EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞中通过NFκB促进Igκ表达

利用已建立的受四环素调控ＬＭＰ１表达的鼻咽癌细胞系,用受ＣＭＶ启动子调控的ＮＦκＢ报道基因质粒ｐＮＦκＢ－ｌｕｃ的荧光素酶表达分析ＮＦκＢ的活性,并以核蛋白的Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法观察ＬＭＰ１表达前后核内ＮＦκＢ组分ｐ６５量的改变,用全蛋白Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析Ｉｇκ蛋白质的表达等方法,探讨在鼻咽癌中,ＥＢ病毒ＬＭＰ１蛋白是否通过核转录因子ＮＦκＢ促进免疫球蛋白κ轻链（Ｉｇκ）基因的表达。结果显示     

FEN—1基因反义阻断细胞株（FL—FEN—1^—）的建立

ＦＥＮ－１是一咱结构特异性核酸酶,它在ＤＮＡ复制和修复过程中都起着重要的作用。将ＦＥＮ－１基因的ＮｃｏＩ－ＢａｍＨＩ片段反向克隆到哺乳动物细胞重组表达质粒ｐＭＡＭｎｅｏＡｍｐ＾－中,得到ＦＥＮ－１反义表达质粒ｐＭＡＭｎｅｏＡｍｐ＾－ＦＮＢ＾－,并转染ＦＬ细胞,经Ｇ４１８筛选后,获得ＦＥＮ－１基因表达被阻断的哺乳动物细胞ＦＬ－ＦＥＮ－１＾－。对细胞生长曲线的测定发现,ＦＬ－ＦＥＮ－１＾－在地塞米松的     

人肝癌细胞的IGF—BP1分子特性及内源性蛋白酶对其降解的研究

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、高效液相色谱（ＨＰＬＣ）、质谱等方法,研究了人肝癌细胞（ＨｅｐＧ２）分泌的胰岛素样生长因子结合蛋白－１（＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１）的分子结构、特性,及其被内源性蛋白酶降解的特点,＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１的经抗体免疫沉淀、生化分离,纯化为均一体,其分子是由多个亚构成的蛋白质,分子量约为２７ｋＤ;细胞ＵＭＲ、ＨｅｐＧ２、Ｈ３５ＢＲＬ３Ａ分泌的蛋白酶能将＾３５Ｓ－ＩＧＦ－ＢＰ１催     

Epstein—Barr病毒基因组在鼻咽癌组织中转录的特征

对ＥＢ病毒基因在鼻咽癌活检组织细胞内的转录进行了较系统的探测。实验结果表明,ＥＢ病毒基因组在鼻咽癌活检组织中以附加体（Ｅｐｉｓｏｍｅ）形式存在,而其基因转录有如下特征：（１）ＥＢ病毒在所有鼻咽癌组织细胞中都表达ＥＢＮＡ－１,并且此基因转录产物由一个在ＢａｍＨＩ－Ｆ区的启动子（Ｆｐ）驱动;（２）潜伏感染膜蛋白（Ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＭＰ）和末端蛋白（Ｔｅｒｍｉｎａｌ ｐｒ     

细胞周期蛋白（cyclin）D在鼻咽癌中的表达及功能初？…

探讨了细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）Ｄ在ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）潜伏膜蛋白１（ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＭＰ１）阳性和阴性表达的鼻咽癌细胞５系中的表达特征,利用流式细胞仪同时从ＤＮＡ及蛋白质水平初步分析了ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１在鼻咽癌细胞系中的功能。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹的结果发现ｃｙｃｌｉｎｈ Ｄ１在ＣＮＥ－ＬＭＰ１中过表达,在ＨＮＥ１中表达较弱;Ｃｙｃｌｉ     

Epstein—Barr病毒BNLF—1基因的克隆及其在PA317细胞中？…

本文报道以人Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒的潜代膜蛋白基因ＢＮＬＦ－１作为目标基因,插入至逆转录病毒载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）的克隆位点上,由此获得重组逆转录病毒载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）－ＬＭＰ及其反义载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）－ａｎｔｉ－ＬＭＰ,通过质粒ＤＮＡ的电转染和Ｇ４１８培养基筛选,然后对１０个抗性克隆进行基因整合分析、获得６个含ＭＬＶ－ＬＴＲ／ＢＶＬＦ－１融合基因的阳性克隆,采用Ｎ     

Epstein-Barr病毒BNLF-1基因的克隆及其在PA317细胞中的表达

本文报道以人Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒的潜伏膜蛋白基因ＢＮＬＦ－１作为目标基因,插入至逆转录病毒载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）的克隆位点上,由此获得重组逆转录病毒载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）－ＬＭＰ及其反义载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）－ａｎｔｉ－ＬＭＰ,通过质粒ＤＮＡ的电转染和Ｇ４１８培养基筛选,然后对１０个抗性克隆进行基因整合分析,获得６个含ＭＬＶ－ＬＴＲ／ＢＮＬＦ－１融合基因的阳性克隆,采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证明,在克隆细胞中表达了２．６ｋｂ的ｍＲＮＡ片段及相应的蛋白质分子,这是由ＢＮＬＦ－１基因的ＥＤＬ１启动子表达的产物。     

EB病毒转化Hu－TLC－SCID小鼠脾细胞的实验研究

利用ＥＢ病毒转化可产生较高水平人ＩｇＧ和特异性抗２型登革病毒人抗体的Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠脾细胞,通过免疫组化、免疫荧光和ＰＣＲ法检测转化细胞的人Ｂ细胞表面标志、ＥＢ病毒抗原和ＥＢ病毒基因。结果表明,被转化的Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠脾细胞能继续产生抗２型登革病毒的特异性人抗体,并具有人Ｂ细胞的、ＳｍＩｇＧ标志及ＥＢ病毒潜伏膜蛋白－１（ＬＭＰ－１）基因,可表达ＬＭＰ－１和ＥＢ病毒核抗原（ＥＢＮＡ）。     

高分化及低分化鼻咽癌细胞株中Epstein－Barr病毒潜伏感染膜蛋白（LMP1）基因的原位杂交与克隆及序列分析

应用染色体原位杂交、ＰＣＲ扩增、克隆及核苷酸序列分析等方法,分析了ＣＮＥ１和ＣＮＥ３细胞株中的潜伏感染膜蛋白（ＬＭＰ１）基因。ＣＮＥ１是来自我国东北的高分化鼻咽癌细胞株,ＣＮＥ３是来自广西的低分化鼻咽癌细胞株。染色体原位杂交结果表明,ＣＮＥ１细胞中ＬＭＰ１基因存在于细胞核内,整合在第一号染色体上,ＣＮＥ３中ＬＭＰ１基因则随机存在于细胞核内及多条染色体上。用ＰＣＲ方法分别从ＣＮＥ１及ＣＮＥ３中扩增得到了ＬＭＰ１基因片段（外显子３）,核苷酸序列分析证明,来自ＣＮＥ１的ＬＭＰ１与来自Ｂ９５－８细胞的ＬＭＰ１核苷酸序列同源性极高,达９９．５％,而ＣＮＥ３的ＬＭＰ１基因与Ｂ９５－８的ＬＭＰ１基因同源性为９３％。     

Tet调控的EB病毒LMP1基因导入鼻咽癌细胞系表达的研究

本文利用Ｔｅｔ－ｏｎ基因表达系统建立了一株可诱导ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因表达的鼻咽癌细胞株。首先将Ｔｅｔ－ｏｎ基因调控系统的调节质粒ｐＴｅｔ－ｏｎ导入鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２中,用ｒｔＴＡ反应性芝光素酶报道基因ｐＴＲＥ－ｌｕｃ挑选高诱导、低背景的克隆,第二轮转染将构建的反应质粒ｐＴＲＥ－ＬＭＰ１导入得到稳定转染的阳性克隆,对各克隆用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法进行强力霉素诱导效应检测,其中Ｌ７对Ｄｏｘ具有良好的