脱细胞小肠黏膜下层与脱细胞心包修复大鼠腹壁缺损的对比研究

目的：观察小肠黏膜下层（small intestinal submucosa,SIS）和脱细胞心包（pericardium,PC）修复大鼠腹壁缺损的效果,比较两种生物材料相容性。方法：SD大鼠40只,体重200～250g,手术造成3 cm×2 cm全层腹壁缺损,随机分为二组（n=20）,分别采用相同面积的小肠黏膜下层（small intestinal submucosa,SIS）和脱细胞真皮基质（acellular dermal matr,ADM）补片进行修补。术后1、2、4和8周分批取出腹壁修复材料,行动物一般情况观察、腹腔内粘连情况评价、力学强度测定及组织学观察。结果：术后动物都成活,两种材料术后8周均无疝瘘发生,缺损得到完整修复。术后各期SIS组的腹腔粘连评分明显低于PC组。术后4、8周,SIS组力学强度强于PC组,有统计学意义;组织学观察两组未见明显免疫排斥反应,SIS组的组织再生和重塑、血管化优于PC组;术后炎症反应两组无明显差异。结论：SIS和PC均能修复大鼠腹壁全层缺损,SIS在生物相容性方面优于PC。     

三种方法制备的猪小肠黏膜下层支架的生物相容性和免疫原性的对比研究

目的:采用三种不同的脱细胞方法制备小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)支架,研究其生物相容性、免疫原性以及构建真皮替代物等方面,为组织工程化皮肤的细胞载体支架提供优选方案。方法:将新鲜猪小肠分别采用单纯机械法、机械-化学法、机械-酶消化法制备三种不同的SIS,分别作为A、B、C组;通过复合成纤维细胞构建真皮替代物,利用HE染色观察支架组织学形态以及细胞粘附情况、MTT法检测细胞增殖情况,同时观察支架移植SD大鼠皮下1、2、4周后炎症反应及血管化程度。结果:组织学观察A组有细胞残留,B、C组未见细胞残留。MTT结果显示细胞在支架上生长旺盛增殖能力强,其中A组优于B、C组;皮下移植后的HE结果表明B组引起炎症反应较A、C组弱,而C组血管化程度较A、B组更明显。结论:机械-化学法以及机械-酶消化法制备的SIS具有良好的生物相容性以及免疫原性,可作为构建组织工程化皮肤细胞载体的选择。     

三种猪源性细胞外基质体内降解规律的实验研究

目的:研究本实验以小鼠腹壁缺损为模型,通过对三种猪源性细胞外基质(ECM)—猪脱细胞小肠粘膜下层(P-SIS)、猪脱细胞心包(P-PC)以及猪脱细胞真皮(P-ADM),进行体内弹性纤维和葡糖氨基聚糖类(GAGs)的含量测定,然后通过三组材料中弹性纤维和GAGs在术后第4周、第8周时再生或降解的数量,来对比研究三种生物材料植入体内后的降解规律,从而为寻找性能优良的生物补片提供理论依据,为生物补片的临床应用以及避免术后并发症方面提供指导方向。方法:BALB/c小鼠60只,体重18~20 g,手术造成1 cm×1 cm的腹壁全层缺损,随机分为3组(n=20),分别以等面积的P-ADM、P-PC以及P-SIS进行修复,于术后4周、8周进行取材评估。结果:术后P-SIS组的腹腔内粘连评分均低于同时期内的其余两组。术后4、8周比较:P-ADM组,GAGs含量减少(P0.01);P-PC组,弹性纤维(P0.01)、GAGs(P0.05)含量均有所增加;P-SIS组,弹性纤维(P0.001)、GAGs(P0.05)含量均增加。结论:P-SIS材料中,弹性纤维和GAGs的再生状况优于其他两组,且P-SIS材料不易引起腹腔内粘连,故P-SIS能够更好的应用于组织缺损的治疗,P-SIS在组织工程学领域相对而言是更加理想的修复材料。     

脱细胞羊膜与小肠黏膜下层促进大鼠皮肤缺损修复和血管形成

目的观察脱细胞羊膜(HAM)与小肠黏膜下层(SIS)促进大鼠皮肤缺损修复和血管形成的作用。方法SD大鼠24只,在两侧背部各做1个直径为1.8cm圆形全层皮肤缺损。创面随机分为A组、B组和C组。A组HAM覆盖,B组SIS覆盖,C组纱布覆盖。在2周时处死动物取材,HE染色观察皮肤缺损修复情况。免疫组织化学染色检测K19和VEGF,RT-PCR检测VEGF mRNA的表达。结果A组、B组愈合较好。C组愈合较差。免疫组织化学染色显示,A、B组K19、VEGF阳性细胞显著多于C组,其中A组最多;RT-PCR结果显示,A、B组比C组表达更多的VEGF mRNA其中A组最多,差异显著,有统计学意义(P<0.05)。结论HAM和SIS均能增加皮肤创面组织中K19阳性细胞数,上调VEGF mRNA的表达、增加VEGF的分泌,其中HAM具有更强的促进皮肤缺损修复和血管形成作用。     

小肠黏膜下层与内皮细胞复合构建组织工程血管

目的 探讨以小肠黏膜下层为材料制作组织工程血管支架的可行性,并对其复合内皮细胞进行研究,从而为制备组织工程血管提供初步准备。方法 以猪空肠为原材料,利用机械方法制备小肠黏膜下层,去除抗原性后对小肠黏膜下层进行免疫荧光染色,以观察其所含层粘连蛋白和纤维连接蛋白。以猪大隐静脉为原料分离培养并扩增大隐静脉内皮细胞。小肠黏膜下层与内皮细胞复合培养,并通过Hoechst33258染色、FDA/PI染色观察内皮细胞黏附和生长情况,从而评估小肠黏膜下层与内皮细胞的生物相容性。结果 小肠黏膜下层含有较多层粘连蛋白和纤维连接蛋白,内皮细胞成功接种于小肠黏膜下层,并且存活数量较多,生长状态良好。结论 小肠黏膜下层具有较好的生物相容性,可促进内皮细胞的黏附与生长,具有构建组织工程血管的能力,可行性较高。     

丹参注射液对同种异体肌腱移植后粘连防治的实验研究

目的:探讨局部应用丹参注射液(Salvia Miltiorrhiza,SM)对异体肌腱移植后粘连的影响.方法:使用深低温冷冻处理的同种异体肌腱修复缺损的大鼠屈趾肌腱,72只大鼠随机分为2组,A组为试验组,腱周局部注射丹参注射液,B组为对照组,注射生理盐水(Saline).术后2、4、8周处死动物,标本进行大体观察、组织学观察及生物力学测定.结果:A组粘连范围小,粘连等级评分与B组相比有统计学意义,力学测定结果显示A组与B组无统计学意义.结论:丹参注射液能有效减轻肌腱移植后粘连.     

仿生技术构建小口径人造血管

目的：研究以改性猪小肠粘膜下层组织(SIS)为支架,利用仿生技术构建小口径人造血管的可行性。方法：自犬隐动脉分离出血管内皮细胞和平滑肌细胞,与胶原蛋白凝胶均匀混合,分别种植于改性SIS膜表面,制成3 mm 仿生三层人造血管为实验组;制成单层人造血管为对照组,分别植入修复15例犬双侧股动脉缺损,术后进行彩超、组织学检测和电镜检测鉴定。结果：植入12周,14个仿生人造血管保持通畅,通畅率93.3%,有血管样生物结构形成,管腔内壁有完整的内皮覆盖,管壁中层见大量平滑肌细胞;对照组通畅率60%,有少许内皮细胞覆盖。结论：仿生小口径人造血管具有良好的血液相容性,并能在体内保持良好通畅性, 修复动脉缺损效果满意。     

不同术式的剖宫产术对再次剖宫产产妇腹腔粘连、盆腔粘连及妊娠结局的影响

目的:探讨不同术式的剖宫产术对再次剖宫产产妇腹腔粘连、盆腔粘连及妊娠结局的影响。方法:选取我院于2007年7月-2017年10月间收治的需再次行剖宫产产妇168例为研究对象。根据首次剖宫产术式分为对照组(新式腹壁横切式)92例和观察组(传统腹壁纵切式)76例。观察并比较两组产妇临床指标,盆腔粘连、腹腔粘连严重程度以及妊娠结局情况。结果:观察组产妇手术时间、胎儿娩出时间、术中出血量、住院时间、肛门排气时间均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组产妇腹腔粘连发生率为46.05%(35/76),显著低于对照组的77.17%(71/92),差异有统计学意义(P0.05)。观察组产妇盆腔粘连发生率为34.21%(26/76),低于对照组的54.35%(50/92),差异有统计学意义(P0.05)。两组产妇产后出血、术后切口感染、新生儿窒息等发生率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:首次剖宫产术式的选择对再次剖宫产产妇具有较大影响,传统腹壁纵切式可显著改善产妇临床指标情况,减少盆腔粘连、腹腔粘连发生的概率,且术后并发症较少,值得临床推广应用。     

环孢素A对异种脱细胞神经移植的影响

目的研究脱细胞异种面神经移植中环孢素A（cyclosporin A,CSA）的作用效果。方法 48只Wistar大鼠随机选择一侧作为实验侧,解剖面神经后于颊支制造1cm的神经缺损。按神经移植的种类分为4组,A组：异种面神经移植组;B组：异种面神经移植应用CSA免疫抑制组;C组：异种脱细胞神经移植组;D组：异种脱细胞神经移植应用CSA免疫抑制组。各组实验动物分别于术后5周,12周进行电生理学测试（潜伏期、运动神经传导速度）,并进行光镜、电镜观察形态学变化。结果术后5周和12周时,C,D组动物在电生理指标及光镜、电镜指标上均优于A,B组,术后5周和12周,D组面神经颊支传导速度均高于其它各组。结论 1.0 cm缺损的异种脱细胞面神经移植动物实验中,应用CSA5mg/（kg.d）5周可以降低排斥反应,提高神经再生能力。     

骨髓间充质干细胞在脱细胞真皮基质再生过程中的初步研究

较大的腹壁缺损需要应用补片修复来缓解腹横筋膜的张力,人工合成补片的应用一定程度上实现了无张力修补的目的,但它在腹壁外科应用中有诸多的并发症,诸如复发率高,腹腔黏连,肠穿孔导致腹膜炎,侵袭性肠瘘等影响患者术后的正常生活,而脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)作为一种新型的生物材料应用在腹壁外科中能解决上述人工合成补片所带来的并发症发挥强大作用且能与周围组织较好的融合,最后改建成宿主自身组织已并在多学科领域中广泛应用;骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)能参与组织自我修复,并能分化成为多种功能细胞,分泌各种生长因子,在ADM内源性转归过程中可发挥作用。本文就对骨髓间充质干细胞在ADM生物补片应用于临床疝修补术中转归机制的研究做一综述。     

Acellular pertussis vaccine

Protective, immunogenic, toxic, and sensitizing properties of acellular pertussis vaccine (aPV) developed according to original technology were studied, aPV had marked protective activity which lasted more than 2 years. Sera of mice immunized by aPV also possess protective properties, and they were more prominent than in sera of mice immunized by pertussis bacteria suspension (PS). Immune sera to aPV neutralized cytopathogenic effect of pertussis toxin (PT) on ovarian Chinese hamster cells in 1:250 dilution, whereas neutralizing activity of sera to PS was very low. Level of antibodies to PT was higher in rabbits immunized, according to schedules and dosage recommended for children, by aPV than by PS. High immunogenicity of aPV was proved also by levels of IgG to PT in sera of mice immunized three times by aPV in human dosage. During experiments on mice and guinea pigs aPV had mild toxicity, did not induce autoimmune process, did not have anaphylactogenic properties compared with bacterial suspension characterized by high anaphylactogenic activity. Histamine-sensitizing abilityof aPVwas 40 times lower than that of PS. Assessment of pyrogenic properties of aPV and PS performed on rabbits showed that aPV was 1,000 times less pyrogenic than PS. Obtained results demonstrate high protective and immunogenic properties of domestic acellular pertussis vaccine and its low toxic and sensitizing characteristics.     

Acellular bodies in sputum

From 70 patients 68.3 +/- 10.1 years of age, 260 sputum specimens containing various acellular bodies were evaluated. This corresponded to 1% of all sputum specimens examined. The round to oval bodies were mostly concentrically structured and displayed different, partly amorphous, partly crystalline components. The periodic acid-Schiff stain was usually positive in these smears, 52% of which contained birefringent bodies. The average diameter was 25 +/- 10.9 micron. While intersample and intrasample frequencies of such bodies were extremely variable, a correlation with an increased number of Curschmann spirals and the degree of inflammation was observed (P less than 0.02). There was a correlation with neither sex, smoking habits nor most types of cancer. A positive correlation existed with chronic obstructive bronchitis, cor pulmonale, obstructive pulmonary diseases and one case of adenocarcinoma of the lung. This finding was confirmed by eight of ten new cases. The formation of the bodies can be intraalveolar, comparable to microliths, in the bronchial glands, corresponding to sialiths, and by intrabronchial mucus condensation, eventually around structures serving as cores. Changing frequencies in repeat investigations demonstrated a presumably rapid formation.     

下颌下腺脱细胞基质材料的生物相容性及毒理学研究

为探讨下颌下腺脱细胞基质支架材料的生物相容性,应用3%TritonX-100对SD大鼠的下颌下腺组织进行脱细胞处理,制备脱细胞基质支架材料,将该材料的浸提液注入小鼠体内进行全身急性毒性试验,观察小鼠全身反应.将该材料植入Wistar鼠肌内进行体内植入试验,不同时间观察支架材料与组织反应.用传代培养的第2代下颌下腺细胞与支架材料体外复合培养,第7 d时进行MTT检测,观察支架材料对细胞增殖的影响.全身急性毒性试验结果显示,实验组与对照组无显著性差别(P＞0.05),体内植入试验2、4、8 W时光镜下表现与对照组基本相似,MTT检测结果,细胞相对增长率为91.66%,支架材料的毒性为0级.结果可见,经3%TritonX-100脱细胞处理后所制备的下颌下腺生物衍生支架材料具有良好的生物相容性,对机体无毒害作用.     

Acellular dental matrices promote functional differentiation of ameloblasts

EDTA treatment of post-natal mouse molars made possible the isolation of cell-free dental matrices composed of basal lamina, predentin, dentin and enamel. Trypsin-isolated dental papillae and enamel organs from embryonic-mouse mandibular molars were combined with isolated matrices and cultured in vitro. In such recombinations, functional odontoblasts were never observed. On the other hand, competent preameloblasts in contact with the epithelial side of occlusal predentin overtly differentiated. Matrices treated with guanidine-EDTA or acetic acid were unable to promote the functional differentiation of ameloblasts. These data are discussed in terms of the epitheliomesenchymal interactions involved in odontogenesis.     

脱细胞生物材料样品的细胞毒控制技术研究

细胞毒控制是脱细胞生物材料制备过程中的关键工艺,该工艺不稳定是造成脱细胞材料细胞毒性高、生物相容性差的重要原因之一。脱细胞后,采用酒精振荡清洗的方法优化制备工艺,可有效降低脱细胞样品的残余细胞毒性,提高细胞毒等级。试验结果证明, 30%的酒精振荡清洗至少12 h以上可以将脱细胞样品的细胞毒稳定在Ⅰ级水平。这对于降低脱细胞生物材料制备过程的废品率,提高脱细胞生物材料样品的生物相容性和临床应用安全性具有积极意义。