毛细管电泳-短小串联重复序列多态性方法及对人凝血因子ⅧB STR位点的检测

为开展高效毛细管电泳技术对STR位点的检测,通过建立毛细管电泳-短小串联重复序列(STRs)多态性的检测方法,实现了利用毛细管电泳快速检测人凝血因子B(F13B)STR位点PCR产物的长度多态性,结果F13B-STR基因型分型正确,图谱清晰.方法的建立可简化常规多态性检测,实现快速、准确分离.     

毛细管电泳-短小串联重复序列多态性方法及对人凝血因子ⅩⅢB STR位点的检测

为开展高效毛细管电泳技术对STR位点的检测,通过建立毛细管电泳-短小串联重复序列（STRs）多态性的检测方法,实现了利用毛细管电泳快速检测人凝血因子ⅩⅢB（F13B）STR位点PCR产物的长度多态性,结果F13B-STR基因型分型正确,图谱清晰.方法的建立可简化常规多态性检测,实现快速、准确分离.     

毛细管电泳四色荧光检测法分析茶树SSR标记

将毛细管电泳四色荧光栓测技术应用于茶树SSR标记分析.该方法采用三引物PCR扩增SSR位点,三引物即在5'端加有M13尾巴序列(5'-CACGACGTTGTAAAACGAC-3')的特异正向引物、特异反向引物及带有荧光标记的通用型M13引物:为了运用四色荧光检测系统使通过一次毛细管电泳能同时检测3个以上的SSR位点,采用蓝、绿、黑3种不同颜色的荧光染料分别对3个M13引物进行标记. 应用该方法对42个茶树品种(系)的16个SSR位点进行遗传分析的结果表明:此法具有简便、可靠、低成本及高通量的优点;且随着所分析SSR位点数的增加,降低成本的效果更加显著.采用建立的方法,还筛选获得了11个多态性丰富的可应用于茶树遗传研究的SSR标记.     

基于四引物扩增受阻突变体系PCR 的多重乳腺癌相关SNP 位点检测方法的建立

为提高单核苷酸多态性检测的通量, 引入多重嵌合引物PCR 和毛细管电泳对四引物扩增受阻突变体系PCR 进行改进. 针对乳腺癌位点rs4784227(C>T), rs1219648(G>A)和rs3803662(T>C)设计特异性嵌合引物, 经一次PCR扩增后, 通过毛细管电泳分析产物长度, 同时确定3 个位点的基因型. 70 份全血和口腔拭子样本, 电泳结果均与测序一致, 实现成功分型. 本方法仅需一次PCR 和一次毛细管电泳即可获得3 个位点的分型结果, 操作简单、快速准确.     

基于低成本聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)电泳芯片的微型DNA分析仪

在低成本的聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)电泳芯片上,利用双通道共聚焦激光诱导荧光检测系统实现了单链DNA快速高效的分离检测．选用0.8 mm厚度的PMMA薄片加工微管道,一方面降低了检测限,另一方面提高了散热性能．通过线性聚丙烯酰胺筛分胶液以及使用纤维素衍生物对微管道表面进行动态修饰等条件的优化,芯片完成了高分辨率、高重现性的短串联重复序列(STR)等位基因的快速分型检测．两个STR位点D13S317 和CSF1PO的等位基因分型标准物(allelic ladder)和实际样本的PCR扩增产物均在3 min内达到了基线分离,表明低成本的PMMA电泳芯片在法医学及临床医学领域的基因分析方面具有良好的发展潜能．     

银染法检测短串联重复序列(STR)位点PCR产物鉴别MRC-5细胞

通过采用银染法鉴别短串联重复序列聚合酶链式反应(STR)位点的PCR产物来鉴别人二倍体细胞MRC-5株主细胞库、工作细胞库及限制代细胞。运用PCR方法对细胞库的9个STR位点(CSF1PO、TPOX、TH01、F13A01、FESFPS、vWA、D16S539、D7S820、D13S317)和性别鉴别位点Am elogen in进行扩增,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染法显影技术,检测MRC-5主细胞库、工作细胞库及限制代细胞的遗传标记。与ATCC公布的MRC-5的荧光STR图谱的8个STR位点和Am elogen in位点相比,MRC-5主细胞库、工作细胞库、限制代细胞的银染STR图谱的9个STR位点和Am elogen in位点,荧光法和银染法重叠的8个位点(CSF1PO、TPOX、TH01、FESFPS、vWA、D16S539、D7S820、D13S317和Am elogen in)数据完全吻合,说明细胞鉴别试验成立。STR图谱作为细胞鉴别的方法简单、易行、准确。     

北京油鸡MSAP毛细管电泳荧光检测技术的建立

采用毛细管电泳荧光检测技术, 对北京油鸡肌肉组织基因组进行甲基化敏感扩增片段多态性(Methylation sensitive amplified polymorphism, MSAP)检测。通过对基因组DNA用量、预扩产物稀释倍数、选择性引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度和电泳内标量等6个主要参数进行分析和优化, 建立了适合北京油鸡基因组DNA甲基化分析的MSAP毛细管电泳荧光检测技术。重复实验表明, 建立的毛细管电泳荧光标记的MSAP检测技术能够自动地、高通量地分析北京油鸡基因组的DNA甲基化状态, 也适用于其他动植物基因组的DNA甲基化研究。     

用SSR标记鉴定大豆杂交组合F1的方法研究

为建立鉴定大豆杂种的方法,采用亲本间有多态性的3对SSR引物,对148个耐盐与盐敏感大豆品种正反交F1植株进行分子鉴定,结果表明,有81．8％的F1为真杂种,且3对多态性SSR引物检测结果一致;在亲本基因型纯合的情况下,采用1对在亲本间有多态性的SSR引物即可对F1真伪进行准确判断;亲本间分子量差异大的SSR位点可用高浓度琼脂糖电泳进行快速鉴定。利用该方法对2007年参加国家大豆区试的大豆杂交种品系H02—286的50粒种子进行纯度鉴定,进一步验证了SSR标记检测杂种真伪的可行性。     

胶带纸粘面上汗潜指纹的STR分型检测

目的:建立胶带纸粘面上汗潜指纹的STR分型检测方法.方法:采用EZ1 Tissue试剂盒与EZ1 BioRobot全自动DNA纯化装置提取纯化汗潜指纹中的DNA,低拷贝模板(LCN)STR复合扩增,荧光电泳检测.结果:胶带纸粘面上的汗游指纹可得到完整的powerplex16基因座的STR分型,经磺酸双三嗪类荧光显色液喷雾显现的胶带纸粘面的汗潜指纹可成功进行PowerPlex16位点的分型.结论:成功建立了胶带纸粘面上汗潜指纹的微量DNA检验方法.     

近交系剑尾鱼的STR遗传检测技术

目的建立近交系实验用鱼DNA检测方法,用于遗传质量控制。方法以RR-B、RW-H、BY-F三个近交系剑尾鱼的基因组DNA为主要研究对象,并以非选育剑尾鱼作对照,采用STR（short tandem repeat）引物扩增方法检测不同品系在DNA上的异同。设计10对STR引物,优化PCR电泳条件,使用相同的实验条件进行重复,以得到可靠的扩增条带,筛选出特异性引物。结果有4对引物可扩增出稳定条带,1对引物（AY204223）的PCR扩增条带在非选育群中表现多态性,在RR-B与BY-F系表型一致,与RW-H表型不同。这些STR位点能够区分剑尾鱼三个近交系品系。结论STR检测技术可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测。