人肌型特异烯醇化酶放免分析法及初步应用

建立了人肌型特异烯醇化酶(hMSE)的放免分析法,抗血清的亲和常数为5.1×10⁹L/mol,采用改良的BHR法制备了 ¹²⁵I-hMSE,后者非特异结合率为3%,与抗血清(1∶10³)结合率达50.16%;批内和批间CV分别为8.6%和13%.回收率为95%-105%.标准曲线范围为5-320μg/L.最小检出率为5μg/L.最佳反应条件:0.1mol/LpH7.4PBS(含5mmol/L MgSO₄,0.1%吐温-20,0.1%NaN₃);反应温度和时间:37℃反应0.5h和4℃,0.5h,作为快速测定;或选用4℃反应24h.65例健康人血清hMSE浓度为23.9±10.9μg/L(x±s).hMSE超过57μg/L(x+3s).为阳性值.测定了AMI和肌病患者,血清hMSE明显升高.     

大鼠脑组织中一氧化氮合酶测定

在含有一氧化氮合酶(NOS)底物左族精氨酸(L-Arg), 辅助因子还原性辅酶Ⅱ(NADPH)、四氢生物蝶呤(BH₄)、黄素单核苷酸(FMN), 黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)以及Ca²⁺、钙调蛋白等溶液中加入大鼠脑组织匀浆离心上清液, 组成酶反应体系. 37℃温育80min, 应用N-(1-萘基)-乙二胺、对氨基苯磺酸的重氮、偶氮反应测定酶反应体系中一定时间内NO代谢产物NO^-₂浓度变化, 建立一种简便的NOS活性测定方法. 反应体系最佳pH为7.4, K_m=0.1mmol/L, 体系内NO^-₂生成量与加入样品量之间有良好线性关系(r=0.998). 此方法简单、方便、重复性好, 批内CV为3.69%, 批间CV为5.16%. 10只健康大鼠脑组织中NOS活性为(39.61±7.64)nmol/(min·g).     

DNFB柱前衍生化RP-HPLC测定大黄种子氨基酸的含量

采用柱前衍生RP-HPLC法测定大黄种子中氨基酸的含量。6 mol/L盐酸水解得到氨基酸,以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为柱前衍生化试剂,梯度洗脱。色谱柱为Gemimi-NX C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A相为0.1 M乙酸钠水溶液,B相为乙腈-水(1∶1),柱温37℃,检测波长360 nm。结果表明,三种正品大黄种子中均含有17种氨基酸,总量在11.30%~19.26%。该方法灵敏、准确,有良好的重复性和稳定性。     

沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR检测*

根据沙门菌invA基因、大肠杆菌phoA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因序列,设计3对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果表明3对引物能特异地扩增出284bp、622bp、484bp的目的条带;最佳反应条件为沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的引物浓度分别为40nmol/L、40nmol/L、80nmol/L,Mg²⁺浓度2.4mmol/L,dNTP浓度200μmol/L,TaqDNA聚合酶1.5U,退火温度55.0℃~57.4℃之间;在此条件下多重PCR同时检测DNA的敏     

新型柱前衍生试剂分析草甘膦的高效液相色谱研究

以2,5-二甲氧基苯磺酰氯(DMOSC)为柱前衍生化试剂,建立了柱前衍生草甘膦的紫外检测反相高效液相色谱法,并优化了衍生化条件,得最佳条件:衍生温度35℃,时间15 min,pH 10.0,草甘膦与DMOSC的摩尔比为1∶6。HPLC分析条件:采用Kromasil C18柱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长220 nm,流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲溶液(0.02 mol/L、pH 5.5),三者的体积比为15∶5∶80。结果表明:草甘膦质量浓度在5~100μg/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.996 2,检测限为0.067μg/mL。实验表明该方法反应条件温和,灵敏度高,衍生产物稳定。     

酶放大镧系元素发光法测定碱性磷酸酶

报告了应用酶放大镧系元素发光法测定碱性磷酸酶的方法.应用5-氟水杨酸磷酸酯作为酶底物,并对方法学中的多种因素进行了最佳比.用甲基硅油(I)改进了信/噪比的稳定性.方法的灵敏度为4 U/L.精密度为10%.精密度为10%的浓度范围是2.00～3.00×10² U/L.测量值的相对误差＜10%.测定了血清中的碱性磷酸酶浓度,回收率为93%～95%.     

反相高效液相色谱法测定平邑甜茶植株内源ABA、IAA含量

用高效液相色谱法 (HPLC)分析平邑甜茶内源ABA、IAA ,选用SpherisorbC18反相柱 ,用UV检测器进行检测 ,使ABA、IAA得到很好的分离 ,测定方法迅速简便 ,流动相为甲醇、乙酸和水 ,系统研究了pH值、纯化方法对测定结果的影响 ,确定适合平邑甜茶ABA、IAA提取的分离条件。方法的精密度为 :变异系数分别为 2 83和 2 79,最低检出限 (信噪比 =2 )分别为 3 2 7和 3 2 6nmol/L ,线性范围为 50nmol/L -10 0 0nmol/L ,平均回收率为 91 9%和 92 2 %。     

用任意引物PCR进行基因多态性分析时最佳反应条件的建立

用任意引物进行基因组指纹分析是检测DNA多态性的一种通用方法,对遗传学图谱绘制、系统发育学和种群生物学都很有用.由于任意引物PCR(AP-PCR)影响因素很多,获得理想的指纹扩增图谱比较困难,有必要寻找一种简单有效的方法建立最佳扩增体系.对Mg²⁺浓度,模板浓度、引物浓度等三个因素进行优化选择AP-PCR扩增反应实验研究.实验结果表明：Ap-PCR反应的最佳反应条件为2 mmol/L MgCl₂,50 ng的DNA模板及0.3 μmol/L的引物浓度,在上述条件下获得的AP-PCR产物最丰富,条带清晰.     

2种HPLC-柱后衍生化-荧光检测法测定远志中黄曲霉毒素的比较

对远志中测定黄曲霉毒素的2种柱后衍生化方法(碘衍生化和光化学衍生化)进行分析比较。样品经过免疫亲和柱净化，HPLC-柱后衍生化-荧光检测器检测；采用C₁₈(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱，荧光检测。柱后衍生化系统：(1)碘衍生化法，以甲醇-乙腈-水(25∶20∶55)为流动相；衍生溶液为0.05%碘溶液，流速为0.3 m L·min^-1，衍生反应温度为70℃；(2)光化学衍生化法，以甲醇-乙腈-水(35∶15∶50)为流动相。碘衍生化方法中，黄曲霉毒素B₂、G₂在3.8～19 pg范围内线性关系良好，B₁在10.4～52 pg范围内线性关系良好，G₁在10.8～54 pg范围内线性关系良好；在光化学衍生化方法中，黄曲霉毒素B₂、G₂在1.9～45.6 pg范围内线性关系良好，B₁在5.2～124.8 pg范围内线性关系良好，G₁在5.4～129.6 pg范围...     

过氧亚硝基-鲁米诺化学发光体系的改进

建立了一个测定过氧亚硝基阴离子（ONOO^－）化学发光的改进体系,测试了某些抗氧化剂清除ONOO^－的作用,其体系的组成和启动发光的程序如下：向pH 10.5碳酸缓冲液配的0.01 mol/L浓度NaN₃溶液通O₃ 30 s,取其800 μl原位注入含有100 μl水配样品和100 μl的0.001 mol/L鲁米诺溶液中,启动化学发光（chemiluminescence, CL）,立即测定每6秒的脉冲数（CP6S）,连续测定10～30次.根据实际需要,选其某一次的CL强度作为评判指标,对比抗氧化剂的活性.该发光体系灵敏、简便、且较稳定,最低可检测限为8.74 μmol/L的ONOO^－量,线性范围为8.74～74.04 μmol/L.批内变异系数3.35%（n=10）,批间变异系数5.52%（n=10）.测得维生素C(Vit.C)、茶多酚（EGCG）、原花菁素、硫脲皆有抑制CL,即清除ONOO^－的作用.