MS-222对布氏鲷幼鱼的麻醉效果研究

在水温26.5℃±0.2℃条件下,研究了麻醉剂MS-222对布氏鲷Tilapia buttikoferi幼鱼(13.5 g±1.2 g)的麻醉效果。试验表明:低浓度(10 mg/L)MS-222可使鱼体兴奋并出现剧烈打斗行为,随着麻醉剂浓度的升高(30¹10 mg/L),鱼体依次达到1110 mg/L),鱼体依次达到1⁶期最终麻醉状态;1106期最终麻醉状态;110¹90 mg/L为MS-222对布氏鲷幼鱼的有效麻醉浓度范围,试验鱼能在3 min之内达到第4期麻醉状态,并能在3 min内复苏,且麻醉15 min成活率为100%;多重比较结果显示,130190 mg/L为MS-222对布氏鲷幼鱼的有效麻醉浓度范围,试验鱼能在3 min之内达到第4期麻醉状态,并能在3 min内复苏,且麻醉15 min成活率为100%;多重比较结果显示,130¹90 mg/L药物浓度下,布氏鲷幼鱼进入第4期麻醉所需时间、复苏时间无显著差异(P>0.05);150 mg/L药物浓度麻醉5 min,随着空气暴露时间的增加(0190 mg/L药物浓度下,布氏鲷幼鱼进入第4期麻醉所需时间、复苏时间无显著差异(P>0.05);150 mg/L药物浓度麻醉5 min,随着空气暴露时间的增加(0²5 min),试验鱼复苏时间逐渐减少,暴露25 min之后复苏时间快速增加。本研究结果可为MS-222在布氏鲷的生产、研究等领域的应用提供参考。     

盐酸氯苯胍在斑点叉尾鮰体内的药代动力学及残留消除规律

在水温(28±1)℃条件下, 以20 mg/kg剂量的盐酸氯苯胍口灌斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus), 采用高效液相色谱-串联质谱法研究盐酸氯苯胍在斑点叉尾鮰体内的药代动力学和残留消除规律。结果显示, 在单次口灌给药后, 盐酸氯苯胍在斑点叉尾鮰血浆中的药时曲线符合二室模型特征, 其药动学方程为C= 7.69e–0.02t+ 0.13e–0.01t–7.82e–0.27t。盐酸氯苯胍在斑点叉尾鮰血浆、肌肉、皮、鳃、肝脏和肾脏中的T_(peak)分别为10.03、15.79、11.10、2.61、12.89、7.87h; C_max分别为5.76 μg/mL、2.91、2.90、3.05、3.04、0.42 mg/kg, 消除半衰期分别为58.63、23.57、35.37、19.74、29.34、43.30h; 药-时曲线下面积AUC分别为326.74 (μg/mL)/h、157.58、183.72、95.09、174.82、29.85 (mg/kg)/h。在连续口灌给药5d后, 停药后盐酸氯苯胍在斑点叉尾鮰肠道中的浓度最高, 肌肉中浓度最低, 盐酸氯苯胍在体内各组织中的消除速度由高到低依次为血浆、鳃、脑、肌肉、皮肤、肝脏、肾脏、肠。若将10 μg/kg作为盐酸氯苯胍的最高残留限量, 在试验条件下, 建议盐酸氯苯胍在斑点叉尾鮰体内的休药期至少应为23d。     

植物精油对草菇双额岩小粪蝇的产卵驱避效果及毒力测定

在室内采用选择性试验测定了14种植物精油单组分化合物对草菇双额岩小粪蝇Bifronsina bifrons(Stenhammar)的产卵驱避效果及在室外采用非选择试验测定了其中3种化合物的产卵驱避效果及毒力测定。结果表明:各精油浓度为10 000 mg/L时,α-松油醇、丁香酚和茴香醛表现出明显的产卵驱避效果,其选择性产卵驱避率分别是60.17%±9.57%、51.07%±2.63%和47.66%±7.10%,产卵量均显著低于对照;月桂烯、α-蒎烯、β-蒎烯和异松油烯产卵驱避作用效果不明显。α-松油醇、丁香酚和茴香醛对双额岩小粪蝇幼虫均具有一定的毒性,对幼虫的校正死亡率分别是5.11%±3.54%、42.68%±3.94%和14.47%±6.92%;丁香酚对双额岩小粪蝇幼虫的毒力最大,LC_(50)为16 965.159 mg/L。其次是茴香醛,LC_(50)为311 941.332 mg/L。α-松油醇毒力最差,LC_(50)为40 676 080.550 mg/L。进一步非选择性试验结果表明α-松油醇(1 250 mg/L～20 000 mg/L)、丁香酚(625 mg/L～20 000 mg/L)和茴香醛(2 500 mg/L～20 000 mg/L)对双额岩小粪蝇具有明显的产卵驱避效果,驱避效果随施用浓度的增加而显著增加。在浓度为20 000 mg/L时α-松油醇、丁香酚和茴香醛的非选择性产卵驱避率分别为69.75%±3.98%、60.75%±1.94%和57.23%±3.38%。本研究为草菇生产中双额岩小粪蝇的无公害防治及高效环保的植物源驱避剂的开发提供参考。     

斑点叉尾鮰鱼油脂成分分析

采用铁锅炼制提取斑点叉尾鮰内脏鱼油,然后加酸使其甲酯化,以气相色谱/质谱法分析鱼油中的脂肪酸.结果斑点叉尾鮰内脏纯油脂中鱼油达到99%.从鱼油中共鉴定出15种成分,有饱和脂肪酸及不饱和脂肪酸,还有少量烷烃类物质.不饱和脂肪酸含量为76.40%,其中多不饱和脂肪酸为18.03%,以C18∶ 2(16.23%)为主,单不饱和脂肪酸为58.37%,以C18∶ 1(54.88%)为主.饱和脂肪酸含量为20.91%,主要有C16∶ 0 (15.84%)和C18∶ 0(4.29%),多是低于C18以上的中长链脂肪酸.因此斑点叉尾鮰油脂可作功能性脂肪酸的重要膳食来源.     

不同水温下氟甲砜霉素在斑点叉尾鮰体内的药代动力学研究

研究不同水温（18℃和28℃）条件下,单剂量（10mg/kg b•w）强饲氟甲砜霉素,在斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)体内药代动力学特征。采用高效液相色谱紫外检测法可以同时检测血浆中氟甲砜霉素及其代谢物氟甲砜霉素的浓度。用3p97药代动力学软件处理药时数据。结果表明：在不同水温条件下氟甲砜霉素在斑点叉尾鮰体内的药时数据均符合一室开放式模型。药时规律符合理论方程C血浆=7.921(e-0.036t–e-0.18t)和C血浆=9.061 (e-0.081t–e-0.301t)。18℃和28℃的条件下,主要药代动力学参数：吸收半衰期T1/2ka分别为3.845h和2.301h,消除半衰期T1/2ke 分别为19.118h和8.519h,达峰时间 Tpeak 分别为11.136h和5.953h,最大血药浓度Cmax分别为4.074µg/mL和4.226µg/mL,曲线下面积 AUC分别为174.547(µg/mL)/h和81.279(µg /mL)/h,平均驻留时间 MRT分别为27.581h和12.290h,相对表观分布容积V/F(c)分别为1.580L/kg和1.5121L/kg。采用氟甲砜霉素防治斑点叉尾鮰细菌性疾病,建议在18℃左右口服10mg/kg体重剂量的氟甲砜霉素,2d给药1次;在28℃左右口服10mg/kg体重剂量的氟甲砜霉素,1d给药1次。试验过程中在斑点叉尾鮰血浆样品中未检测到氟甲砜霉素的主要代谢物氟甲砜霉素胺。     

基于重组毕赤酵母的斑点叉尾鮰β-防御素表达

β-防御素是斑点叉尾鮰Ietalurus punetaus抵御病原微生物侵染的首要蛋白质免疫因子,其一级结构包含氨基端24个氨基酸组成的信号肽和羧基端43个氨基酸组成的成熟肽,该成熟肽赋予β-防御素的生物学活性。文中首次构建了产斑点叉尾鮰β-防御素的毕赤酵母Pichiapastoris重组菌株,实现了基于真核表达的斑点叉尾鮰β-防御素的生物合成。首先通过RT-PCR从斑点叉尾鮰皮肤中分离β-防御素成熟肽基因"IPBD",将其与表达载体p PICZαA连接并转入毕赤酵母X-33后,获得重组毕赤酵母菌株;经含1 000μg/m L博来霉素的培养基筛选,获得高拷贝重组菌株。以BMM培养基(无氨基氮源培养基)替代BMMY培养基(含氨基氮源培养基),对重组菌株的发酵培养条件进行优化,确定其产斑点叉尾鮰β-防御素的最适条件为:28℃、250 r/min、1.0%甲醇诱导表达96 h。重组菌株产物经镍离子亲和层析获得分子量为5.98k Da的纯化蛋白,基于MALDI-TOF-TOF的质谱分析证明该纯化蛋白为重组IPBD。抑菌活性测定结果表明重组IPBD对革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、单增李斯特菌Listeria monocytogenes以及革兰氏阴性的铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa的抑菌率分别为69.6%、71.6%和65.8%。本研究为鱼类来源天然小分子抗菌肽的开发提供了可参考的重组DNA技术。     

斑点叉尾鮰套肠症的病原学初步研究

本研究从2例垂死的患败血症并肠套叠的斑点叉尾鮰血液、肝脏及脑组织中分离到2种类型的致病性细菌菌株，经对细菌进行形态观察、生理生化测试和16S rDNA序列分析，分别鉴定为嗜水气单胞菌和荧光假单胞菌；攻毒实验证实它们确为斑点叉尾鮰病鱼的病原。根据药敏实验的结果，及时对病区斑点叉尾鮰进行治疗，连续用药3-5天，发病的叉尾鮰即停止死亡。根据研究结果，文章对斑点叉尾鮰肠套叠发生的原因进行了的分析，提出了不同的观点。     

斑点叉尾鮰源普通变形杆菌的分离、鉴定及药敏特性

【目的】对患病斑点叉尾鮰进行病原菌分离、鉴定及药敏实验,为斑点叉尾鮰肠道坏死病的防控提供参考。【方法】从患病斑点叉尾鮰病灶、肝、脾和肾分离纯化病原菌,经理化特性测定及16S rRNA基因序列分析对其进行鉴定,开展人工感染试验,并利用纸片扩散法进行药敏特性分析。【结果】分离菌株k1为本次引发斑点叉尾鮰病害的致病菌,其对斑点叉尾鮰的LD50为2.82×10~5 CFU/g。菌株k1理化特性与普通变形杆菌Proteus vulgaris基本一致,16S rRNA基因序列与普通变形杆菌相似性最高,综合判定分离菌株为普通变形杆菌。分离菌株k1对环丙沙星、头孢唑林及头孢拉定等12种抗生素高度敏感,对苯唑西林、阿莫西林及痢特灵等7种抗生素耐药。【结论】分离菌株k1是斑点叉尾鮰病原菌,养殖时可选用庆大霉素及氟苯尼考等药物进行防控。     

三卡因浓度对斑马鱼心脏手术模型麻醉的影响

目的:探讨斑马鱼麻醉过程中三卡因浓度对其心脏手术后生存率的影响。方法:以经典实验方法中的三卡因(MS-222)浓度150 mg/L为对照,分别用浓度为20 mg/L、40 mg/L、60 mg/L、80 mg/L、100 mg/L、150 mg/L、200 mg/L的MS-222麻醉液麻醉,观察斑马鱼术后行为及术后生存率的差异。结果:随着MS-222浓度的提高,斑马鱼表现为入麻时间的逐渐减少、苏醒时间的逐渐增加。MS-222麻醉斑马鱼成鱼的有效浓度为40~160 mg/L,在此浓度范围内,鱼体能够在3 min内达到可施行手术操作的麻醉状态(Ⅱ或Ⅲ期),10 min内可苏醒恢复;随着浓度的增大,呼吸频率的下降速率增大;MS-222浓度为40 mg/L时斑马鱼的术后存活率最高(98.3%)。结论:当MS-222浓度为40 mg/L时,斑马鱼入麻及苏醒较为平稳,术后斑马鱼复苏时间较短,且保持了较高的术后生存率。在实验操作或者生产应用时推荐MS-222麻醉药液最佳麻醉浓度为40 mg/L,所对应的麻醉时间约为15 min左右。     

MS-222对两种规格的异齿裂腹鱼麻醉效果研究

通过MS-222对2种规格的异齿裂腹鱼进行麻醉行为特征研究, 为高原鱼类的麻醉以及运输提供技术支持。试验表明: MS-222麻醉大规格(25.0±1.5) cm和小规格(14.8±2.3) cm异齿裂腹鱼时, 在麻醉时期3期以内, 呼吸频率增加并之间无显著性差异, 在麻醉4期以后呼吸频率才开始显著下降。MS-222麻醉大规格和小规格异齿裂腹鱼的有效质量浓度分别为150—180 mg/L和150 mg/L。在此浓度范围内, 大规格异齿裂腹鱼在MS-222麻醉液中, 5min之内达到4级麻醉状态, 5min之内苏醒恢复, 且在麻醉液中浸浴20min后成活率为100%时的浓度; 小规格异齿裂腹鱼在MS-222麻醉液中, 5min之内达到4级麻醉状态, 7min之内苏醒恢复, 且在麻醉液中浸浴20min后成活率为100%时的浓度。大规格异齿裂腹鱼在180 mg/L的MS-222溶液中麻醉5min, 在空气中进行暴露0—15min, 复苏时间无显著性差异(P>0.05); 小规格异齿裂腹鱼在150 mg/L的MS-222溶液中麻醉5min, 在空气中进行暴露0—15min, 复苏时间存在显著性差异(P<0.05)。