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1.
利用谷氨酰胺合成酶基因(GS)作扩增标记在CHO细胞中高效表达乙型肝炎表面抗原基因 总被引:1,自引:1,他引:0
利用谷氨酰胺合成酶基因(GS)[1]作扩增选择标记,结合CMV-IE启动子,在CHO细胞中高效表达乙型肝炎表面抗原基因。初筛克隆表达水平RPHA检测为1:64,经过谷氨酰胺合成酶基因的抑制剂MSX的两轮基因扩增,HBsAg的表达水平RPHA在1:256以上。方瓶静置培养收液,RIA检测HBsAg最高产量为9.5μg/毫升。表达水平较以前利用dhfr基因扩增选择系统所得到的高表达细胞系B43高一倍以上。利用GS基因扩增选择系统可以在哺乳动物细胞中高水平表达外源基因。 相似文献
2.
将含有重组HBsAg的pMEP4表达性质粒转染HepG2,CHO,C127和CV1细胞,并用ELISA检测表达量,结果在HepG2细胞中的表达量较高,在C127和CV1细胞中的表达量偏低,而在CHO细胞中没有表达。 相似文献
3.
运用改造后的乙型肝炎病毒表面抗原S+PreS1融合基因(将PreS1区肝细胞受体结合位点(21-47aa)编码基因融合到S蛋白C端223位残基下游),构建了一系列真核表达载体,并在CHO细胞上有效表达了分泌型的、具有S+PreS1双重抗原性的融合蛋白颗粒。用上述质粒DNA肌肉免疫C57BL/6J小鼠,成功地检测到了抗-HBs和抗-PreS1抗体,加强免疫能显著改善免疫效果。本研究还建立了检测抗-PreS1的竞争抑制法和羊抗人HBsAg封闭法,两种方法符合率达96%,但后者更为敏感。用羊抗人HBsAg封闭法测得抗-PreS1滴度最高可达1:1280以上。 相似文献
4.
对379例良、恶性肝组织进行的免疫组织化学研究显示,33%的慢性迁延性肝炎(6/18)、76%的慢性活动性肝炎(26/34)、92%的肝硬变(57/62)和97%的肝细胞性肝癌(HCC)(58/60)中有HBxAg表达,阳性率高于HBsAg或HBcAg。癌周肝中的HBxAg阳性率显著高于非癌周肝。与其它2种HBV抗原不同,HBxAg表达在细胞类型上有较明显的选择性,在肝小多角细胞(SPLC)、小细胞性不典型增生(SCD)及HCC中较强。与IGFⅡ、c-erbB-2、c-myc和EGF-R表达进行的对照研究表明HBxAg与IGFⅡ和c-erbB-2这2种HCC发生相关基因的表达关系密切。PCNA染色结果显示HBxAg阳性组织的细胞增殖活性显著高于HBxAg阴性组织。我们的结果还表明HBxAg表达与肝细胞不典型增生的发生和进展有关、提出HBVX基因可能通过其表达产物(HBxAg)首先激活IGFⅡ、c-erbB-2基因,继而引起显著的SPLC增生和SCD而参与HCC发生的. 相似文献
5.
乙肝阳性血浆中HBsAg的滴度与保存温度和疫苗收量关系 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报导了乙型肝炎阳性血浆中HBsAg的滴度与保存温度和疫苗收量的关系。证明:1.4─5年于─20℃保存该血浆对HBsAg滴度无明显影响;2.于─20℃和30℃反复冻融八次以上HBsAg滴度开始下降。3.于25℃保存56天后,该血浆中的HBsAg可下降一个滴度,提示要尽可能避免反复冻融,缩短室温保存时间。用乙肝阳性血浆制备疫苗时疫苗的收量与血浆中HBsAg的滴度密切相关,当RPHA滴度为1:512时,收量明显偏低,RPHA滴度为1:2048以上时疫苗收量较高。 相似文献
6.
乙型肝炎病毒表面抗原aa126 Ile→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
曾在一个儿童患者体内,发现一个新的乙型肝炎病毒(HBV)变异株,其HBsAg主蛋白aa126发生Ile(ATT)到Ser(AGT)的取代。已知adr/ayr亚型HBsAg126位为Ile,而adw/ayw亚型HBsAg126位为Thr,表明HBsAg126Ser是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明,突变体HBsAg126Ser主蛋白aa120-aa130区段的二级结构与野生型adrHBVHBsAg126Ile相比发生明显的改变。这种构象的变化可能会影响a抗原决定簇(a124-aa147)的抗原性。为了证实这一点,构建了突变S基因表达质粒,在SV40早期启动子的控制下进行抗原表达。利用HBsAg9肽(Thr-Ile126-Pro-Ala-Gln-Gly-Thr-Ser-Met)抗i单克隆抗体和9肽(Thr-Thr126-Pro-Ala-Gln-Gly-Thr-Ser-Met)抗t单克隆抗体进行放射免疫测定,结果表明,这种Ser126突变蛋白对抗i单克隆抗体的反应性比野生蛋白减弱,对抗t单克隆抗体的反应性则与HBsAg126Thr接近。但用三种抗-a单克隆抗体的检测结果揭示,突变蛋白HBsAg126 相似文献
7.
本文采用间接免疫荧光法(IF),RPHA法,ELISA法及斑点杂交技术检测10例无症状HB-sAg携带者及89例乙肝病人尿细胞中的HBsAg、HBeAg及HBVDNA,发现尿细胞中有HBsAg、HBeAg、HBVDNA存在。结果提示:乙肝无症状携带者及乙肝病人尿细胞中具有HBsAg、HBeAg、HBVDNA,因此更进一步证实尿液具有传染性。 相似文献
8.
乙型肝炎病毒表面抗原S和前S1融合基因转基因细胞系的建立与细胞性质的研究 总被引:4,自引:3,他引:1
构建了pCHBSSIG质料,其特点是CMV立即早期启动子调控乙型肝炎(乙肝)表面抗原S+前S1融合基因在前,SV40早期启动子调控GS扩增基因在后,此质粒转化到CHO-dhfr^-细胞中,经克隆加MSX及MTX筛选、扩增,建立了7个高效表达乙肝表达抗原S及前S1融合蛋白细胞系GdSS1,并检测了其中GdSS1-18细胞系的生物学特性,结果表明:未发现微生物污染,无致瘤性、遗传稳定,电镜下可观察到2 相似文献
9.
牛生长激素基因的人工合成,重组克隆及高效表达 总被引:2,自引:0,他引:2
本文通过设计选择大肠杆菌高频利用密码子代替天然密码子,人工全合成32个寡聚核苷酸片段;连接并克隆获得A(278bp)、B(88bp)、C(224bp)3个较大DNA片段;经重组克隆、定位突变等获得阳性克隆;双向DNA序列测定分析表明获得了两种人工全合成牛生长激素(bGH)编码基因,即编码N-Met-Ala-bGH和N-Met-Phe-bGH的两个基因,而至今尚未见有人工全合成bGH基因的报道。构建了在PLpromoter控制下含上述合成基因的表达质位pBLbGHE7A1和pBLbGHE8,并在大肠杆菌中进行了温敏诱导表达。经SDS-PAGE分析,表达产物占全菌蛋白的37%以上。Western-blot分析和纯化产物的N端氨基酸序列测定结果都表明上述两种人工全合成bGH基因在大肠杆菌中得到了高效表达,表达量为现今国际文献报道的高限水平。 相似文献