血清抑癌多肽某些生物学特性的研究

血清抑癌多肽(SCSP)在体外可以杀伤小鼠不同种类的腹水型癌细胞,如肝癌细胞、S180细胞、白血病细胞等。但它对小鼠的非癌细胞没有明显影响,对不同种类的人癌细胞株没有普遍的杀伤作用。 用反向间接血凝法检验结果表明,血清抑癌多肽可能由宿主脾细胞产生,而非来自癌细胞。 用超速离心法分离小鼠血清脂蛋白VLDL和HDL,并检测脂蛋白中SCSP含量与其对癌细胞杀伤作用的关系,相关性检验结果表明它们之间有相关关系。SCSP的含量高,则对癌细胞的杀伤作用强。     

激活T细胞的培养上清液对肝癌细胞毒性作用的电镜观察

外周血液E-玫瑰花环阳性的淋巴细胞由PHA-P刺激而产生无白细胞介素-1(Interleukin-1)的培养上清液,在体外对大鼠肝癌细胞的杀伤效应敏感,通过光学显微镜观察,激活T细胞培养上清液引起肝癌细胞胞浆的收缩、分离。电子显微镜观察这些细胞显示出溶酶体残留的致密小体形成和线粒体肿胀,细胞浆内以及贴邻的细胞膜之间出现大量空泡。这种现象提示了激活T细胞培养上清液有侵袭肝癌细胞的特性,导致细胞溶解。     

家蚕抗菌肽对癌细胞的杀伤作用及其超微结构的观察

从家蚕蛹血淋巴中分离纯化的抗菌肽β组分对体外培养的癌细胞有选择性杀伤作用,而对正常人Ｂ淋巴细胞无不良影响。抗菌肽与巨噬细胞淋巴瘤细胞Ｕ９３７体外培养一段时间后,用扫描和透射电镜观察细胞膜和细胞器的变化,发现细胞膜和核被膜局部溶解,线粒体肿胀、发空,胞内物质大量外泄,从而导致细胞死亡。     

携带hIFN-γ的增殖型腺病毒治疗胃癌的体外实验研究

目的：研究增殖型腺病毒CNHK300-hIFN-γ在胃癌细胞中的增殖、杀伤能力与表达hIFN-γ蛋白的能力。方法：病毒增殖实验比较CNHK300-hIFN-γ与CNHK300在胃癌细胞SGC-7901与成纤维细胞BJ中的增殖能力;ELISA法比较CNHK300-hIFN-γ和复制缺陷型腺病毒Ad-hIFN-γ在细胞中hIFN-γ蛋白的表达量;细胞活力MTT检测法与CPE实验观察CNHK300-hIFN-γ对胃癌细胞与正常细胞的杀伤效应。结果：增殖实验结果表明CNHK300-hIFN-γ能选择性地在端粒酶阳性的胃癌细胞中大量增殖;ELISA实验结果表明CNHK300-hIFN-γ在胃癌细胞中hIFN-γ的表达量可至117.26±15.92ng/ml;MTT与CPE实验表明CNHK300-hIFN-γ对胃癌细胞有显著的杀伤性,对正常细胞无明显杀伤。结论：增殖型腺病毒CNHK300-hIFN-γ感染胃癌细胞后增殖活跃并能大量表达目的基因hIFN-γ,对胃癌细胞有明显杀伤作用但对正常细胞无明显杀伤,为胃癌的病毒基因治疗进一步提供了理论依据。     

人细胞毒性T淋巴细胞TALL-104抗癌细胞活性的检测

检测人细胞毒性T淋巴细胞TALL-104对癌细胞的杀伤活性以及此杀伤活性对白细胞介素-2的依赖性,动态观察其体外增殖能力.用台盼兰拒染法计算细胞扩增倍数;用MTT法检测细胞毒杀伤活性,实时观察细胞的杀伤过程.结果表明, 在200 IU/ml IL-2刺激下,TALL-104细胞增殖能力较强;在效靶比5∶ 1,作用时间为24 h,TALL-104细胞表现出对癌细胞MCF-7和A-431较高的杀伤率分别为50.4%和69.5%;当作用时间在72 h以内,效靶比不高于10∶ 1时,杀伤率随作用时间和效靶比的增加而明显升高(P<0.05);最大杀伤率分别为79.8%(MCF-7细胞)和90.4%(A431细胞).因此,TALL-104细胞体外增殖能力较强,其细胞毒活性不严格依赖于IL-2的存在.     

Notch1在胆管癌细胞光动力疗法中的作用研究

目的:1、研究Photosan介导光动力疗法(Photodynamic Therapy,PDT)对胆管癌细胞的杀伤作用。2、探讨Notch1在胆管癌发生中的表达情况以及Notch1在PDT治疗胆管癌细胞中的作用。方法:1、体外培养人胆管癌QBC939细胞株,在细胞对数生长期用不同浓度Photosan处理,并用半导体激光治疗仪不同强度光照后,采用MTT法检测PDT对QBC939细胞的杀伤作用。观察不同的光敏剂孵育时间、光敏剂浓度及光照剂量对PDT效果的影响。2、采用免疫细胞化学方法和蛋白印迹法检测胆管癌细胞Notch1表达,经Photosan介导光动力作用胆管癌细胞后,检测胆管癌细胞内Notch1表达变化。结果:1、MTT结果显示Photosan介导的PDT对胆管癌细胞有杀伤作用(P0.05),而且这种杀伤作用在一定范围内随着光敏剂浓度增加、光敏剂孵育时间、光照剂量呈正相关。2、免疫细胞学检查发现Notch1在胆管癌细胞中高表达,其表达主要位于细胞膜及胞浆,并且经PDT处理后Notch1表达量较前减少(P0.05)。结论:Notch1与胆管癌细胞生长、增殖密切相关,且Notch1在PDT对胆管癌细胞产生的抑制、促凋亡和杀伤作用中有重要作用。     

声化学激活血卟啉诱导艾氏腹水肿瘤细胞凋亡

本实验采用频率为2．0MHz，声强分别为1．0w／cm^2、1．5w／cm^2、2．0w／cm^2等不同参数，研究超声激活血卟啉对艾氏腹水肿瘤细胞的杀伤作用和诱导肿瘤细胞凋亡现象。通过扫描电镜、透射电镜以及荧光显微镜观察受损后细胞形态结构的变化，主要表现为细胞微绒毛的减少，胞膜结构和通透性的改变，细胞器的受损以及核物质的分解、丢失；同时发现处理后的肿瘤细胞有核物质凝集、趋边排列以及凋亡小体的形成等细胞凋亡特征。研究中首次发现声化学激活血卟啉在对艾氏腹水肿瘤细胞杀伤的同时，也能诱导艾氏腹水肿瘤细胞发生凋亡，提示在声动力疗法中并存着对癌细胞的直接杀伤和通过诱导癌细胞凋亡的两种抗癌途径。     

抗菌肽CM4抗K562癌细胞的超微结构研究

报道了家蚕抗菌肽CM4抗K562癌细胞的体外实验研究.结果表明：纯化后的家蚕抗菌肽CM4对培养的K562(人髓样白血病细胞)有很强的杀伤作用.用扫描和透射电镜观察超微结构以及用激光共聚集显微断层图像分析,表明微量纯化的抗菌肽CM4能使K562癌细胞产生一系列的病理变化,可造成细胞高度肿胀,膜与胞质分离,细胞器和膜结构排列紊乱,细胞表面微绒毛消失,出现不规则的孔洞,细胞骨架严重破坏,膜局部结构破裂,缺损,胞浆内容物大量外泄,最终细胞解体,崩解成碎片.     

高强度聚焦超声对人膀胱癌细胞的生长抑制作用及机理研究

研究高强度聚焦超声（high intensity focused ultrasound,HIFU）对人膀胱癌细胞的杀伤作用,并探索其作用机理.用不同强度的HIFU处理人膀胱癌细胞T24,用台盼蓝排斥法染色、细胞增殖试验（MTT法）研究HIFU对癌细胞的杀伤和生长抑制作用;流式细胞术检测其对癌细胞周期、凋亡及相关基因表达的影响.HIFU处理后,癌细胞死亡率升高,增殖活性降低,G0/G1期细胞数增加,S期细胞数减少,凋亡指数升高,与对照组比较,差异有显著性意义（P＜0.05）;P53、BCL-2和FAS表达阳性细胞数与对照组比较,无显著性意义（P＞0.05）;HIFU强度为600 W/cm^2时,HSP70表达阳性细胞数升高,与对照组比较差异有显著性意义（P＜0.05）.HIFU对人膀胱癌细胞T24具有明显的杀伤及抑制作用,其机理与抑制DNA合成有关;HIFU具有诱导癌细胞凋亡的作用,其诱导凋亡作用可能与P53、BCL-2和FAS无关.     

共培养的树突状细胞与CIK细胞的体外增殖和杀瘤活性研究

本文观察树突状细胞与同源CIK细胞共培养后培养物的表型、增殖活性变化,及DC对CIK细胞细胞毒活性的影响。提取健康供血者的PBMC,常规诱导出DC与CIK细胞,用A549肺腺癌细胞裂解液抗原冲击DC,并和CIK细胞共培养,动态观察DC-CIK培养物增殖活性和表型变化;定量检测细胞培养上清中的IFN-γ和IL-12;并用MTT法检测共培养细胞杀伤A549肺腺癌细胞和BEL-7404肝癌细胞的活性。结果表明DC与CIK细胞共培养,通过彼此的相互作用诱导出比CIK细胞增殖活性和杀伤活性更强的细胞群体。经A549肺腺癌细胞裂解液抗原冲击的DC活化的CIK,对A549肺腺癌细胞的杀伤活性高于单纯CIK细胞,差异显著(p<0.05)。二者对BEL-7404肝癌细胞的杀伤活性无显著差异。实验证明DC与CIK共培养细胞是一种增殖活性和细胞毒活性高于CIK细胞的免疫活性细胞,经肿瘤抗原冲击的DC能明显提高CIK对肿瘤细胞的杀伤活性,具有更广阔的应用前景。     

Pulsed electric fields for selection of hematopoietic cells and depletion of tumor cell contaminants

Purging of tumor cells and selection of stem cells are key technologies for enabling stem cell transplantation and stem cell gene therapy. Here we report a strategy for cell selection based on physical properties of the cells. Exposing cells to an external pulsed electric field (PEF) increases the natural potential difference across the cell membrane until a critical threshold is reached and pore formation occurs, resulting in fatal perturbation of cell physiology. Attaining this threshold is a function of the applied field intensity and cell size, with larger cells porated at lower field intensities than smaller cells. Since hematopoietic stem cells are smaller than other hematopoietic cells and tumor cells, we found that exposure of peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) to PEFs caused stepwise elimination of monocytes without affecting the function of smaller lymphocyte populations. Mobilized peripheral blood exposed to PEFs was enriched for CD34+/CD38- cells and stem cell function was preserved. Furthermore, PEF treatment was able to selectively purge blood preparations of tumor cells and eradicate transplantable tumor.     

Sulfiredoxin基因敲低对HeLa细胞恶性生物学行为的影响

Sulfiredoxin（SRX)作为一种重要的抗氧化蛋白质,最近研究发现其对某些肿瘤细胞生物学行为及细胞恶性转化有重要作用,而SRX对宫颈癌细胞恶性生物学行为有何影响尚未见报道.本研究选取宫颈癌HeLa细胞株,分别设为Wild-type（WT）组,Non-target（NT）组,Knock-down（KD）组. 利用siRNA技术干扰SRX基因在HeLa细胞中的内源性表达,采用MTT法、平板克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测肿瘤细胞增殖力、浸润、迁移能力、细胞凋亡情况,并分别用3组HeLa细胞上清液处理人脐静脉内皮细胞,观察各组条件培养基对内皮细胞血管形成能力的影响.结果表明,与两对照组比较,SRX干扰组细胞增殖力、浸润、迁移力显著降低,且干扰组上清使内皮细胞体外血管形成能力也明显下降（P<0.05）,而凋亡率则明显增加（P<0.05）.而两对照组之间结果均无显著差异（P>0.05）.实验结果表明,SRX基因对宫颈癌HeLa细胞恶性生物学行为具有促进作用,说明SRX可能与宫颈癌恶性进展有密切关系.     

Retracted: Suppression of BMX-ARHGAP fusion gene inhibits epithelial-mesenchymal transition in gastric cancer cells via RhoA-mediated blockade of JAK/STAT axis

Gastric cancer (GC) is one of the main causes of cancer-related mortality worldwide. Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is an important biological process involving the process by which malignant tumor cells obtain the ability of migration, invasion, resistance of apoptosis, and degradation in the extracellular matrix. The current study aimed at investigating whether bone marrow X kinase Rho GTPase activating protein 12 (BMX-ARHGAP) fusion gene affects GC. First, short hairpin RNA (shRNA) against BMX-ARHGAP or BMX-ARHGAP were introduced to treat SGC-7901 cells with the highest BMX-ARHGAP among the five GC cell lines (SGC-7901, MKN-45, NCI-N87, SNU-5, and AGS). Next, cell vitality, drug resistance, migration, and invasion of SGC-7901 cells, activities of Rho and JAK/STAT axis, as well as EMT and lymph node metastasis (LNM) were evaluated. The survival rate of the mice was then determined through the transfection of the specific pathogen-free NOD-SCID mice with treated SGC-7901 cells. The results showed that BMX-ARHGAP expression was associated with the infiltration degree of GC tumor and poor prognosis for patients with GC. BMX-ARHGAP silencing was found to play an inhibitory role in the Rho and JAK/STAT axis to reduce cell vitality, drug resistance, migration and invasion, reverse EMT process, as well as inhibit LNM. BMX-ARHGAP overexpression was observed to have induced effects on GC cells as opposed to those inhibited by BMX-ARHGAP silencing. The survival rate of mice was increased after transfection with silenced BMX-ARHGAP. These findings provided evidence that the suppression of BMX-ARHGAP resulted in the inhibition of RhoA to restraint the development of GC cells by blocking the JAK/STAT axis.     

The stem cell code in oral epithelial tumorigenesis: ‘The cancer stem cell shift hypothesis’

Tumors of the oral cavity provide an ideal model to study various stages of epithelial tumor progression. A group of cancer cells termed cancer stem cells (CSCs) eludes therapy, persists and initiates recurrence augmenting malignant spread of the disease. Hitherto, accurate identification and separation of such minimal residual cells have proven futile due to lack of identifiable traits to single out these cells from the heterogeneous tumor bulk. In this review we have compiled comprehensive evidence from comparative phenotypic and genotypic studies on normal oral mucosa as well as tumors of different grades to elucidate that differential expression patterns of putative stem cells markers may identify ‘minimal residual disease’ in oral squamous cell carcinoma. We propose the “cancer stem cell shift hypothesis” to explain the exact identity and switch-over, tumor-promoting mechanisms adapted by putative CSCs with correlation to tumor staging.     

赖氨酰氧化酶样蛋白4在人类恶性肿瘤发生与发展中的作用

赖氨酰氧化酶样蛋白4(lysyl oxidase like 4, LOXL4)是一种属于赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase, LOX)蛋白质家族的分泌型铜依赖性胺氧化酶,参与细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的组装和维持。LOXL4蛋白在人类肝癌、胃癌、乳腺癌、宫颈癌、头颈鳞癌、食管癌和结直肠癌中表达上调,而在人类膀胱癌和肺癌中表达下调并抑制肿瘤的生长,表明LOXL4蛋白在不同类型的人类恶性肿瘤中具有促癌或抑癌的双向作用。肿瘤细胞外泌体中的LOXL4蛋白通过催化作用产生过氧化氢,后者直接激活FAK/Src信号通路,并促进细胞基质粘附和细胞迁移。外泌体介导的LOXL4还可以通过激活PI3K/Akt信号通路来促进肿瘤细胞的增殖和免疫逃逸。肿瘤细胞中的 LOXL4可以经外泌体转运至巨噬细胞,进一步通过STAT1和STAT3介导的信号通路激活细胞免疫抑制功能和激活程序性死亡配体 1(programmed death ligand 1, PD-L1)表达,触发巨噬细胞的免疫抑制功能,促进肿瘤细胞的免疫逃逸。此外,LOXL4蛋白还能通过激活p53蛋白和抑制Ras/ERK信号转导通路发挥抑癌功能。本文主要总结了LOXL4蛋白的结构、功能及其在人类恶性肿瘤发生发展的作用机制,进一步探讨LOXL4蛋白在恶性肿瘤研究中的应用前景,为恶性肿瘤的临床诊断、治疗和筛选预后标志物提供理论基础和参考依据。     

稳恒磁场联合抗肿瘤药物协同杀伤肝癌细胞Hepa1-6

化学疗法为肿瘤临床治疗的常规方法,存在毒副作用大、抗药性强等缺陷。为了提高药物的利用效率,减少药物引起的毒副作用,将8.8 m T稳恒磁场分别与顺铂、阿霉素联用,经MTT检测发现磁场与药物联用可对肝癌细胞Hepa1-6生长具有协同抑制的效应,经HE染色发现联合处理组细胞发生明显的形态学改变。流式细胞仪检测显示磁场能增加顺铂对G2/M期细胞的滞留,而磁场与阿霉素共同作用可将细胞阻止于G1期和G2/M期。经彗星电泳检测表明磁场能够增强药物对DNA的损伤,且原子力显微镜观察发现联合处理组细胞膜表面出现较大且较深的孔洞,表面结构破坏严重。实验结果表明,抗肿瘤药物与磁场联用技术可有效抑制肿瘤细胞的生长,减少药物的使用浓度,为将抗肿瘤药物与磁场应用于临床治疗恶性肿瘤提供了一个全新的思路与策略。     

恶性横纹肌样瘤（MRT）的起源研究——高变异率HeLa细胞致裸鼠产生MRT的实验研究

HeLa细胞KB株、X株、NM20／X株、H株的染色体众数依次为60±3（超二倍体）、62±3（超二倍体）、68±3（超二倍体和亚四倍体）和78±2（亚四倍体）,所占比率分别为72%～76%,69%,52%和40%。在纯化3代的肿瘤阴性对照二倍体猫肾（染色体众数38所占比率80%）和犬肾原代细胞皮下接种裸鼠的致癌／致瘤率分别为0%（0／22）和0%（0／10）,X株HeLa细胞冻融裂解物皮下接种裸鼠产生进行性缩小肿瘤的比率为20%（1／5）的前提下,HeLa细胞KB株、X株、NM20／X株皮下接种裸鼠产生进行性生长恶性肿瘤的比率分别为100%（10／ 10）,100%（25／25）和100%（5／5）,H株细胞皮下接种裸鼠产生恶性肿瘤的比率为50%（5／10）。其中,只有HeLa细胞KB株10～11代（染色体结构畸变率高达20%,出现18%双着丝点和2%断片）以超高数量接种的1组4只裸鼠（0.17ml12.75×10     

Effect of pulsed electric fields upon accumulation of zinc in Saccharomyces cerevisiae

Cultures of Saccharomyces cerevisiae were treated with pulsed electric fields to improve accumulation of zinc in the biomass. Under optimized conditions, that is, on 15 min exposure of the 20 h grown culture to PEFs of 1500 V and 10 microns pulse width, accumulation of zinc in the yeast biomass reached a maximum of 15.57 mg/g d.m. Under optimum zinc concentration (100 microgram/ml nutrient medium), its accumulation in the cells was higher by 63% in comparison with the control (without PEFs). That accumulation significantly correlated against zinc concentration in the medium. Neither multiple exposure of the cultures to PEFs nor intermittent supplementation of the cultures with zinc increased the zinc accumulation. The intermittent supplementation of the cultures with zinc and multiple exposures on PEFs could even reduce the accumulation efficiency, respectively, by 57% and 47%.     

探讨免疫球蛋白超级家族成员9促进肺腺癌细胞增殖的作用及机制

肺癌是全球发病率与死亡率均位于第一位的恶性肿瘤。肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)大约占整个肺癌的40%。但是,目前对肺腺癌发生发展的机制尚未阐明。TCGA在线数据库GEPIA证实,免疫球蛋白超级家族成员9(immunoglobulin superfamily member 9,IGSF9)在肺腺癌中的平均表达量是6.56,其在正常癌旁组织中的平均表达量是0.55,提示IGSF9在肺腺癌中的表达量是正常癌旁组织的11.93倍。人类蛋白组学数据库也提示,IGSF9在肺腺癌中高表达。通过qRT-PCR检测IGSF9在肺腺癌细胞中的表达量,发现其在A549和H1299细胞中的表达量分别是其在BEAS-2B细胞中的4.17倍和6.6倍。细胞功能实验发现,过表达IGSF9,其LUAD细胞的增殖能力显著增加。平板克隆形成实验发现,在A549细胞中,对照组平板克隆大约有240个,过表达IGSF9后,该组细胞的平板克隆数大约是385个,实验组的克隆数目是对照组的1.60倍(P<0.01)。敲低IGSF9,则LUAD细胞增殖能力明显降低。平板克隆形成实验发现,在H1299细胞中,对照组平板克隆大约有320个,敲低IGSF9后,该组细胞的平板克隆数大约是164个,实验组的克隆数目仅为对照组的51.25%(P<0.01)。生物信息学预测结合后期研究证实,IGSF9可显著抑制叉头蛋白K2(forkhead box protein K2,FOXK2)的表达。MTS实验发现,过表达FOXK2可显著逆转IGSF9对LUAD细胞增殖的促进作用,而敲低FOXK2则可明显补偿敲低IGSF9对LUAD细胞的增殖抑制作用。这些结果提示,IGSF9通过下调FOXK2从而促进LUAD细胞的增殖。