大青杨基因组DNA提取方法的比较

本研究采用改良SDS法、常规CTAB法和改良CTAB法(1.5×CTAB,2×CTAB,3×CTAB)提取大青杨基因组DNA,并用紫外光普分析、凝胶电泳、限制性内切酶消化和RAPD方法进行鉴定.结果表明:5种方法中,改良SDS法DNA提取率最高,但CTAB法比改良SDS法提取获得的DNA纯度高,OD260/OD280为1.73～1.81.与常规CTAB法比较,改良SDS法和改良CTAB法能有效去除蛋白、多糖、酚类及次生代谢物质.综合分析确定改良2×CTAB法为大青杨基因组DNA的最佳提取方法.     

适合于胞质基因组扩增的红麻成熟叶片DNA提取改良方法

为了从成熟红麻叶片中提取高质量、高产量的基因组DNA,针对红麻成熟叶片中多糖、多酚含量较高的特性,利用改良CTAB法及改良SDS法分别提取红麻品种福红952成熟叶基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计测定进行DNA质量检测。结果表明:改良CTAB法提取的基因组DNA电泳时点样孔干净,条带整齐无拖带,OD260/OD280为1.9左右,产率可达1.84μg/g,其质量、产量都高于改良SDS法,所提取的DNA可用于红麻RAPD分子标记、线粒体DNA、叶绿体DNA通用引物PCR扩增。改良CTAB法是提取成熟红麻叶片DNA的有效方法,并且可用于红麻分子标记及胞质基因组学研究。     

油用牡丹‘凤丹’叶片DNA提取方法研究

以新鲜的牡丹叶片为材料,采用CTAB法、SDS法以及改良CTAB法提取基因组DNA,通过紫外光谱分析法、琼脂糖凝胶电泳等检测方法对牡丹基因组DNA的提取方法进行筛选。在这三种DNA提取方法中,SDS法略好于CTAB法。SDS法DNA得率虽低,但其纯度高,去糖去蛋白等杂质比较干净,且在未加RNA酶的情况下,RNA污染较少。改良CTAB法浓度比CTAB法增大,但纯度仍低于SDS法。所以,牡丹叶片DNA的最佳提取方法为SDS法。     

松科植物基因组总DNA提取方法的比较

目的:研究对比了用不同方法提取红松、樟子松和红皮云杉等3种松科植物叶片基因组DNA的效果,以寻找适合提取松科植物叶片基因组DNA的方法。方法:分别比较了用传统的CTAB法、SDS法以及3种改良的CTAB法提取的上述3种松科植物叶片基因组DNA的电泳、纯度和酶切效果。结果:采用不同方法提取的3种松科植物叶片基因组DNA的质量差异较大。结论:常规CTAB法和SDS法无法提取出高质量松科植物基因组DNA,而改良后的CTAB法的提取效果较好。     

短序十大功劳基因组总DNA提取方法研究

以短序大功劳嫩叶为材料,采用CTAB法、CTAB改良法1、CTAB改良法2、SDS法和试剂盒法五种方法提取短序十大功劳基因组总DNA,用分光光度计和琼脂糖凝胶电泳方法检测所得总DNA的纯度和得率,用ISSR-PCR扩增的方法检测所得总DNA的质量。结果表明,五种方法均能从短序大功劳叶片中提取到基因组DNA,但不同方法提取得的基因组DNA的纯度、浓度和得率存在明显的差异。CTAB改良法2和试剂盒法提取的DNA纯度高,可直接用于下游分子生物学实验,CTAB法、CTAB改良法1和SDS法提取的总DNA质量较差,不利于下游的分子生物学实验;五种方法提取的总DNA的得率在10.836~451.709μg/g之间,呈CTAB法>SDS法>CTAB改良法1>CTAB改良法2>试剂盒法的现象。此实验获得的结果可以为短序十大功劳分子生物学研究提供基础。     

RAPD分析用白花丹参叶片DNA的提取方法

本研究采用改良CTAB法和SDS法提取新鲜白花丹参叶片的基因组DNA,初步筛选RAPD扩增引物。结果表明改良CTAB法提取的DNA较SDS法质量好,随机引物p2扩增条带相对较为清晰。再利用p2随机引物对2种方法提取的DNA进行RAPD检测比较,结果显示仅改良CTAB法能扩增出有效条带,说明改良CTAB法更适合用于白花丹参基因组DNA的RAPD检测分析。本文将为白花丹参叶片DNA的提取提供方法学参考。     

乌桕不同组织DNA提取方法及其效果(简报)

以乌桕嫩叶和胚乳为材料,采用改良CTAB法和SDS法提取乌桕基因组DNA,研究提取条件对DNA提取效果的影响,确定β-ME用量、PVP用量、RnaseA酶用量。结果表明,用改良CTAB法提取乌桕叶片和种子时,DNA获取量和提取纯度明显优于SDS法。     

几种中药DNA提取方法的比较研究

以丹参、绞股蓝、三七为材料,分别采取CTAB法和SDS法提取基因组DNA,并通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA样品进行检测,将它们在DNA产量、质量等方面的优缺点进行总结。结果表明,CTAB法能从丹参、绞股蓝中提取高质量的DNA,而三七的DNA更适合用SDS法提取。     

降香黄檀基因组DNA的提取方法研究

目的：建立适合降香黄檀基因组DNA的提取方法。方法：采用常规SDS法、常规CTAB法和改良CTAB法等3种方法提取降香黄檀叶片基因组DNA,经电泳、吸光度、酶切检测比较提取结果;对采用改良CTAB法提取的基因组DNA进行ISSR-PCR检测。结果：改良CTAB法通过增加洗涤样品步骤,有效去除了多糖和多酚类物质,提取的DNA质量好,无降解现象,无蛋白质、盐离子及RNA污染。结论：改良CTAB法是一种高效的提取方法,使用该方法所得DNA的质量完全能够满足相应的分子操作需要。     

杨梅基因组DNA提取方法筛选和优化研究

选择具有代表性的杨梅品种20份,分别采用CTAB法和SDS法,选取嫩叶进行基因组DNA提取比较研究,结果表明,由于叶片中含有较高的酚类物质,相对来说CTAB法优于SDS法,提取的基因组DNA色泽白亮且数量多,而且同一提取方法如CTAB法,不同品种之间提取得率也有较大差异。在CTAB法的基础上,选取两个品种研究水浴时间对DNA提取的影响,发现DNA得率随水浴时间的延长呈现抛物线态势,最佳水浴时间随样品颗粒的大小而变化,一般最佳时间为30～40min,样品颗粒较细时水浴时间以30min为最佳,较粗时则为40min。添加异丙醇量以2/3为好,析出DNA的最佳离心速度和时间分别为5 000r/min和10～15min。     

集胞藻PCC 6803高产精氨酸藻株的紫外诱变选育

精氨酸在医药和食品工业上具有广泛用途。集胞藻PCC 6803是单细胞蓝藻, 能利用工业废气(主要成分是氮氧化物NO_x)与水反应生成的硝酸盐和亚硝酸盐合成氨基酸等化合物, 因而选育高产精氨酸藻株, 不仅能提高精氨酸产量, 而且能去除工业废气中的NO_x, 具有潜在的应用前景。研究在集胞藻PCC 6803中利用紫外诱变, 筛选抗0.8 g/L D-精氨酸和抗0.2 g/L 6-氮尿嘧啶的突变株, 选育到了一株精氨酸产量显著提高的突变株#13807-111-55, 它每OD₇₃₀值细胞的胞外精氨酸产量相比出发株提高了62.3倍, 达到(0.76±0.1) mg/(L·OD₇₃₀), 总精氨酸产量相比出发株提高了6.0倍, 达到(0.82±0.08) mg/(L·OD₇₃₀)。该突变株每OD₇₃₀值细胞的胞外精氨酸产量明显高于胞内, 表明该突变藻株是精氨酸分泌型, 因而具有潜在的应用前景。     

梨不同DNA提取方法的效果研究

以7个梨品种为实验材料,比较分析了SDS法、CTAB法、SDSCTAB法、改良的CTAB法、高盐低pH值法、分步离心法对梨总DNA提取的效果。结果表明:利用以上6种方法提取的梨总DNA在纯度和量上有很大的差别。所得到的平均DNA量从大到小依次为:分步离心法、SDS法、SDSCTAB法、改良的CTAB法、CTAB法、高盐低pH值法。DNA提取纯度依次为分步离心法、SDSCTAB法、改良的CTAB法、高盐低pH值法、CTAB法、SDS法。RAPD和自交不亲和基因(S基因)特异性引物扩增实验结果都比较理想,但分步离心法和SDSCTAB法提取的DNA双酶切效果较好。分步离心法提取的梨总DNA更适用于后续的分子生物学实验操作。     

Intra and intermolecular charge effects on the reaction of the superoxide radical anion with semi-oxidized tryptophan in peptides and N-acetyl tryptophan

The reaction of the superoxide radical anion (O^-·₂), with the semi-oxidized tryptophan neutral radical (Trp^·) generated from tryptophan (Trp) by pulse radiolysis has been observed in a variety of functionalized Trp derivatives including peptides. It is found that the reaction proceeds 4-5 times faster in positively charged peptides, such as Lys-Trp-Lys, Lys-Gly-Trp-Lys and Lys-Gly-Trp-Lys-O-tert-butyl, than in solutions of the negatively charged N-acetyl tryptophan (NAT). However, the reactivity of O^-·₂ with the Trp^· radical is totally inhibited upon binding of these peptides to micelles of negatively charged SDS and is reduced upon binding to native DNA. By contrast, no change in reactivity is observed in a medium containing CTAB, where the peptides cannot bind to the positively charged micelles. On the other hand, the reactivity of the Trp^· radical formed from NAT with O^-·₂ is reduced to half that of the free Trp^· in buffer but is markedly increased in CTAB micelles. The models studied here incorporate elements of the complex environment in which Trp^· and O^-·₂ may be concomitantly formed in biological system and demonstrate the magnitude of the influence such elements may have on the kinetics of reactions involving these two species.     

玉米蛋白粉DNA提取方法比较研究

饲料样本本身的复杂性给进出口产品转基因（genetically modified,GM）成分的检测工作带来了巨大的压力和挑战。玉米蛋白粉主要包含蛋白质、淀粉和脂类等成分,从中提取高品质的DNA比较困难,而高品质的DNA是转基因检测研究的关键,能够大大降低进出口检验中的“假阴性”结果。采用市售主流品牌常用的7种试剂盒（Promega公司、Biotecon公司、天根生化科技有限公司、Invitrogen公司、Qiagen公司、TaKaRa公司）、CTAB法以及改良SDS?CTAB法提取玉米蛋白粉中的DNA。通过对玉米内源基因进行实时荧光PCR检测,发现改良SDS?CTAB法提取的玉米蛋白粉DNA质量明显优于其他方法,改良SDS?CTAB法内源基因zSSIIb的C_t值为28.14,较CTAB法提高了27%。研究建立的改良SDS?CTAB法在国内外尚属首次应用于饲料转基因产品中,并对7批次实验室送检样品进行转基因成分检测,成功检出2批次阳性样品。     

营养液照光引起的化学变化及其对植物生长的影响

水稻(Oryza sativa)根系照光实验表明, 光的效应随循环水影响到不照光的植株, 暗示营养液中发生了化学变化。在Si (K₂SiO₃)和Fe (FeEDTA)组成的溶液模拟系统中, 分别照射LED-紫光或阳光, 观察到反应液的OD₄₀₀值随光照时间的延长而增加。光照引起的化学变化发生在FeEDTA和K₂SiO₃之间。化学变化只与光能量有关, 与溶液温度无关, 这是一种光化学反应。光化反应溶液的光吸收从OD₃₆₀到OD₅₆₀都有明显增高。LED-蓝光和阳光诱导产生的并含FeEDTA-SiO₃成分并能吸收光的二元螯合铁硅酸盐复合物附着在衬底膜上, 形成三元复合物。衬底膜上可见大量的颗粒, 其中有些是反光的微晶颗粒。除LED-蓝光和阳光外, LED-紫光、LED-红光和LED-红外光也能诱导产生光谱性质相同的螯合铁硅酸盐复合物。制备含螯合铁硅酸盐复合分子的溶液并进行植物生长实验, 结果显示小球藻生长好, 死亡的藻体分解褪色后留下的是褐色的蓬松团状铁-硅化物。经螯合铁硅酸盐复合物处理的水稻干重增加明显。     

药用植物艾纳香基因组DNA提取方法研究

以药用植物艾纳香为研究对象,以-20℃保存、4℃保存、室温自然干燥和硅胶干燥四种样品保存方式,并采用SDS法、CTAB法、SDS-CTAB法和改良CTAB法4种不同的基因组DNA提取方法进行了对比试验,以期建立艾纳香的较好的样品保存方法和基因组DNA提取方法。结果表明,-20℃保存是艾纳香的较理想的样品保存方式;改良CTAB法是艾纳香基因组DNA提取较适宜的方法,该方法提取的DNA经紫外检测,其A_(260)/A_(280)为1.8左右,明显优于SDS法(1.1～1.5)、CTAB法(1.2～1.5)和SDS-CTAB法(1.4～1.6),琼脂糖凝胶电泳、酶切检测和PCR扩增也得出了同样的结论。     

重组碱性成纤维细胞生长因子游离巯基的测定分析

建立了一种紫外-可见分光光度检测法,可以快速、简便、稳定地测定重组碱性成纤维细胞生长因子的游离巯基含量。将检测试剂、标准品及待测样品一起反应后,在412 nm波长处读取OD值,以标准品浓度为横坐标,以吸光值为纵坐标,绘制标准曲线,根据标准曲线计算待测样品中游离巯基含量;同时对该方法进行了方法学验证。结果表明:该方法专属性强,游离巯基含量测定范围为20~80 μg/ml,线性相关系数在0.999以上,回收率范围为91.7%~107.4%;而且该法精密度较好,精密度的变异系数范围为5%~8%。测得的分子表面和总游离巯基含量与理论一致,可用于蛋白质游离巯基检测,以监测分子结构的正确性与均一性。     

Effective DNA extraction method for fragment analysis using capillary sequencer of the kelp, Saccharina

Deoxyribonucleic acid (DNA) fragment analysis can become an effective tool to study genetic differences between species and individuals on saccharinan kelp from which the little genetic diversity has been reported. Here, extraction methods of DNA suitable for use in analysis with a capillary sequencer is examined on Saccharina japonica var. diabolica which contains abundant polysaccharide. When amplified fragment length polymorphism was performed using genomic DNA extracted by seven different methods: (1) commercial kit, (2) original cetyl trimethylammonium bromide (CTAB) method, (3)–(5) three types of modified CTAB method, (6) modified sodium dodecyl sulfate (SDS) method, (7) combination of CTAB method and SDS method, a high reproducible peak that was suitable for analysis was noticeable in the electropherogram in the experiment with the last combination method (7). It is considered that the pretreatment washing of polysaccharide and the subsequent purification for protein and ribonucleic acid in SDS method and for polysaccharide in CTAB method are effective to obtain the high-purity DNA.