基于AFLP技术对中国虾夷扇贝群体种质资源的研究

利用AFLP技术对国内较具代表性的5个群体与日本群体虾夷扇贝相比照进行遗传多样性的分析.采用6对引物组合对6个群体178个个体进行扩增,共得到308个位点,6个群体的多态位点比例为62.66% ～69.81%,其中日本群体最高,小长山群体最低,且呈显著性差异;香农氏指数为0.337 ～0.374,其中日本群体最高,小长山群体最低.凌水桥群体与旅顺群体间遗传相似性最高(0.9810),小长山群体与凌水桥群体间遗传相似性最低(0.9641);相对的遗传距离的计算结果与遗传相似性结果一致.数据分析表明养殖方式对虾夷扇贝遗传多样性影响不大.本试验结果为我国虾夷扇贝种质遗传多样性维持、保护和可持续利用提供参考.     

虾夷扇贝的多态性微卫星座位

虾夷扇贝(Patinopectenyessoensis),为冷水性贝类,是世界最重要的养殖经济贝类之一。原产于俄罗斯千岛群岛的南部水域,日本北海道及本洲北部。中国80年代初从日本引种,并开始养殖,目前已经在黄海北部形成规模化和产业化养殖,其中以大连长海养殖规模最大,近10年来创造出了数十亿     

大鳞副泥鳅雄核发育单倍体胚胎发育的研究

雄核发育（ａｎｄｒｏｇｅｎｅｓｉｓ）系指卵子只依靠雄性原核进行发育的生殖方式。尽管已有川鲽（Ｐｌａｔｉｃｈｔｈｙｓｆｌｅｓｕｓ）（Ｐｕｒｄｏｍ,１９６９）、马苏大麻哈鱼（Ｏｎｃｏｈｙｃｈｕｓｍａｓｏｕ）（Ａｒａｉ等,１９７９）、虹鳟（Ｓａｌｍｏｇａ...     

大鳞副泥鳅雄核单倍体的早期发育

目前,有关鱼类雄核发育的研究已见于川鲽(Platichthys flesus)、马苏大麻哈鱼(Oncorhynchus masou)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、红点溪鳟(Salvelinus fontinalis)、鲤鱼(Cyprnus carpio)、尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)、泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)、斑马鱼(Danio rerio)等(Purdom,1969;Arai et al., 1979; Scheerer et al., 1991; May et al., 1988; Bongers et al., 1994;Grunina et al., 1990; Meyers, 1995; Masaoka et al., 1995; 赵振山等,1998;Corley-Smith et al., 1996).     

虾夷扇贝精子的超微结构

用扫描和透射电镜研究了虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)精子的超微结构.虾夷扇贝精子为典型的原生型,全长50μm左右,头部长约3 μm.精子主要由头部、中段和尾部三部分组成.头部顶体突出,呈倒\"V\"形;顶体下方为精核,电子密度较高且占头部大部分,具有核前窝(anterior nuclear fossa)、核后窝(posterior nuclear fossa)和植入窝(implantation fossa);4～5个近圆形的线粒体围绕着中心粒复合体形成精子的中段.尾部细长,尾部鞭毛横切面为典型的\"9 2\"结构.     

人工诱导泥鳅与大鳞副泥鳅雄核发育单倍体子代的RAPD分析

用３０个经过筛选的随机引物对３组泥鳅雄核发育单倍体、２组大鳞副尼鳅雄核发育单倍体及其相应亲本进行了ＲＡＰＤ分析。结果表明,雄核发育倍体子代与其父本的ＲＡＰＤ谱带相似率为９７．０％－９７．８％,与母本相似率为３０．３％－５９．５％,子代中的非亲本谱眩为０－０．０２９,极少母本特异谱带。这一结果说明雄性发育鱼类单倍体的遗传信息主要来自父本,且存在着个体差异,雄核发育子代存在ＤＮＡ变异和母本ＤＮＡ非特异带,但并非其必要条件。     

虾夷扇贝遗传连锁图谱的初步构建

用AFLP标记首次构建了虾夷扇贝遗传连锁图谱。用56对引物组合对父母本和52个F^₁代个体进行遗传连锁分析, 共得到1 855个标记, 其中多态位点为598(32.2%)个, 而354个符合孟德尔1: 1分离比。用这些标记和23个偏分离标记(0.01相似文献   

60Co-γ射线诱导鱼类雄核发育的研究

关于鱼类单倍体育种,近年来很多遗传工作者利用辐射处理的方法(6Co-r射线、X-射线、紫外线等)成功地获得了人工雌核发育鱼[2-9]。但直到目前为止,鱼类雄核发育的研究资料却非常罕见。本研究采用不同剂量的6Co-r射线处理几种鱼的成熟卵,再以正常精子诱发雄核发育,其结果予以报道。     

虾夷扇贝（Patinopecten yessoensis）5个群体的遗传多样性

虾夷扇贝为20世纪80年代初从日本引入我国并逐渐开展养殖的双壳贝类,目前已在我国北方地区大面积养殖。实验采用微卫星分子遗传标记技术对大连獐子岛底播增殖放流群体（CC）、黄海北部海区采集的野生群体（HQ）、日本青森养殖群体（JX）、俄罗斯远东日本海沿岸养殖群体（RX）及大连大长山岛养殖上壳白化群体（ZB）等5个虾夷扇贝群体的遗传多样性进行研究。其中HQ群体为本课题组2005年在黄海北部采集的野生群体,本研究筛选出一个该群体的特异性遗传标记。用8个微卫星位点进行扩增,共获得45个等位基因,每个位点的等位基因数处于3—9之间,大小为100—340bp,平均有效等位基因数为3．1535,基因型数为3—21个,PIC（PolymorphismInformationContent）值处于0．0322-0．5944之间。5个群体的平均观测杂合度分别为0．3292、0．3048、0．3167、0．2708、0．3042,平均期望杂合度分别为0．4595、0．4002、0．3838、0．3620、0．3885,群体间的多态性差异不显著。根据群体间遗传相似性系数、遗传距离及UPGMA聚类分析发现,CC和HQ群体亲缘关系最近,JX和RX群体的亲缘关系较近,ZB群体与JX和RX群体的亲缘关系较近。通过Hardy—Weinberg平衡及F-检验发现,5个群体都不同程度的偏离平衡,表明各群体基因频率和基因型频率的稳定性较低,且5个群体均处于不同程度的杂合子缺失状态,群体间的遗传分化程度较高,但遗传变异主要来自群体内的个体间。     

紫外线对甲型肝炎病毒灭活机理的研究

自1979年Provost体外培养甲型肝炎病毒（HAV）首获成功以来［1］,有关HAV对多种理化因子抗力的研究不少【’1,但对其具体作用机制,迄今尚未见诸报道。为此,本研究通过观察UV照射对HAVRNA链与衣壳蛋白完整性等的影响,探讨UV对HAV的灭活机理,为灭活HAV的实际应用提供理论基础。材料与方法1病毒与细胞受试毒株为HAVHM－175株,其培养细胞为非洲绿猴肾细胞MEK株,生长液为Engle”s液。生长与维持培养温度分别为37℃和35℃,2病毒灭活试验将纯化HAV悬液均匀涂布于细胞培养板孔内,室温干燥,置照射强度为300pw八mZ紫外灯下6…     

The inactivation of acetylcholinesterase by alpha-terthienyl and ultraviolet light Studies in vitro and in larvae of the mosquito Aedes aegypti

Acetylcholinesterase (EC 3.1.1.7) was inactivated photochemically in solution, in the presence of dissolved terthiophene sensitizers. Alpha-terthienyl (2,2′:5,2″-terthiophene) and its isomers 3,2′:5′,2″- and 3,2′:5′,3″-terthiophenes showed very similar sensitizing properties. With all three terthiophenes, the photosensitization was completely suppressed under anaerobic conditions, and therefore the inactivation process required the presence of oxygen. The enzyme was inactivated in vivo when fourth instar larvae of the mosquito Aedes aegypti were treated with alpha-terthienyl in the presence of long-wavelength ultraviolet light. No inactivation was observed when the organisms were treated with the ultraviolet light alone, with the chemical alone, or with a previously irradiated sample of the chemical. This paper represents the first example of acetylcholinesterase inactivation in vivo by a photoactive insecticide.     

虾夷扇贝过敏原tropomyosin的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

从虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)肌肉中提取总RNA,RT-PCR克隆虾夷扇贝中变应原原肌球蛋白的全长基因,根据序列设计带有酶切位点的特异性引物,扩增扇贝tropomyosin的完整开放阅读框,与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Escherichia.coli BL21(DE3),诱导表达后,Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,Western-blot检测其免疫学活性。经序列测定,该基因含有长度为855bp的开放阅读框,编码284个氨基酸,其在GenBank数据库中的登录号为EU839640。SDS-PAGE检测该重组变应原在大肠杆菌中高效表达36kD的目的蛋白,且重组变应原具有良好的IgE结合活性。研究获得了具有变应原活性的重组虾夷扇贝tropomyosin,为扇贝过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。     

腮腺炎病毒三种实验室常规灭活方法效果评价

探究几种实验室常规消毒灭活方法对腮腺炎病毒的灭活效果,为实验室进行腮腺炎病毒消毒工作提供基础数据。本研究采用热灭活、紫外线灭活和化学试剂灭活三种方法对腮腺炎病毒进行灭活处理,灭活处理后腮腺炎病毒采用细胞培养技术进行病毒滴定,评估上述灭活方法对腮腺炎病毒的灭活效果。热灭活方法显示,腮腺炎病毒对热敏感,随温度升高和热灭活时间增长对腮腺炎病毒灭活有明显加强作用。65℃30min、60min和70℃10min、30min、60min可有效灭活腮腺炎病毒;紫外线灭活方法显示,紫外线照射15min,30min,60min均可有效灭活涂抹在平皿表面的腮腺炎病毒,但对毒株液倾倒导致的MuV液体不能达到完全灭活效果;化学试剂灭活方法显示,三氯异氰泡腾片、1%过氧化氢、3%过氧化氢和75%乙醇根据试剂说明书处理后病毒均能有效灭活腮腺炎病毒。三种灭活方法在一定条件下均能实现对腮腺炎病毒的灭活,可以作为实验室常规灭活腮腺炎病毒方法。建议使用65℃30min或70℃10min对腮腺炎病毒进行有效灭活。紫外线适用于对腮腺炎病毒进行表面消毒,但对液滴状病毒污染建议使用化学试剂进行有效灭活。     

栉孔扇贝(♀)×虾夷扇贝( ♂ )受精细胞学观察

采用Bouin氏液固定、石蜡包埋、切片 ,用苏木精 伊红染色 ,在光学显微镜下观察栉孔扇贝 (♀ )与虾夷扇贝 (♂ )杂交的受精细胞学过程。尽管栉孔扇贝与虾夷扇贝同科不同属 ,但它们的杂交仍具有正常的受精细胞学程序。栉孔扇贝卵子处于第一次成熟分裂中期时接受虾夷扇贝的精子入卵 ,精卵混合后 6min精子入卵 ;8～ 1 0min精核略微膨胀 ;2 5～ 3 0min排出第一极体 ;1h左右 ,雌雄原核同时形成 ;1小时 3 0分钟左右 ,雌雄原核融合 ;2h左右开始卵裂。杂交过程中的精子入卵行为较本交迟缓 ,但杂交后代仍能正常发育     

微卫星标记在不同壳色虾夷扇贝家系亲权鉴定的适用性

实验选取8 个多态性微卫星位点, 用于虾夷扇贝4 个不同壳色全同胞和半同胞家系160 个子代的亲权鉴定。在亲本未知和一亲本已知的情况下, 8 个微卫星位点累积排除概率分别为0.823 和0.961。鉴于亲权分析时子代的亲本在已知和未知情况下位点的累积排除概率不同, 实验采用了两种方法用于家系的亲权鉴定。方法1: 当子代的父母本情况未知时, 根据子代基因型数据, 通过CERVUS 2.0 软件计算子代所对应的候选亲本的LOD 值, 直接将候选亲本中具有最大的两个LOD 值的亲本确定为子代的父母本; 方法2: 在子代的亲本未知情况下, 视具有最大LOD 值的候选亲本为子代的第一候选亲本, 然后将该亲本视为已知, 通过CERVUS 2.0 软件重新计算每个侯选亲本的LOD 值, 再从中选择具有最大LOD 值的候选亲本作为该子代的第二候选亲本。结果表明, 采用方法2 得到的家系亲权鉴定成功率达到95%以上, 确定了微卫星标记在虾夷扇贝家系鉴定中的可行性。所检测的微卫星位点在子代中出现无效等位基因现象, 而无效等位基因存在会引起子代与亲本的错配。实验在家系鉴定时采用了无效等位基因存在(情况1)和缺失(情况2)两种子代基因型文件进行分析, 不同情况下同一方法家系鉴定成功率相差无几。这表明了基于多个微卫星位点计算候选亲本LOD 值大小寻找子代真实父母本可以降低由无效等位基因引起的错配的几率。研究表明了微卫星标记适合于不同壳色虾夷扇贝家系亲权鉴定工作。     

细胞松弛素B诱导虾夷扇贝多倍体初探

Triploid shellfish are useful for aquaculture because of their sterility,superior growth and improved meat quality.Tetraploid are also valuable for 100% producing triploids through mating with diploid.We tested polyploid induction in Japanese scallop,Patinopecten yessoensis,by inhibiting polar body Ⅰ (PB group) and both polar bodyⅠandⅡ (PPB group) in newly fertilized eggs.Cytochalasin B (0.6 mg/L) was applied at 11～22 min post fertilization (PF),and terminated in PB group when polar body Ⅰ was released about 70% in untreated eggs,in PPB group when polar lobe was observed in control group.The treatment and its control were repeated 5～7 times using different pairs of parents.The ploidy was determined by counting chromosome number at embryo stage,and then was detected by flow cytometry (FCM) at larvae stage and juvenile stage.;In PB group,aneuploid (31.13%),triploid (3.96%),tetraploid (17.46%) and pentaploid (46.65%) embryos were produced,and in PPB groups,pentaploid embryos became higher (56.2%),triploid and tetraploid were 2.42% and 9.11%.At day 3 PF,the larvae showed tetraploid,pentaploid and aneuploid peaks through checking with FCM in PB group,and showed mainly higher pentaploidy peak in PPB groups.However,at day 14 PF diploids were mainly left,sometimes with small triploid peak.It suggested that most tetraploid,aneuploid and pentaploid larvae were died within the first two weeks PF.At three months PF,a few diploid juveniles were harvested in three control groups.Only 12 juvenile scallops were harvested in one of treated group (PB-7),and 11 of them died accidentally,the alive one in treated group was triploid through checking with FCM.