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共有20条相似文献,以下是第1-20项 搜索用时 249 毫秒

1.  人心肌型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备及定量检测试剂盒的研制  
   彭林峰  袁皓加  席仲兴  张正雷  罗广  潘宪云  路东  金红燕  陈国怀《微生物学免疫学进展》,2013年第5期
   目的:利用抗心肌型脂肪酸结合蛋白单抗,研制定量检测心肌型脂肪酸结合蛋白( H-FABP )的ELISA试剂盒。方法使用基因重组H-FABP免疫小鼠,以杂交瘤技术制备特异性抗H-FABP单抗,用这些单抗研制定量检测H-FABP的ELISA 试剂盒。结果筛选获得2株稳定分泌抗H-FABP单抗的杂交瘤细胞株,研制了定量检测H-FABP的ELISA试剂盒,灵敏度达到0.2 ng/mL,线性范围0.4~25 ng/mL,r2=0.9967,回收率在97.2%~104.5%,精密度的变异系数(CV)≤6.72%;应用此试剂盒检测健康人血浆H-FABP,含量为1.87~8.50 ng/mL。结论所研制的ELISA试剂盒有较好的灵敏度及特异性,可用于人血浆中H-FABP含量的检测。    

2.  定量检测猕猴血清中重组人源化抗狂犬病毒单克隆抗体间接ELISA法的建立  
   刘晓雷  侯禹男  陈知航  单成启  车津晶  刘运龙  宋艳霞  苗小红  程远国《生物技术通讯》,2008年第19卷第3期
   目的:建立定量检测血清中重组人源化抗狂犬病毒单克隆抗体(HuMabs)NM57的间接ELISA法,为药代动力学研究提供一种简单快速的方法。方法:采用狂犬病毒糖蛋白包被酶标板、HRP标记的IgG-Fc段为标记抗体,建立定量检测HuMabsNM57的间接ELISA法,并对其特异性、灵敏度、精密度及准确度进行检测。结果:间接ELISA法检测HuMabsNM57的灵敏度为5ng/mL,组内及组间精密度分别为2.6%-6.0%、8.5%-11.3%。结论:建立了灵敏度高、特异性强的检测HuMabs NM57的间接ELISA法,精密度及准确度均符合药代动力学要求,可用于猕猴及人血清中HuMabsNM57的检测。    

3.  大鼠淋巴细胞培养上清液总IgG含量ELISA检测方法的建立  
   单纯筱  王宇  尹磊淼  徐玉东  魏颖  冉君  刘晓燕  刘奇  杨永清《现代生物医学进展》,2012年第12卷第26期
   目的:建立一种定量测定大鼠淋巴细胞培养上清液中总IgG(免疫球蛋白G)含量的双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验)检测方法。方法:用方阵实验确定包被抗体、检测抗体的最佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围;评价标准曲线的可重复性、精密度和可应用性。结果:包被抗体和检测抗体的最佳效价分别为2μg/ml和1:4000稀释;检测的线性范围为0.25-16ng/ml。经方法学评价,可重复性和精密度较高,应用性较强。结论:该方法灵敏度高,重复性好,可作为科研过程中检测大鼠淋巴细胞培养上清液总IgG含量的一种精确、方便、可靠的方法。    

4.  定量测定重组人睫状神经营养因子活性的新方法  
   周虎  汪怡  朱俊铭《中国生物工程杂志》,2008年第28卷第2期
   目的:建立一种能定量测定重组人睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)生物学活性的新方法。方法:从鸡胚中分离出背根神经节并制成神经细胞,将重组人睫状神经营养因子加入到细胞中继续培养64h后,用酸性磷酸酶法检测活细胞内酸性磷酸酶的活性,从而定量测定重组人睫状神经营养因子的生物活性。结果:重组人睫状神经营养因子有促原代鸡胚背根神经细胞存活作用,细胞存活率与加入重组人睫状神经营养因子的量成正相关。结论:通过检测存活的原代鸡胚背根神经细胞内酸性磷酸酶的含量来定量测定重组人睫状神经营养因子生物活性的实验方法具有干扰因素少、定量准确、重复性好等优点。    

5.  基于上转磷光颗粒的AFP免疫层析定量检测  被引次数:1
   赵露晶  周蕾  方菲  孙红英  杨瑞馥  沈鹤柏《生物磁学》,2009年第15期
   目的:建立了上转磷光免疫层析快速定量检测AFP的方法,用于原发性肝癌的诊断。方法:利用上转磷光标记的双抗夹心免疫层析技术检测血清中AFP的含量。将AFP单克隆抗体分别标记上转磷光颗粒并包被硝酸纤维膜,制成免疫层析检测试纸。评价该试纸的灵敏度、特异性和精密度。并通过临床50例血清样本,探讨上转磷光技术与化学发光检测方法的一致性。结果:该方法能在20min内完成,检测灵敏度达5ng/ml。浓度范围从5-1000ng/ml作标准曲线,呈现较好的线性。通过三组平行实验探讨其精密度,变异系数都在10%以内。应用于其它肿瘤标志物如CEA、CA199、AFU和NSE的检测,无交叉反应。与化学发光相比,决定系数R2=0.9692,一致性较好。结论:该方法简便、快速、廉价,可以实现定量,尤其适合基层门诊和体检现场使用。    

6.  高效液相色谱法测定体液中硝酸盐及亚硝酸盐  被引次数:7
   Cui XY  Li L  Lu GW《中国应用生理学杂志》,2002年第18卷第4期
   目的和方法 :应用高效液相色谱技术建立一种灵敏的检测不同体液中硝酸盐和亚硝酸盐的方法。结果 :唾液、血清及尿液经过不同方法处理后应用高效液相色谱ODS反相柱分离 ,紫外检测器于 2 10nm检测其中的硝酸盐和亚硝酸盐的含量。整个分离过程少于 7min ,硝酸盐和亚硝酸盐的测定线性范围分别为 0 .7~ 10 0ng、5~ 10 0ng ,最低检测极限分别为 0 .3ng和 2ng。硝酸盐回收率为 99%~ 10 2 % ,亚硝酸盐回收率为 99%~ 10 4 %。测定硝酸盐及亚硝酸盐的精密度分别为 0 .8%和 1.7%。结论 :本法测定硝酸盐和亚硝酸盐简便、灵敏度高、特异性好    

7.  转基因水稻“科丰6号”实时荧光PCR定性定量检测方法研究  
   黄新  张琰  侯立华  张祺  陈洪俊  朱水芳《生物技术通报》,2010年第2期
   旨在建立转基因水稻"科丰6号"外源基因和边界序列的实时荧光PCR检测方法,为科丰6号定性定量检测提供技术支持.根据外源基因和边界序列信息,设计实时荧光PCR探针引物,优化体系,对不同转基因产品和不同转基因含量的"科丰6号"水稻进行检测.结果显示,所设计的引物探针具有很好的特异性,与其他转基因水稻品系、转基因玉米、转基因棉花、转基因番茄和非转基因水稻均无非特异性反应,对转基因水稻"科丰6号"的检测灵敏度达到0.01%.建立的科丰6号实时荧光PCR检测方法重复性好、灵敏度高,能够达到目前国际上转基因产品定量检测的标准,为该水稻品系的定性定量检测提供技术支持.    

8.  一种检测马尔尼菲青霉菌实时荧光定量 PCR 方法的建立和应用  
   钟华敏  谢永强  邓秋连  黄莲芬  钟玉葵《现代生物医学进展》,2014年第7期
   目的:建立一种检测马尔尼菲青霉菌的实时荧光定量PCR的方法。方法:针对马尔尼菲青霉菌5-8SrRNA设计特异性PCR引物,采用核酸荧光染料SYBRGreenI进行实时荧光定量PCR检测,探讨该方法的灵敏度和特异性,并进行临床样品检测验证。结果:该方法的特异性较好,与该菌属内的其他细菌间无交叉反应;灵敏度可检测出10个细胞/mL全血,在检测范围内线性良好。相关系数R^2=0.981。临床样品检测和传统的培养方法结果完全相符。结论:该方法特异性好,灵敏度高,操作简单,检测时间短;临床样品检测具有很好的准确性,从本研究的结果显示实时荧光定量PCR方法在检测马尔尼菲青霉菌中的应用可以大大缩短临床的诊断时间,提高临床诊断的准确度和效率。    

9.  腐皮镰刀菌SYBR Green实时荧光定量PCR快速检测方法的建立  
   王瑜  马建忠  张伟杰  高恺  冯海霞  张莹  车团结《微生物学免疫学进展》,2018年第2期
   目的建立一种能够快速、灵敏、特异的鉴定腐皮镰刀菌的SYBR Green实时荧光定量PCR。方法运用SYBR Green实时荧光定量PCR反应体系检测腐皮镰刀菌,并对此方法的特异性、灵敏度和稳定性进行评价。结果通过对45例样品的检测,结果显示SYBR Green实时荧光定量PCR特异性好,其检出率高于普通PCR;灵敏度高,对重组质粒标准品的检测灵敏度为1.0×10~2copies/μL;稳定性好,对质粒为1.0×10~7copies/μL、1.0×10~5copies/μL、1.0×10~3copies/μL的标准品重复检测10次,结果显示扩增反应Ct值的变异系数为0.96%~1.68%。结论SYBR Green实时荧光定量PCR检测腐皮镰刀菌,不仅特异性好,灵敏度高,稳定性好,而且简便、快速、易操作。    

10.  转基因烟草荧光定量检测方法研究  被引次数:8
   郭兆奎  颜培强  万秀清  李丽杰  杨谦《中国生物工程杂志》,2005年第25卷第1期
   依据实时定量PCR原理,参照35S启动子、NOS终止子、GUS基因和NPTII基因序列设计TaqMan引物和荧光标记探针。采用美国MJ公司OpticonTM2荧光定量PCR检测系统对烤后烟叶进行转基因定量检测技术研究,从中筛选出扩增效率高,灵敏度好的PCR引物和探针序列,同时通过对扩增体系,扩增条件的梯度实验,优化出荧光定量检测的最佳反应体系和反应条件,从而建立了转基因烟草定量检测方法。该方法经验证其检测灵敏度达到0.05%。在2003年6月参加CORESTA(国际烟草科研与合作中心)组织的国际烟草转基因定量检测合作试验中,该优化转基因烟草定量检测技术获得了较好成绩,对盲检样品检测结果评价(Z-score)列国际12家实验室之首,证明此法灵敏度高、稳定性好。    

11.  猴免疫缺陷病毒(SIV)实时荧光定量PCR检测方法的建立  
   王静  张钰  闵凡贵  袁文  赵维波《中国实验动物学杂志》,2013年第9期
   目的建立快速、敏感、特异的猴免疫缺陷病毒(SIV)TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,对SIV病毒核酸进行定量检测。方法RT—PCR扩增SIVmac251保守gag基因序列796bp片段,进行TA克隆,构建标准品质粒pMD—SIVgag。通过对SIV定量外标准品的定量分析,优化反应体系,检测TaqMan探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性和重复性。结果所建立的SIVQPCR检测方法,质粒DNA模板在10’~10。拷贝之间表现较好线性和相关性,标准曲线所得斜率为-3.26,相关系数为0.999。检测灵敏度达到200拷贝,方法重复性测试,检测25份临床样品CV%均小于1%。结论建立的SIVQPCR检测方法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)核酸拷贝量。    

12.  埃博拉病毒莱斯顿亚型实时荧光定量PCR检测方法的建立  
   许黎黎  鲍琳琳  谷松至  秦川《病毒学报》,2015年第3期
   本研究的目的为建立一种灵敏、快速、定量检测埃博拉病毒莱斯顿亚型核酸的实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒。首先选择埃博拉病毒莱斯顿亚型的保守基因NP基因作为检测靶目标,筛选出保守序列并设计合成一对特异性引物。然后将连有NP全长基因的重组质粒作为定量标准品,将10倍系列稀释的重组质粒进行荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线,并进行重复性、灵敏度及特异性检测。结果显示建立的埃博拉病毒莱斯顿亚型荧光定量PCR检测方法,其灵敏度可达102拷贝/μL,不同梯度标准品间线性关系(R2)达0.997,斜率为-0.3101,扩增效率为110.145%,所有标准品均在79.94℃出现尖且窄的特异性熔解峰。利用该检测系统可以快速定量检测埃博拉病毒莱斯顿亚型核酸,灵敏度高、重复性好,可用于基础及临床实验室对埃博拉病毒莱斯顿亚型感染的快速诊断和临床效果的监测,具有实际的应用价值。    

13.  口蹄疫病毒非结构蛋白定量检测ELISA方法的建立  被引次数:1
   李永亮  卢曾军  杨苏珍  田美娜  谢宝霞  刘在新《中国生物工程杂志》,2009年第29卷第11期
   目的:利用口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体建立液相阻断ELISA检测方法,进行定量检测口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白含量。方法:首先将工作浓度的3B单抗与待测病毒培养液过夜结合反应,然后取结合液转移至用3B蛋白包被好的酶标板上,用标准3B蛋白做12个梯度做对照,同时设阴性对照和空白对照。通过回归分析算出口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白3B含量。结果: 回归曲线呈典型的S形,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R =0.99,检测范围为5~1500ng/ml,半数抑制浓度(Ic50)为130ng/ml。结论:该方法能特异、敏感的检测到病毒培养液中的非结构蛋白3B成分,并进行定量。    

14.  地高辛标记探针检测重组定点突变巴曲酶蛋白宿主DNA残留量的研究  
   李娜  徐梅  杨宇  张宏杰  薛雁  王宏英  薛百忠《蛇志》,2013年第25卷第3期
   目的 建立检测重组定点突变巴曲酶原液中外源性DNA残留量的方法.方法 从重组定点突变巴曲酶酵母工程菌提取基因组DNA作为模板,制备地高辛标记探针.此探针与样品进行点样杂交,并进行显色反应.结果 3批重组定点突变巴曲酶原液中,每人份剂量的宿主DNA残留量均<10 ng.结论 该方法检测灵敏度较好,特异性较强,可用于重组定点突变巴曲酶的检测.    

15.  定量检测组织型纤溶酶原激活剂夹心ELISA方法的建立  被引次数:2
   吴本传  李世崇  刘红  刘兴茂  叶玲玲  陈昭烈《生物技术通讯》,2006年第17卷第2期
   目的:建立灵敏、特异的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)定量测定方法,为血栓性疾病和肿瘤性疾病的早期诊断及疗效评估提供辅助手段。方法:采用抗t-PA多克隆抗体包被酶联板、HRP标记抗t-PA单克隆抗体为标记抗体、重组t-PA为标准品,建立定量测定t-PA的夹心ELISA双抗体法。以t-PA测定的特异性、灵敏性和重复性评价夹心ELISA测定法。结果:夹心ELISA测定法可检测t-PA浓度为0.5ng/mL的样品,不同样品的组内和组间的变异系数分别为4.7%和8.4%。采用夹心ELISA法测定40份正常人血浆,t-PA的平均含量为(4±2.1)ng/mL。结论:夹心ELISA测定法具有灵敏性高、特异性强的特点,可用于人血浆中t-PA水平的定量测定。    

16.  重组人血清白蛋白抗体检测方法的建立及确证  
   李丽  刘运龙  陈知航  张玉民  刘学龙  程远国《生物技术通讯》,2013年第3期
   目的:建立一种高灵敏度、高特异性、操作简单快捷、通量高的重组人血清白蛋白(rHSA)抗体检测方法。方法:采用桥连ELISA法,即将rHSA包被于96孔板,加入待测血样及阳性对照,用辣根过氧化物酶标记的rHSA检测,显色读取D_450nm/D_570nm值:用此方法确定临界值、方法灵敏度、精密度、血药浓度对检测方法的影响,再以免疫清除法进行确证。结果:通过桥连ELISA法确定临界值为0.0492,方法灵敏度为352ng/mL,方法板间、板内精密度均小于20%,且血药中的rHSA浓度为20μg/mL时不影响抗体的检测;经免疫清除法可将假阳性样本排除,从而提高了方法的特异性.结论:建立的方法可以准确、快速地检测出rHSA的特异性抗体。    

17.  双抗体夹心ELISA定量检测IFNβ-HSA融合蛋白方法的建立  被引次数:1
   张立操  张莲芬  雷楗勇  陈其亮  陈蕴  许泓瑜  许正宏  张雁云  金坚《生物技术通报》,2009年第1期
   为了建立β干扰素与人血清白蛋白融合蛋白(IFNβ-HSA)的酶联免疫定量分析方法,以抗IFNβ单克隆抗体为包被抗体,IFNβ-HSA融合蛋白为夹心抗原,辣根过氧化酶(HRP)标记抗HSA单克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定IFNβ-HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法.并进行了检测限、精密度、准确度和稳定性等方法学考核.结果表明,包被抗体和检测抗体的最佳工作浓度均为2μg/ml,抗原浓度在51.88-3320 ng/ml范围内呈良好线性关系,相关系数R2>0.99.检测限为10ng/m1.经方法学考核,批内、批间变异系数分别为4.86%和8.08%,回收率为91.9%~110.4%,与IFN-B、IFN-α、HSA、IFNα2b-HSA基本无交叉反应.健全性分析表明发酵液稀释倍数对该方法无影响,8 d连续检测标准曲线表明稳定性良好.这种定量检测IFNβ-HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法,灵敏度高,重复性好,为当前融合蛋白发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法.    

18.  双抗体夹心法检测3-硝基酪氨酸方法的建立及应用  
   Yan L  Xu YW  Wang XL  Wu Y  Tian J  Yang GZ  Ma XR  Liu HR《中国应用生理学杂志》,2009年第25卷第4期
   目的:建立一种准确、快速的双抗体夹心酶免疫吸附的方法,以定量检测组织中过氧亚硝基阴离子的水平。方法:分别以小鼠源性抗3-硝基酪氨酸单克隆IgG抗体和兔源性抗3-硝基酪氨酸IgG抗体为包被抗体和检测抗体,采用正交设计方法摸索以上各抗体的浓度,建立定量检测3-硝基酪氨酸(3-NT)的双抗体夹心ELISA法。同时,测定心肌缺血再灌注大鼠心肌组织3-NT的含量。结果:本研究建立的双抗体夹心ELISA法检测3-NT的最低检测下限为0.10ng·ml^-1,具有良好线性关系的检测范围是(0.15-7.50)ng·ml^-1(r^2=0.995);心肌缺血再灌注组大鼠的心肌组织中的3-NT水平为(1022.42±97.35)ng·mg pro^-1,明显高于假手术组(246.58±56.52ng·mg pro^-1,P〈0.01)。结论:本研究建立的定量检测3-NT的双抗体夹心ELISA法能够方便、准确、快速地检测组织中3-NT的含量,为定量检测组织中ONOO-的水平提供了新的方法。    

19.  鼠疫耶尔森菌rV抗原单抗系统及其ELISA检测方法的建立  
   常娅莉  焦磊  魏东  吴智远  胡丽娜  卜培英  白钰  王秉翔《微生物学免疫学进展》,2012年第40卷第3期
   目的建立ELISA双抗体夹心法,测定重组毒力因子rV抗原含量。方法采用杂交瘤技术,制备鼠疫菌rV抗原的鼠单克隆抗体,对抗原表位和单抗特异性进行分析及鉴定,建立ELISA双抗体夹心法,并验证方法的专属性、准确性、精密度和线性范围。结果成功组建了鼠疫菌rV抗原诊断试剂,灵敏度最低检测值为10 ng/mL。结论该方法可用于免疫学检测鼠疫组分疫苗原液rV抗原含量及制备过程中抗原活性,是鼠疫组分疫苗制备中一种重要的质量控制手段,也为进一步开发鼠疫诊断试剂盒及其他相关研究奠定了基础。    

20.  toxR基因作为荧光定量PCR靶基因设计TaqMan探针快速检测副溶血弧菌  被引次数:10
   覃倚莹  吴晖  肖性龙  杨晓泉  张经纬  余以刚  李惠芳《生物工程学报》,2008年第24卷第10期
   以toxR基因为靶基因,通过优化反应条件建立了快速检测副溶血弧茵的TaqMan实时荧光PCR方法.特异性试验表明,该方法能选择性检测副溶血弧茵,而与金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特杆菌等多种常见的食源性病原茵没有交叉反应:灵敏度试验表明,该方法最少可检测到25个拷贝的toxR基因重组质粒,对纯培养物和模拟食品样品直接检测的灵敏度分别为21 cfu/mL和210 cfu/g;重复性试验表明,同一样品于试验内及试验间的变异系数分别为0.9%和1.3%:所制作的标准曲线在2.5 × 101~2.5 × 106拷贝数之间有较好的线性关系,能对副溶血孤菌进行准确的定量分析.结果表明,本研究所建立的副溶血弧菌实时荧光PCR检测方法具有特异性好,灵敏度高、重复性好的特点,能进行定量检测,而且检测时间从核酸抽提到出实验结果仅需要3 h.是快速检测副溶血弧菌的有效手段.    

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