在光镜或电镜下定位或定量组织细胞中的各种成份和研究细微结构等。因此,自1966年 Nakane 等建立酶免疫技术以来,发展很快。最初主要是通过化学交联剂将酶与抗体交联,用以检测组织中的相应抗原,相
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11.
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毛白杨细胞质抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆及表达分析
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张 蕾 王昱堃 刘 蕾 尹 玢 曹 山 陆 海《西北植物学报》,2014年第34卷第2期
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利用同源克隆技术得到1个毛白杨细胞质抗坏血酸过氧化物酶基因,命名为PcAPX。该基因编码249个氨基酸残基,预测分子量为33.01kD。采用原核表达技术在大肠杆菌中表达并纯化该蛋白并进行酶活性分析,结果表明:重组PcAPX蛋白对抗坏血酸(AsA)和过氧化氢(H2O2)有很高的活性,其对抗坏血酸的米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax)分别为(0.71±0.03)mmol·L-1和(0.41±0.02)mmol·L-1·min-1·mg-1;对过氧化氢的Km和Vmax分别为(0.60±0.21)mmol·L-1和(0.35±0.12)mmol·L-1·min-1·mg-1,表明PcAPX对AsA和H2O2拥有较高的催化底物的能力和催化效率。利用实时定量RT-PCR分析毛白杨PcAPX基因的表达模式,结果表明其在老叶中表达量高于新叶、韧皮部、形成层和根部。该研究结果将进一步促进毛白杨APX基因家族成员参与植物生长调控的研究。
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12.
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水溶性有机溶剂对Fe3O4磁性纳米粒子过氧化物酶样活性的影响
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吴琦 容杰 单志 陈惠 杨婉身《生物工程学报》,2009年第25卷第12期
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采用化学共沉淀法合成10nm的Fe3O4磁性纳米粒子(MNPs)。以辣根过氧化物酶(HRP)为对照,研究了四氢呋喃、1,4-二氧六环、丙酮、N,N-二甲基酰胺、甲醇和二甲亚砜等6种水溶性有机溶剂对Fe3O4MNPs过氧化物酶样活性的影响。结果表明,在有机溶剂浓度(V/V)为30%～75%时,Fe3O4MNPs相对酶活力迅速下降至近于完全失活。在15%有机溶液中,Fe3O4MNPs的最适反应温度多为50oC,最适反应pH在3.6左右。经15%有机溶液处理后的水相反应酶活显示,Fe3O4MNPs表现出对有机溶剂较强的热稳定性和pH稳定性,且对75%有机溶液也具有良好的稳定性。以上多数性质均优于相同条件下的HRP组,表明Fe3O4MNPs是一种比HRP对水溶性有机溶剂更稳定的过氧化物酶。由于Fe3O4MNPs具有易制备、成本低、易于磁分离和可循环使用的特点,因此其具有替代HRP用于有机催化的应用潜力。
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13.
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青蒿过氧化物酶的克隆及其在体外对青蒿素生物合成的影响 被引次数：1
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章焰生 刘本叶 李振秋 叶和春 王红 李国凤 韩军丽《Acta Botanica Sinica》,2004年第46卷第11期
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用RACE方法从青蒿(Artemisia annua L.)高产株系001中克隆了一个过氧化物酶。将此基因在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS细胞中进行原核表达得到重组蛋白(APOD1),表达的蛋白分别以抗坏血酸、愈创木酚为底物进行过氧化反应,结果显示,APOD1催化愈创木酚的活力是抗坏血酸的1.8倍左右,由此表明,克隆的APOD1类属于植物经典过氧化物酶(第三大类过氧化物酶)。经与其他植物过氧化物酶同源性比较分析,推测APOD1的氨基酸序列与白羽扇豆(Lupinus albus)、辣根菜(Armoracia rusticana)、小麦(Triticum aestivum)、烟草(Nicotiana tabacum)和蕃茄(Lycopersicon esculentum)的一致性分别为42.0％、36.2％、38.9％、33.6％和32.8％。Northern杂交分析表明,此基因在青蒿的根、茎和叶中均有表达。加入APOD1至青蒿细胞提取液有利于青蒿酸向青蒿素的生物转化,但APOD1并不能直接以青蒿酸作为氧化底物。
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14.
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青蒿过氧化物酶的克隆及其在体外对青蒿素生物合成的影响
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章焰生 刘本叶 李振秋 叶和春 王红 李国凤 韩军丽《Journal of Integrative Plant Biology》,2004年第46卷第11期
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用RACE方法从青蒿(Artemisia annua L.)高产株系001中克隆了一个过氧化物酶.将此基因在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS细胞中进行原核表达得到重组蛋白(APOD1),表达的蛋白分别以抗坏血酸、愈创木酚为底物进行过氧化反应,结果显示,APOD1催化愈创木酚的活力是抗坏血酸的1.8倍左右,由此表明,克隆的APOD1类属于植物经典过氧化物酶(第三大类过氧化物酶).经与其他植物过氧化物酶同源性比较分析,推测APOD1的氨基酸序列与白羽扇豆(Lupinus albus)、辣根菜(Armoracia rusticana)、小麦(Triticum aestivum)、烟草(Nicotiana tabacum)和蕃茄(Lycopersicon esculentum)的一致性分别为42.0%、36.2%、38.9%、33.6%和32.8%.Northern杂交分析表明,此基因在青蒿的根、茎和叶中均有表达.加入APOD1至青蒿细胞提取液有利于青蒿酸向青蒿素的生物转化,但APOD1并不能直接以青蒿酸作为氧化底物.
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15.
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反相胶束体系对辣根过氧化物酶结构与功能的影响 被引次数：7
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蒋太交 吉鑫松《Acta biochimica et biophysica Sinica》,1998年第30卷第2期
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在十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）／异辛烷－正戊醇反相胶束中，研究了含水量（Ｗ０）和表面活性剂对辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）和活力的影响机制。在测定不同含水量（Ｗ０）和ＣＴＡＢ不同浓度下的ＵＶ－Ｖｉｓ光谱（即Ｓｏｒｅｔ吸收光谱）及活力的变化的基础上，发现含水量不同时，反相胶束主要通过影响ＨＲＰ的活性中心而影响酶的活力，但ＣＴＡＢ对酶活性中心没有明显影响。此外通过反相胶束与水相中的ＨＲＰ与Ｈ２Ｏ２复合物
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16.
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“构象记忆”的辣根过氧化物酶的微水相共价固定化
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蔡奕璇 陈俊华 姚冬生 刘大岭《生物工程学报》,2009年第25卷第12期
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本研究利用酶在微水溶剂中的"构象记忆"特性,以壳聚糖微球为载体,以辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)为研究对象,将HRP于活性构象下冻干"固定"后,在二氧六环:水=99:1(V/V)微水介质中与载体进行共价交联,同时与传统水介质中共价交联固定化的HRP进行比较。结果发现,两种介质中固定化HRP的最适温度都提高到60°C,最适pH均为6.5,而微水相中固定的酶活力损失较低,酶活比传统水相中固定的酶高6倍以上;70°C保温30min后,微水相中固定的酶保留75.42%的活力,而水相中固定的HRP仅存15.4%的活力;微水相中固定的HRP具有更好的操作稳定性和热稳定性,60°C下连续操作5次之后,微水相固定的HRP保留77.69%的酶活,而水相固定的HRP仅存16.67%的酶活;微水相中固定的HRP在苯酚的去除中表现得更具优势;微水相中共价交联制备的CS-HRP-SWCNTs/Au酶修饰电极对H2O2的响应信号比水相中共价固定的酶电极强2.5倍,灵敏度更高。本研究表明利用酶的"构象记忆"在微水介质中进行共价交联是固定化酶的一种可行方法,所制备的固定化酶具有更优良的性质。
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17.
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利用高灵敏的TSA-FISH在玉米中定位bz1、bz2基因(英文) 被引次数：1
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李宗芸 宁顺斌 韩永华 刘立华 宋运淳《基因组蛋白质组与生物信息学报》,2002年第1期
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植物中 ,程序性细胞死亡 (PCD)发生在植物生殖和发育的许多方面 ,已有的研究表明 ,在玉米种子的发育过程中 ,胚乳组织经历了程序性细胞死亡的过程。bz1 (bronze)和bz2是与种子的糊粉层发育相关的花青素生物合成基因 ,在玉米基因组中 ,bz1基因所在区域是重组热点 ,bz2与类黄酮的酰化、糖基化、转运、沉积等有关 ,基因的物理定位有利于基因的分离和克隆。TSA FISH (Tyramidesignalamplificationfluorescenceinsituhybridization)是一种新颖的高灵敏度的荧光原位杂交技术 ,它的主要反应原理是辣根过氧化物酶催化过氧化氢和标记的酪胺分子 (tyramide)的苯环部分反应 ,使荧光标记的酪胺分子在直接带有或间接带有HRP报告分子的探针周围沉积 ,信号因此得以极大的放大 ,从而大大提高了荧光原位杂交技术的灵敏度 ,90年代中期开始引入动物和人类组织化学和细胞遗传学研究中 ,2 0 0 1年才应用于植物细胞遗传学的研究。利用这一技术 ,我们将bz1基因定位于玉米的第 9染色体的短臂和第 1染色体的长臂上 ,其信号点距着丝粒的百分距离分别为 40 .2 ,75 .4;bz2基因定位于玉米的第 1染色体的长臂和第 5染色体的短臂上 ,其信号点距着丝粒的百分距离分别为2 1 .6,1 5 .3。本文讨论了TSA FISH技术在植物中小的、低拷贝的DNA序
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18.
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辣根过氧化物酶产品的测定 被引次数：5
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季钟煜 陈佩颖《生命的化学》,1996年第16卷第1期
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辣根过氧化物酶产品的测定季钟煜，陈佩颖（上海普洛麦格生物产品有限公司，上海２００２３３）关键词辣根过氧化物酶（ＨＲＰ），邻苯三酚辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）是从辣根植物块根中提取制造的。它的实用价值很高，在临床检验上用作为酶指示剂和酶标记，藉以检验体液和...
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19.
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GA3对离体蒜苔细胞内含物再分配过程中H2O2代谢的作用
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赵林川 韩涓涓《发育与生殖生物学报》,2000年第9卷第2期
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离体蒜苔构成一个完整的细胞内含物再分配系统。25℃条件下，于黑暗中贮存时，苔茎基部细胞内含物转移到顶端珠蒜中，最后苔茎下部枯萎，顶端形成鲜嫩多汁的珠蒜。适当浓度GA3处理苔茎基部可以有效抑制上0述细胞内含物再分配过程。已有研究表明，H2O2由超氧化物歧化酶（SOD）催化产生，被过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）催化降解；H2O2对生物个体发育具有重要调节作用。本文主要测定GA3对离体蒜苔H2O2代谢的影响，为进一步探讨H2O2在细胞内含物再分配中的作用提供参考。取珠蒜未明显膨大的离体蒜苔为供试材料，采用50μg/mLGA3溶液处理蒜苔基部，用比色法和氧电极法测定珠蒜和苔茎下部H2O2水平和SOD、POD、CAT活性。结果表明：（1）在处理后48h内，珠蒜和苔茎下部H2O2代谢即产生明显差异（Fig.1-4)；（2）贮存20d后对照珠蒜明显膨大，而GA3不蒜无显著变化（Table1)；（3）GA3处理显著提高了珠蒜H2O2水平和SOD、POD、CAT活性，相反苔茎下部H2O2水平和POD、CAT活性受到显著抑制，而SOD活性提高(Fig.5-8)。GA3处理对珠蒜和苔茎下部H2O2代谢的相反作用可能是其调节细胞内含物再分配的作用机制。
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20.
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籽瓜多糖对H2O2致PC12细胞氧化损伤的保护作用
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刘琴 宋珅 郭杰 罗顺 张继《天然产物研究与开发》,2015年第2期
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本文研究了籽瓜多糖(SWP)对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤的影响及其机制。通过建立H2O2诱导PC12细胞氧化损伤模型,CCK-8法测定细胞存活率;硫辛酰胺脱氢酶催化的INT显色反应检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量,DCFH-DA检测细胞内ROS;ELISA法检测8-OHd G;JC-1染色检测细胞线粒体膜电位;利用caspase-3可以催化底物Ac-DEVD-p NA的反应检测caspase-3活性;应用caspase-9催化特异性底物Ac-LEHDp NA检测caspase-9活性。结果显示:过氧化氢组与对照组相比,终浓度为500μmol/L H2O2作用细胞24 h后,细胞活力显著下降(P<0.01);LDH释放量和细胞内ROS增加(P<0.01);8-OHd G含量上升(P<0.01);线粒体膜电位下降(P<0.01);caspase-3和caspase-9活性增强(P<0.01)。与H2O2损伤组相比,不同剂量的SWP预处理后,能显著改善H2O2引起的上述指标的变化(P<0.05)。由此得出:SWP对H2O2诱导的PC12细胞的氧化损伤具有一定的保护作用。
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