用抗性筛选法选育γ-亚麻酸(GLA)高产菌株

以深黄被孢霉 (Mortierellaisabellina)为出发菌株 ,经紫外线诱变处理 ,采用抗性筛选法 ,直接在梯度平板上挑取抗脂肪酸脱氢酶抑制物抑芽丹 (maleichydrazide)的菌株进行初筛 ,然后经摇瓶发酵法测定相关性能指标进行复筛 ,获得一株生产性能比出发菌株显著提高的突变株M₈₀ ,其菌体收率达 25.10 g/L、油脂产率达 12.35g/L、γ 亚麻酸 (GLA)产率达771.88mg/L。     

被孢霉γ-亚麻酸高产菌株选育

利用紫外线复合氯化锂诱变高山被孢霉SM96,筛选出一株高产γ-亚麻酸的菌株TM11,产量比出发菌株(25mg/L)提高了近3倍。对影响其多不饱和脂肪酸产生的因子Mg2+,VB6,营养盐溶液,磷源,碳源,氮源酵母膏进行了正交试验,选出TM11最佳的培养基配方:MgSO4·7H2O1.0g,VB6150mg/L,酵母膏6g/L,葡萄糖100g/L,营养盐溶液1mL/L,K2HPO42g/L。在上述最佳培养基中TM11的生物量达18.0213g/L,总脂达10.8128g/L,GLA量达668mg/L。     

紫外线诱变深黄被孢霉选育花生四烯酸高产菌株

为获得生长活力较强, 产花生四烯酸能力强的菌株, 以微生物油脂产量和花生四烯酸产量为评价指标, 采用2轮紫外线诱变的方法, 利用单因素试验确定紫外线照射时间, 并采用气相色谱分析花生四烯酸含量。试验结果表明: 紫外灯功率20 W, 照射距离30 cm, 照射时间80 s, 其致死率为76.4%。经过诱变及菌种筛选, 获得1株高产菌株Z80s2-109, 其总油脂含量为16 g/L, 花生四烯酸产量为2.34 g/L, 花生四烯酸产量比原始对照菌株提高377%, 并且遗传性能稳定。     

高产PUFAs深黄被孢霉菌株的筛选

以深黄被孢霉(Mortierella isabellina As3.3410)为出发菌株,经微波诱变和紫外诱变,乙酰水杨酸与低温(15℃)相结合的筛选方法,获得1株高产多不饱和脂肪酸菌株A35-4,其生物量为17.9 g/L,油脂含量为67.8%,油脂产量为12.12 g/L,PUFAs含量为20.3%,PUFAs产量为2.46 g/L,上述指标比原始菌株A0分别增加32.6%、49.8%、98.69%、14.0%和125.7%。连续斜面传代培养证实该菌株具有较好的遗传稳定性。本研究为直接利用该菌株生产PUFAs以及克隆高效PUFAs相关基因,创造高含PUFAs转基因植物材料奠定基础。     

花生四烯酸高产菌株的选育

本研究以一株能产生花生四烯酸的被孢霉菌为出发菌株,通过紫外线诱变筛选出一株高产花生四烯酸的突变株Ｍ１０,发酵试验结果表明：突变株Ｍ１０的每升培养液中干菌体得率为３１ｇ,油脂含量为８．３ｇ,而原菌株仅为２０．３ｇ和５．４ｇ,气相色谱分析结果Ｍ１０所产花生四烯酸的量占总脂的１０．０６％（０．８３ｇ／Ｌ培养液）。同时对Ｍ１０菌株的生长和发酵特性及发酵过程中菌丝体形态变化作了一定的探讨。     

深黄被孢霉高产花生四烯酸菌株的紫外诱变原生质体育种

【目的】为了获得一株生长活力较强, 产花生四烯酸能力强的菌株。【方法】我们以干菌重、微生物油脂产量和花生四烯酸产量为评价指标,采用紫外线诱变原生质体的方法。我们利用单因素实验确定了紫外线诱变剂量, 并采用气相色谱分析了花生四烯酸含量。【结果】试验结果表明：紫外灯功率20 W,照射距离30 cm,照射时间40 s,其致死率为79.5 %。【结论】经过诱变及菌种筛选所获得高产菌株YZ-124的生物量为36.5 g/L,微生物油脂含量为19.2 g/L,花生四烯酸含量为4.72 g/L,花生四烯酸产量比出发菌株AS3.3410提高576 ％,并且遗传性能稳定。     

γ-亚麻酸产生菌的原生质体诱变育种

为了提高深黄被抱霉产生γ－亚麻酸的量,对原生质体进行了紫外线诱变,实验表明采用紫外线（UV）照射45s,可获得高产突变株,突变株MH₂₃、MH₁₈和MX₂₆分别比对照株M_6－22的γ－亚麻酸产量提高了70．7％、54．1％和53．6％．表明用原生质体进行诱变处理是较好的方法．     

γ-亚麻酸高产菌株的选育及发酵产物的分离提取

以深黄被孢霉AS3.3410为出发菌株发醇产生γ-亚麻酸,其菌体得率为10%,油脂含量为27%,γ-亚麻酸含量为3.3%。经过紫外线诱变处理。得到变异株M_6,其菌体得率为25%,油脂含量为32.8%,γ-亚麻酸含量为8.84%。传代实验表明,M_6具有良好的遗传稳定性。经摇瓶发酵条件试验,选出了最佳培养基配方,以10升罐进行发酵,结果为:菌体得率29.3%,油脂含量44.7%,γ-亚麻酸含量9.44%。菌体油脂提取方法的研究表明,以乙醇和正己烷对湿菌体进行分步抽提效果较好。     

抗性突变株筛选法选育碱性脂肪酶高产菌

以扩展青霉（Penicillum expansum)P1336为出发菌株,研究研究琥珀酸和制霉菌素对菌株生长的影响。经过多代诱,获得一突变株W－2580,其中酶水平比出发株P1336菌株提高34．7％,该菌菌丝体表角固醇下降了12．2％。     

拉曼被孢霉F5发酵生产γ—亚麻酸的实验研究

对拉曼被孢霉突变株F5发酵生产γ-亚麻酸的最适碳源,氮源,发酵时间及湿度,无机盐离子的添加,最适碳源浓度及补加碳源时间等发酵条件进行了研究探讨,最适发酵培养基组成为（g/L)：葡萄糖100,酵母浸出粉4,蛋白胨1,K2HPO41,CaCl2 1*10^-2,MgSO4 5*10^-2,FeSO4 1*10^-2,ZnSO4 7.5*10^-3,CuSO40.5*10^-3,MnSO4 2*10^-3,pH6.0,培养湿度为25度,140rpm 振荡培养10天,培养8天后（即收获前2天）补加5％葡萄糖,发酵结果为：DC24．59 g/L,TL10.84g/L,TL/DC 44.09%,GLA/TL10.67%,GLA产量为1156．63mg/L,GLA产量较初始结果提高156．15％,该菌株已达到工业化生产菌株要求。     

不产生胞外多糖的假单胞菌突变菌株E_（16）

在适宜培养条件下,Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ３１２６０能将木糖转化为酸性胞外多糖（ＥＰＳ）,用甲基磺酸乙醋（ＥＭＳ）诱变处理　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ３１２６０得到一株完全不产生胞外多糖的突变菌株Ｅ＿（１６）。     

核黄素产生菌阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)抗反馈抑制突变株的选育

在调查阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)营养要求的基础上,设计了适合该菌生长的合成培养基,在合成培养基上诱变筛选得到了数株抗嘌呤拮抗物8-AG的突变株。选择其中三株U_(95-1)、U_(95-2)和U_(95-3)进行传代和摇瓶发酵试验,U_(95-3)的核黄素发酵单位低于出发菌,未经传代的U_(95-1)、U_(95-2)比出发菌株的发酵水平分别提高15.5％和9.8％,经5～10代传接,其产核黄素的遗传性状稳定。该研究表明,从代谢控制角度通过减轻核黄素合成途径中重要调节酶的反馈抑制对提高E. ashbyii的核黄素产量和稳定性是可行的,为该菌的菌种改良提供了一条遗传育种途径。     

一种新型矮牵牛花发育突变体的研究

报道了新发现的一种矮牵牛(Petunia hybrida L.)花发育突变体,命名为efficient(eff),并对这一突变体进行了形态学和遗传学分析。eff突变体主要表现为雌蕊心皮数目的增加和雄蕊上长出花瓣状结构,同时,雄蕊、花瓣和萼片数亦有增多,但营养器官无变化。心皮数目的增加导致雌蕊柱头和子房体积的显著增大,并形成较大的果实。雄蕊上花瓣的形成对花粉的产生无明显影响。扫描电镜观察发现,eff突变体在花器官原基形成时发生了相应数目的增加及特征的变化。遗传学分析表明,突变的表现型符合孟德尔单基因遗传规律。     

以抗结构类似物筛选高产L—赖氨酸酵母突变株

以啤酒酵母（Saccharomycescerevisiae)I菌株为出发菌株,经紫外线处理后,在含2.0mg/L的5-（2-氨基乙基）－L一半胱氨酸（AEC）的平板上获得18株生长良好的抗性突变林,编号为I－1～18,其中Ⅰ-Ⅱ株抗AEC达10～15mg／L,是出发株抗性最高浓度的10倍左右,并且Ⅰ—11株的L-赖氨酸含量（重量与重量比,100％）较出发株提高3.89％。以Ⅰ－11株作亚硝酸诱变处理,在含30～120mg／LAEC的培养基上又获得18株抗性突变株,其中Ⅰ11－L和Ⅰ11－MAEC的耐受浓度可达1300mg/L,其赖氨酸的含量较Ⅰ菌株的提高了27．42％和40．28％。     

球孢白僵菌高壳聚酶突变株的筛选

以球孢白僵菌（Beauveria bassiana)1316为出发菌株,通过紫外线和高能电子束分别诱变分生孢子,采用平板透明圆法初筛和摇瓶培养复筛的方法,经3轮诱变,筛选到5株高产突变株。其中一株最高产的定名为Beauveria bassiana 1316-V1,其壳聚糖酶活力是原始菌株的16倍;而且经传代培养,其高产特性能够稳定遗传。     

紫外线诱变选育碱性蛋白酶高产菌株

本实验以枯草杆菌A4－3为出发菌株,发酵产生碱性蛋白酶,其野生型菌株产酶为2412u／ml。采用孢子热处理方法处理出发菌株孢子,得到变异株As—4,产酶2732．8u／ml。对As—4菌株进行紫外线绣变处理1min,得变异菌株AX—46,产酶为3213．8u／ml,且产酶能力稳定。     

蛋氨酸高产酵母突变株的推理筛选

以啤酒酵母（Saccharomycescerevisiae）菌株Ⅰ为出发株,经紫外线处理后,在含可完全抑制出发株生长的乙硫氨酸（浓度为2g/L）的基本培养从上筛出14株生长良好的突变株,其中I－2,I－9株还能在无硫基本培养基上良好生长。经氨基酸自动分析仪检测,I－2株菌体蛋白中的蛋氨酸含量（质量由分比）由I株的1．93增年9．28。     

暹罗鱼腥藻空间飞行突变株的光合特性分析

对经空间飞行搭载而获得的暹罗鱼腥藻突变株的分析发现,与对照相比,它在生长率和光合效率方面明显较高。进一步分析其光合色素的组成,叶绿素荧光及PSII/PSI比值,发现突变株的PC/Chl比值明显低于对照藻株,而叶绿素荧光高于对照,PSII/PSI比值是对照藻株的1.7倍,在其它光合色素的比例上也有差异。分析这些结果表明,突变株与对照株在光合特征上有差异可能是突变株在色素系统的改变引起光能捕捉和光能利用上更为高效的原因。