nm23-H1对全反式维甲酸诱导的人肝癌细胞凋亡及其相关信号转导通路的影响

为了解nm23-H1转染对全反式维甲酸诱导的人肝癌H7721细胞凋亡的影响,本研究通过质粒转染把nm23-H1导入人肝癌7721细胞,建立了nm23-H1过表达稳转细胞株。首先采用MTT法测定细胞生长曲线,再通过流式细胞术和丫啶橙染色法观察细胞凋亡,最后采用Western blot检测凋亡相关的信号通路分子bcl-2、PKB、PKB-Ser473、PKB-Thr308和p53的表达情况。研究发现,nm23-H1转染对人肝癌7721细胞的生长没有影响;但nm23-H1转染能明显促进全反式维甲酸诱导的细胞凋亡,nm23-H1转染细胞凋亡率为18.2%,而对照细胞凋亡率仅为1.0%;nm23-H1和对照细胞的过量表达对bcl-2的表达没有明显影响,但PKB的Ser473和Thr308位的磷酸化显著下调,抑癌基因p53的表达量上调。研究结果表明,nm23-H1的过量表达增加了人肝癌细胞对全反式维甲酸诱导的凋亡的敏感性,因此推测nm23-H1可作为肝癌治疗的有效靶点。     

紫草素促进caspase-9活化诱导大肠癌细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨紫草素对大肠癌（CRC）细胞LoVo的抗肿瘤作用及其机制。 方法以不同紫草素浓度梯度（0、2、4、6 μmol/L）处理CRC细胞LoVo 24 h，以4 μmol/L紫草素处理不同时间梯度（0、12、24、48 h）的CRC细胞LoVo。流式细胞技术结合Annexin V-FITC/PI双染色测定细胞凋亡率，Western blot检测细胞中caspase-9蛋白的表达及切割情况。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与0 μmol/L处理CRC细胞LoVo 24 h比较，2、4、6 μmol/L的细胞凋亡率[（6.94±1.02）﹪比（10.61±1.12）﹪、（15.55± 1.35）﹪、（36.51±1.46）﹪]均升高；与4 μmol/L紫草素处理0 h的CRC细胞LoVo比较，12、24、48 h的细胞凋亡率[（1.33±0.59）﹪比（19.23±1.24）﹪、（22.24±1.41）﹪、（28.41±1.52）﹪]均升高，差异具有统计学意义（P均< 0.001）。当紫草素剂量≥2 μmol/L，处理时间≥12 h时，caspase-9蛋白表达上调并被诱导活化，而caspase-9抑制剂（Z-LEHD-FMK）预处理后，LoVo细胞凋亡率下降38.7﹪，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论紫草素可以通过caspase-9蛋白的表达及其切割活性诱导CRC细胞凋亡。     

维甲酸激活基因cDNA RA538诱发人食管癌细胞终末分化与凋亡

将含有RA538的真核表达载体pCDV1与含neo基因的表达载体pDOR-neo经Lipofectin法共转染到人食管癌细胞系EC8712,EC109细胞,结果表明:RA538的表达对两细胞系均有很强的生长抑制作用,引起细胞形态的明显改变,诱发细胞终末分化与死亡。RT-PCR分析发现,RA538的表达激活了谷氨酰胺转移酶(transglutaminase,TGase)基因的表达,引起c-myc基因表达下降,被膜素(involu-crin)基因表达增加.而对TGF-β基因的表达没有明显的影响.应用凋亡细胞原位检测法证实,RA538表达诱发的细胞死亡是通过细胞凋亡而实现的.以上结果与直接用维甲酸处理人食管癌细胞后所得结果相似 因此认为:RA538是维甲酸诱导人食管癌细胞发生终末分化和凋亡过程中一系列被激活基因中的1个关键基因.     

活性氧诱导细胞凋亡

细胞凋亡是细胞主动的衰老和死亡方式。细胞凋亡过程极其复杂,其生化机制还不十分清楚。用活性氧如H_2O_2、ONOO及脂质过氧化物等可直接诱导某些细胞发生凋亡,抗氧化剂对细胞凋亡有抑制作用。细胞内产生活性氧的部位主要是线粒体电子传递链、黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶途径、磷脂酶A_2激活的花生四烯酸代谢途径及精氨酸-NO合成酶途径。外源性活性氧或通过内源性活性氧的生成,导致细胞内氧化还原状态的失衡,诱导某些基因的表达,引起凋亡。     

α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ转染对全反式维甲酸诱导的人肝癌细胞凋亡的影响

式维甲酸诱导细胞凋亡,α1,3 FucT-Ⅶ的过量表达使凋亡细胞数量明显增多,caspase-3的活性和细胞骨架F-actin的破坏均增高,抑制剂DEVD-CHO可明显抑制细胞凋亡,但F-actin的破坏程度并未得到改善.通过caspase-3通路转染α1,3 FucT-Ⅶ增加了肝癌细胞对全反式维甲酸诱导的凋亡的敏感性,从而为肝癌的防治提供了实验依据.     

全反式维甲酸联合辛二酰苯胺异羟肟酸诱导MCF-7 细胞凋亡

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)和辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)单独及联合应用对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响。方法:培养人乳腺癌MCF-7细胞,待细胞进入对数生长期,加入一定浓度的ATRA和(或)SAHA,采用流式细胞术检测细胞的凋亡情况。结果:ATRA和SAHA单药及联合应用早期凋亡率均高于对照组,但24 h时测得联合组早期凋亡率低于单药组,48 h、72 h联合组早期凋亡率高于SAHA组却低于ATRA组,差异均有统计学意义(P0.05);联合组死亡细胞和晚期凋亡细胞率之和高于单药组及对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:ATRA和SAHA单独或联合作用于乳腺癌MCF-7细胞均可促进细胞凋亡,两药联合应用时诱导细胞凋亡作用更强。     

华蟾素诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡

本研究旨在探讨华蟾素诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡及其机制.分别用终浓度0、60、70、80μg/L的华蟾素作用于人胃癌MKN-45细胞48 h,采用激光共聚焦显微镜观察细胞形态结构,流式细胞术检测细胞凋亡率、线粒体膜电位,RT-qPCR和Western blot分别检测Bax、Bcl-2、Cy tC、Caspase 9和Caspase 3基因表达水平.结果显示,与对照组相比,0、60、70、80μg/L的华蟾素作用人胃癌MKN-45细胞48h,呈现细胞皱缩、细胞核裂解、染色质凝集等形态学变化,早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞所占百分比均显著增加,线粒体膜电位(ΔΨm)显著降低.Bax、Cyt C、Caspase 9和Caspase 3基因的mRNA及蛋白表达水平随着药物浓度的升高均显著升高(P＜0.01),Bcl-2基因mRNA及蛋白表达水平随着药物浓度的升高显著降低(P＜0.01),提示华蟾素可通过上调Bax、Cyt C、Caspase 9和Caspase 3基因表达,下调Bcl-2基因表达诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡.     

原位末端标记技术观察双歧杆菌诱导实验性大肠癌的凋亡

本文以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,将实验分为双歧杆菌注射组以及肿瘤对照组,用原位末端标记法观察了移植瘤组织的凋亡细胞百分率。结果显示：双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤的凋亡细胞百分率为２６４２８±１８６２,而对照组则为２０６２±８８０,两者比较具有显著的统计学意义（Ｐ＜０００１）。提示青春型双歧杆菌可诱导大肠癌组织的凋亡,这可能是其抑瘤机理的一个方面     

羊栖菜多糖诱导HL-60细胞凋亡的研究

用MTT法观察羊栖莱多糖(SFPS)在体外抗人白血病HL-60细胞增殖作用;扫描电镜、透射电镜、DNA电泳和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡。结果表明SFPS对HL-60细胞具有显著生长抑制作用,并呈量效和时效关系,药物作用24,36,48,72h的IC50分别为390,362,402,421mg／L;药物浓度为300mg／L和500mg／L作用HL-60细胞后,琼脂糖凝胶电泳显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带,细胞微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成;DNA直方图出现亚G1峰。在一定浓度范围内,SFPS诱导细胞凋亡的作用呈现浓度和时间依赖性,同时G2／M期细胞比例增多。因此,SFPS抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡和G2／M期细胞阻滞有关。     

双歧杆菌诱发实验性大肠癌凋亡的电镜观察

本文以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,用透射电镜观察了青春型双歧杆菌对移植瘤超微结构的影响。结果表明：双歧杆菌经荷瘤鼠腹腔注射后能诱导多量大肠癌细胞凋亡,凋亡早期的细胞主要表现为核染色质浓缩边聚;中期为核膜破裂,胞核崩解,凋亡小体形成;晚期主要为邻近活细胞吞噬凋亡小体。提示双歧杆菌诱导大肠癌细胞程序化死亡可能是其抑瘤机制之一。     

胡桃楸提取液诱导Hela细胞凋亡的研究

目的：初步探讨胡桃揪提取液对Hela细胞的凋亡诱导作用。方法：通过形态学观察,琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术（FCM）检测凋亡细胞。结果：形态学观察发现核固缩、出现凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳可见DNA ladder条带。流式细胞仪检测有凋亡峰。结论：胡桃揪提取液可诱导Hela细胞凋亡。     

视黄酸对胃癌细胞周期的调控

视黄酸(RA)能够抑制许多类型癌细胞生长、诱导细胞凋亡和调节细胞周期。本文研究了全反式视黄酸(ATRA)对人胃癌细胞的作用机理。结果表明,ATRA通过诱导细胞滞留在G_0/G_1期而显著抑制胃癌细胞生长,但ATRA不能诱导胃癌细胞凋亡;ATRA调控细胞周期与c-myc、磷酸化Rb水平的下调和p21~(WAF1/CIP1)、p53水平的上调有关,而cyclinD_1和CDK_4水平没有明显变化。在RA抗性细胞中,ATRA不能调节这些基因表达。结果证实,ATRA对胃癌细胞生长抑制与其诱导细胞滞留在G_0/G_1期有关,而与细胞凋亡的诱导无关,许多重要的、与周期相关的分子,包括cmyc、p21~(WAF1/CIP1、p53和Rb等参与细胞周期的调控。     

OxLDL诱发大鼠血管内皮细胞凋亡模型的建立

目的　建立OxLDL诱发大鼠血管内皮细胞凋亡的模型。方法　SD大鼠尾静脉注射非氧化的LDL ,2 4h后取主动脉血管内皮细胞铺片 ,采用光学显微镜和荧光显微镜进行形态学观察 ,TUNEL法染色计算凋亡细胞比例。结果　( 1)静脉注射LDL组观察到明显的凋亡形态学改变 ,对照组未见凋亡内皮细胞 ;( 2 )静脉注射LDL ( 4mg/kg、 6mg/kg、8mg/kg)组凋亡细胞比例分别为 8 10 %、 18 92 %、 2 2 0 3 % ,三组间有非常显著性差异 (P <0 0 1)。结论　 ( 1)尾静脉注射LDL后 2 4h可引起血管内皮细胞凋亡 ;( 2 )静脉注射LDL引起大鼠血管内皮细胞凋亡呈剂量依赖性     

地塞米松诱导培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡

目的　研究地塞米松诱导纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡的作用。方法　不同浓度的地塞米松(浓度为 10 -3 、 10 -4、 10 -5mol/L)与纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞共同孵育 18小时后 ,吖啶橙染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学改变 ,流式细胞仪检测细胞凋亡和结晶紫比色法酶标仪测定活细胞数。结果　 (1)吖啶橙染色荧光显微镜观察 :10 -4组偶见细胞凋亡 ,10 -3 组可见许多细胞有典型的凋亡形态学改变核固缩 ,深染 ,或肿胀 ,碎裂 ,并可见凋亡小体。 (2 )流式细胞仪检测细胞凋亡 :10 -3 组细胞凋亡率为 15 99% ,与其它三组相比明显增高 ,有显著性差异 (P <0 0 1)。 (3)结晶紫法酶标仪测定活细胞数 :10 -3 组OD值为 0 . 185与其它三组相比明显下降 ,有显著性差异 (P <0 0 1) ,表明活细胞数明显减少。结论　大剂量地塞米松可诱导体外的星形胶质细胞凋亡。     

羊栖菜多糖诱导lovo细胞凋亡及其机理探讨

本课题研究羊栖菜多糖(Sargassum Fusiforme Polysaccharides,SFPS)诱导人大肠癌lovo细胞凋亡及凋亡过程中Caspase-3的变化及其意义。MTT法检测SFPS对大肠癌细胞增殖的抑制率;通过电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术鉴定细胞凋亡;应用Western blot法测定Caspase-3酶原的变化; RT-PCR检测Caspase-3 mRNA表达。结果显示:SFPS作用lovo细胞24,36,48和72h的IC_(50)分别为375,355,178和60mg/L,表明对lovo细胞具有显著生长抑制作用。在电镜下,可见明显的细胞凋亡特征:细胞膜表面微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成。在琼脂糖凝胶电泳中,药物浓度为5-300mg/L作用24h后,显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带;而500mg/L处理后梯状条带模糊,开始出现“涂片状”,表明在高药物浓度的作用下,细胞有坏死。流式细胞仪测得细胞凋亡率有剂量的依赖性;DNA直方图出现亚G1峰,但细胞周期时相的分布无明显改变。SFPS处理lovo细胞后,发现Caspase-3酶原蛋白表达降低,Caspase-3的mRNA高表达,并具有剂量和时间的依赖性。实验结果提示,SFPS在体外能够诱导lovo细胞凋亡,这可能是SFPS抑制肿瘤增殖的机制之一,而Caspase-3的活化参与了SFPS诱导lovo细胞凋亡的调控。     

羊栖菜多糖诱导lovo细胞凋亡及其机理探讨

本课题研究羊栖菜多糖（Sargassum Fusforme Polysaccharides．SFPS）诱导人大肠癌lovo细胞凋亡及凋亡过程中Caspase-3的变化及其意义。MTT法检测SFPS对大肠癌细胞增殖的抑制率：通过电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术鉴定细胞凋亡：应用Westernblot法测定Caspase-3酶原的变化：RT—PCR检测Caspase-3mRNA表达。结果显示：SFPS作用lovo细胞24,36,48和72h的IC50分别为375,355,178和60mg／L,表明对lovo细胞具有显著生长抑制作用。在电镜下,可见明显的细胞凋亡特征：细胞膜表面微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成。在琼脂糖凝胶电泳中,药物浓度为5—300mg／L作用24h后,显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带：而500mg／L处理后梯状条带模糊,开始出现“涂片状”,表明在高药物浓度的作用下,细胞有坏死。流式细胞仪测得细胞凋亡率有剂量的依赖性;DNA直方图出现亚G1峰,但细胞周期时相的分布无明显改变。SFPS处理lovo细胞后,发现Caspase-3酶原蛋白表达降低,Caspase-3的mRNA高表达,并具有剂量和时间的依赖性。实验结果提示,SFPS在体外能够诱导lovo细胞凋亡,这可能是SFPS抑制肿瘤增殖的机制之一．而Caspase-3的活化参与了SFPS诱导lovo细胞凋亡的调控。     

三氧化二砷诱导细胞凋亡对线粒体的影响

线粒体作为细胞能量的“动力工厂”,在细胞的生理过程中起着重要的作用,本文采用三氧化二砷（Ａｓ２ Ｏ３） 诱导ＭＧＣ－ ８０３ 细胞凋亡,通过罗丹明１２３ 和Ｈｏｅｃｈｅｓｔ３３２５８ 对细胞进行荧光标记,利用具有光子计数成像能力的超高灵敏度荧光显微镜观察凋亡细胞与未加入Ａｓ２ Ｏ３ 的对照组细胞的区别,发现Ａｓ２ Ｏ３ 在诱导细胞凋亡时可引起线粒体内膜电位差减小     

维生素A酸和双丁酰基环腺苷单磷酸对小鼠胚胎干细胞的诱导分化

我们用建系的小鼠胚胎干细胞ES-5细胞为材料,研究了维生素A酸(RA)和双丁酰基环腺苷单磷酸(dBcAMP)对该胚胎干细胞的体外诱导分化。在ES-5细胞单层培养的条件下,RA单独作用或RA与dBcAMP共同作用,都产生神经元样和成纤维样两种细胞;在后一种作用情况下分化细胞可达90—95%,通过对细胞形态特征表型标志(GFAP,层粘蛋白等)的分析,初步证明绝大部分细胞为神经胶质细胞。除单层培养外,我们还研究了RA对ES-5细胞聚集体贴壁培养的诱导分化,在这种条件下,分化细胞类型较多,其是最突出的是有节律收缩的心肌样细胞。本文讨论了ES-5细胞单层培养与细胞聚集体贴壁培养两种条件下,RA诱导的差异及其可能原因。