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1.  青藤碱抑制人宫颈癌的研究  被引次数:3
   张瑜  吴敏  李新国《现代生物医学进展》,2006年第6卷第7期
   目的:研究青藤碱(sinomenine,SIN)对宫颈癌Hela细胞增殖的影响及其机制,为SIN在宫颈癌的预防和治疗上提供实验依据。方法:不同浓度SIN分别处理体外培养的人宫颈癌细胞系Hela细胞后,采用噻唑蓝(Mar)法检测处理24h、48h、72h后Hela细胞的增殖活性,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡。结果:1.0.1、0.2、0.4、0.625、1.25、2.5mmml/L SIN处理Hela细胞24h、48h、72h后,细胞增殖明显受到抑制,呈时间和剂量依赖性特点;2.流式细胞仪细胞周期分析表明,SIN处理组G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,两组比较有统计学意义;3.细胞凋亡分析表明,SIN处理组细胞凋亡率较对照组升高,呈时间和剂量依赖性特点;结论:SIN在体外能有效抑制宫颈癌细胞生长,其机制可能与其阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关,SIN有望应用于宫颈癌的辅助治疗。    

2.  NS398抑制宫颈癌Hela细胞增殖及MMP2的表达  
   邹明英  周菊香  曾希  尹小波  龙治峰《生物磁学》,2013年第25期
   目的:NS398是非甾体类抗炎药物的一种,它可以抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,但其在肿瘤发展中的作用机制尚不清楚。宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤,其侵袭转移是患者死亡的主要原因。基质金属蛋白酶几乎能降解细胞外基质中的各种蛋白质成分,在肿瘤侵袭转移中起着十分关键的作用。本文则以宫颈癌Hela细胞为研究对象,观察NS398对Hela细胞的增殖及其基质金属蛋白酶2表达的影响,探讨NS398在宫颈癌侵袭转移过程中的作用及可能机制。方法:用不同浓度的NS398(O、25、50、75、100μmol/L)处理宫颈癌Hela细胞48小时,以噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制率,酶联免疫吸附实验(EuSA)与蛋白免疫印迹技术分别检测MMP2活性及蛋白表达的变化。结果:不同浓度的NS398处理Hela细胞后,MTT法分析显示,NS398可明显降低细胞代谢MTT的能力(P〈0.05);ELISA检测发现,NS398可减少细胞培养液中活性MMP2含量(P〈0.05);Western免疫印迹检测显示,NS398可下调细胞MMP2蛋白的表达(P〈0.05),这些效应均呈剂量依赖性。结论:Ns398呈剂量依赖性抑制Hela细胞的增殖,抑制细胞中MMP2的活性,并下调细胞MMP2的表达。结果提示,NS398可通过抑制肿瘤细胞的增殖而抑制宫颈癌的生长,通过抑制MMP2的活性和下调MMP2蛋白的表达而抑制宫颈癌的侵袭转移,这为NS398在宫颈癌防治中的应用提供了新的实验依据。    

3.  顺铂诱导入宫颈癌细胞系P27表达及其超微弱发光测定的意义  
   杨海宁  惠延平  辛晓燕  黄艳红  王波《生物磁学》,2009年第3期
   目的:探讨化疗药物对肿瘤增殖活性的影响。方法:选择人宫颈癌细胞系Hela分为两组,分别采用MTT比色法分析测定顺铂处理Hela细胞的浓度;免疫组化SP法分别检测Hela细胞中P27蛋白表达;流式细胞仪分析加药前后细胞周期变化及凋亡情况;用IFFM-D型流动式化学发光仪检测细胞的超弱发光强度。结果:顺铂处理Hela细胞48h的IC50值为3mg/L,当DDP浓度在3mg/L以下时,对Hela细胞无明显毒性作用,超过此浓度时,其毒性呈剂量效应关系(P〈0.001);流式细胞仪分析细胞周期可见与Hela细胞相比较,Hela+DDP细胞的G2期细胞数增多,而Gl、S期的细胞数明显减少(P〈0.01);从细胞凋亡检测显示Hela与Hela+DDP相比,细胞凋亡率在不同时间点明显升高,在24h、48h、72h结果分别为(11.4±5.8、21.8±7.9、32.5±11.6)%。免疫组化结果显示Hela+DDP与Hela细胞相比细胞膜上P27蛋白高表达;在10—4mol/L鲁米诺及0.3%的双氧水(H202)条件下Hela细胞超弱发光强度高于用Hela+DDP细胞(P〈0.001)。结论:超弱发光能够快速、准确、有效地反映肿瘤细胞氧化代谢特点和增殖活动,也可用于筛选敏感的化疗药物。    

4.  顺铂诱导人宫颈癌细胞系P27表达及其超微弱发光测定的意义  
   杨海宁  惠延平  辛晓燕  黄艳红  王波《现代生物医学进展》,2009年第9卷第3期
   目的:探讨化疗药物对肿瘤增殖活性的影响.方法:选择人宫颈癌细胞系Hela分为两组,分别采用MTT比色法分析测定顺铂处理Hela细胞的浓度;免疫组化SP法分别检测Hela细胞中P27蛋白表达;流式细胞仪分析加药前后细胞周期变化及凋亡情况;用IFFM-D型流动式化学发光仪检测细胞的超弱发光强度.结果:顺铂处理Hela细胞48h的IC50值为3mg/L,当DDP浓度,在3mg/L以下时,对Hela细胞无明显毒性作用,超过此浓度时,其毒性呈剂量效应关系(P<0.001);流式细胞仪分析细胞周期可见与Hela细胞相比较,Hela+DDP细胞的G2期细胞数增多,而G1,S期的细胞数明显减少(P<0.01);从细胞调亡检测显示Hela与Hela+DDP相比,细胞凋亡率在不同时间点明显升高,在24h,48h,72h结果分别为(11.4±5.8、21.8±7.9、32.5±11.6)%.免疫组化结果显示Hela+DDP与Hela细胞相比细胞膜上P27蛋白高表达;在10-4mol/L鲁米诺及0.3%的双氧水(H2O2)条件下Hela细胞超弱发光强度高于用Hela+DDP细胞9P<0.001).结论:超弱发光能够快速、准确、有效地反映肿瘤细胞氧化代谢特点和增殖活动,也可用于筛选敏感的化疗药物.    

5.  BTK在粪肠球菌介导的炎症环境中的破骨作用  
   左美娜  王丽娜  仉红  董明  徐慧君  史东梅  牛卫东《中国微生态学杂志》,2018年第9期
   目的在粪肠球菌脂磷壁酸(LTA)作用的炎症环境下,研究布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)在破骨细胞中的作用,从而为根尖周炎的治疗提供实验依据。方法 PCR检测粪肠球菌LTA刺激破骨细胞后BTK基因水平的表达情况。以浓度300ng/mL的人重组蛋白BTK(recombinant human BTK,rhBTK)刺激破骨细胞,用CCK8法检测破骨细胞增殖和RT-PCR检测破骨细胞分化标志因子TRAP基因水平表达情况。结果破骨前体细胞5d诱导成功。PCR结果发现粪肠球菌LTA刺激后BTK和TRAP的mRNA表达量明显增高;免疫荧光可见LTA刺激后BTK在破骨细胞中的定位情况;300ng/mL rhBTK组可以促进破骨细胞增殖;PCR结果显示,加入rhBTK后,破骨细胞分化标志因子TRAP的mRNA水平升高。结论在粪肠球菌LTA作用的炎症环境下,BTK表达升高;增高BTK后,可以促进破骨细胞的增殖及分化。研究发现BTK参与了破骨细胞的炎症反应进程。    

6.  5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素对体外培养人宫颈癌细胞生长抑制作用的研究  
   李婷  谢宛玉  曹建国《现代生物医学进展》,2009年第9卷第19期
   目的:研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)体外抗宫颈癌作用.方法:台盼蓝染色细胞计数法测定ADFMChR对体外培养人宫颈癌细胞HeLa细胞和正常人脐静脉内皮HUVEC细胞增殖的影响;软琼脂克隆形成法及平血克隆形成法测定ADFMChR对体外培养HeLa细胞的非锚定依赖性及锚定依赖性生长作用;PI染色流式细胞术(FCM)分析ADFMChP,对HeLa细胞周期的影响.结果:ADFMChR抑制体外培养人宫颈癌HeLa细胞增殖和生长,呈剂量和时闻依赖性.其效价强度高于先导化合物白杨素(ChR),而对正常人脐静脉内皮HUVEC细胞的毒性小;ADFMChR呈剂量依赖性抑制细胞集落形成;不同浓度的ADFMChR作用于HeLa细胞后,使细胞周期阻滞于G1期.结论:ADFMChR具有抑制宫颈癌HeLa细胞生长的作用.    

7.  肉桂醛抗人宫颈癌相关机制的研究  
   王跃新  邢继强  张晓波  马淑霞  杨景云  杜佳秋《中国微生态学杂志》,2011年第23卷第6期
   目的探讨不同浓度的肉桂醛对HeLa细胞P21、CDK4蛋白表达的影响及意义。方法不同浓度的经过纯度鉴定的肉桂醛处理体外培养的HeLa细胞,培养24 h后免疫组织化学和Western blotting法检测HeLa细胞P21、CDK4蛋白表达的变化。结果肉桂醛纯度〉96.24%;肉桂醛能显著增高P21和降低CDK4蛋白在HeLa细胞中的表达,各浓度肉桂醛处理组的P21、CDK4蛋白表达与溶剂对照组相比差异均有统计学意义(P〈0.01,P〈0.05)。结论肉桂醛能上调宫颈癌HeLa细胞P21蛋白表达和下调CDK4蛋白表达,可能是促进HeLa细胞凋亡的机制之一。    

8.  胡椒碱对白纹伊蚊C6/36细胞株的毒性作用  
   王玉芳  诸葛洪祥  周霞  黄利红《昆虫学报》,2007年第50卷第5期
    采用MTT检测法、Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测法及细胞形态学观察法,研究了植物型杀虫剂胡椒碱对白纹伊蚊Aedes albopictus C6/36细胞株的细胞毒性、诱导细胞凋亡与坏死的关系、Fas蛋白的表达、细胞生长状态改变及受损细胞的恢复。结果表明:胡椒碱浓度在0.035 mmol/L以上时可以诱发C6/36细胞形态学改变,在倒置显微镜下表现为细胞呈多形性,细胞胀大或皱缩,细胞间隙增宽,大片细胞聚集成团,脱落、崩解、死亡。用胡椒碱处理24 h后,对C6/36细胞的半数毒性浓度(IC50)为 0.32 mmol/L,且毒性作用强度随着药物浓度增加而增强。Annexin-V/PI双染法检测结果显示药物浓度在0.28 mmol/L 以上诱导的细胞凋亡明显,药物浓度为0.56 mmol/L 时细胞凋亡率达19.4%,而药物引起的细胞总死亡率为72.7%;Fas蛋白表达在药物浓度0.28 mmol/L 以上时有所上调,但不明显。高浓度胡椒碱(0.56 mmol/L)分别作用于C6/36细胞24和48 h,在经历一段生长停滞后,24 h组受损细胞均可缓慢恢复,而48 h组细胞则出现不可逆性的损伤。由此认为:胡椒碱对C6/36细胞株有毒性作用,但药物诱导的细胞凋亡在细胞毒性作用机制中不占主导地位;胡椒碱对C6/36细胞的作用有时间依赖性,延长作用时间,药物对细胞的毒性作用增强。    

9.  Bruton酪氨酸激酶在昆虫细胞中的表达  
   韩苇《生物技术通讯》,1997年第Z1期
   Bruton酪氨酸激酶(Btk)是酪氨酸蛋白激酶亚家族的成员之一。人和小鼠的Btk基因均可编码77ku的蛋白质。已有研究证实,X染色体连锁血丙球蛋白缺乏症患者的Btk基因发生了突变,在X染色体连锁免疫缺乏大鼠细胞中的Btk基因也发生了突变,表明Btk与上述免疫缺陷疾病有着密切的联系。由此,人们对Btk的功能产生了很大的兴趣。近年来对大鼠肥大细胞中Btk功能的研究发现:①在IgE高亲和力受体发生交联后,Btk可被激活且其酪氨酸可发生磷酸化;②Btk可作为底物与蛋白激酶    

10.  木黄酮对小鼠胰岛β细胞电压依赖性钙通道表达和电流的影响  
   Zhao YF  Zhu YL  Chen C《中国应用生理学杂志》,2005年第21卷第2期
   目的:研究长期抑制酪氨酸激酶活性对胰岛β细胞中电压依赖性钙通道的影响,探讨酪氨酸激酶在胰岛β细胞中的作用.方法:原代培养小鼠胰岛和胰岛β细胞,经0.1 mmol/L酪氨酸激酶抑制剂木黄酮处理12 h后,运用全细胞电流记录的方法观察电压依赖性钙电流以及动作电位的改变,RT-PCR方法观察电压依赖性钙通道α1亚单位的表达改变.结果:木黄酮处理12 h后,小鼠胰岛β细胞的电压依赖性钙电流明显减小(13.83±1.515pA/pFvs 7.012±1.502 pA/pF,P<0.01,n=6),动作电位幅度明显减弱(38.50±7.46 mV vs 15.95±4.39 mV,P<0.01,n=6).木黄酮处理12 h后,小鼠胰岛中电压依赖性钙通道的α1亚单位的表达明显减少,降低为对照组的0.792±0.078(P<0.01,n=5).结论:木黄酮处理可以抑制小鼠胰岛β细胞中电压依赖性钙通道的表达和电流,提示长期抑制酪氨酸激酶活性在胰岛β细胞功能损害中具有重要作用.    

11.  乳酸杆菌发酵滤液对人宫颈癌细胞株Hela细胞的抑制作用  
   刘形  唐立  王林美  袁杰利  李华军  张婵  文姝《中国微生态学杂志》,2009年第21卷第9期
   目的观察乳酸杆菌DM9811发酵滤液及其主要成分对宫颈癌细胞株Hela细胞的体外增殖的影响,探索乳酸杆菌发酵滤液对宫颈癌细胞是否有抑制作用及解析作用的有效成分。方法用MTr法研究不同浓度乳酸杆菌DM9811发酵滤液在不同时间对Hela细胞的抑制作用,在此基础上研究脂肪酸、菌体核酸在不同时间对Hela细胞的抑制作用。结果不同浓度乳酸杆菌DM9811发酵滤液及相关物质在不同时间对Hela细胞的抑制作用显示:(1)乳酸杆菌DM9811发酵滤液各浓度组对Hela细胞的生长均有抑制作用,且这种抑制作用呈剂量-时间依赖方式。24、48、72h达到半数抑制率的发酵滤液浓度分别为8.9%、5.3%、3.8%。(2)乳酸杆菌DM9811发酵滤液脂肪酸对Hela细胞的生长有一定抑制作用,抑制率在7.0%~34.0%。(3)乳酸杆菌DM9811菌体核酸对Hela细胞的生长有抑制作用,抑制率为9.7%-53.4%,呈剂量一时间依赖方式。72h达到半数抑制率核酸的浓度为5.5μg/ml。结论乳酸杆菌DM9811发酵滤液对Hela细胞的生长具有显著的抑制作用,其中脂肪酸组分是有效成分之一。    

12.  二烯丙基二硫对人白血病K562细胞增殖及Bcl-2表达的影响  
   尹珊辉  潘德锋  王刚  秦旭平《现代生物医学进展》,2010年第10卷第13期
   目的:探讨二烯丙基二硫(DADS)对白血病K562细胞增殖的影响,以及Bcl-2表达的调节作用.方法:用DADS预处理白血病K562细胞构建细胞模型,MTT法分别检测不同DADS浓度(5 gmL-1、10 g mL-1、20 g mL-1、40 g mL-1)和不同处理时间(6h、12h、24h、48h)细胞增殖情况,IC50浓度处理白血病K562细胞之后,Western blot和RT-PCR检测Bcl-2蛋白和mRNA表达水平.结果:MTT结果显示DADS能够抑制白血病K562细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性;IC50浓度的DADS处理K562细胞24小时后,Bcl-2蛋白和mRNA的表达量显著减少.结论:DADS可显著抑制K562细胞增殖,而这一作用可能与Bcl-2表达下调有关.    

13.  野艾蒿挥发油对HeLa癌细胞形态与结构的影响  
   张璐敏  吕学维  邵邻相  麻艳芳  成文召  高海涛《广西植物》,2014年第3期
   采用MTT法检测细胞活力,用倒置显微镜、荧光显微镜和扫描电子显微镜观察细胞形态与结构的变化,用激光共聚焦显微镜观察细胞微管的分布,从而研究了野艾蒿挥发油对HeLa人宫颈癌细胞形态与结构的影响。结果表明:(1)野艾蒿挥发油对HeLa癌细胞的增殖有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖性。(2)野艾蒿挥发油处理HeLa癌细胞24h后,100、200μg/mL实验组细胞体积缩小,核染色质凝集、微绒毛消失、细胞表面有泡状突起,微管解聚,呈现典型的凋亡特征;400μg/mL实验组细胞膜破裂、胞浆内含物外泄,呈明显的坏死特征。(3)野艾蒿挥发油具有抑制HeLa癌细胞增殖的作用,低、中浓度的野艾蒿挥发油诱导细胞凋亡,而高浓度的野艾蒿挥发油引起细胞坏死。    

14.  Genistein对腺样囊性癌cyclinB1蛋白表达和细胞增殖周期的影响  
   马杰  宗志红  钟鸣  王兆元《中国组织化学与细胞化学杂志》,2005年第14卷第6期
   目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂genistein抑制人涎腺腺样囊性癌(SACC-83)细胞生长与cyclin B1蛋白表达和细胞增殖周期的关系.方法 MTT法测定genistein对SACC-83细胞体外生长的作用;流式细胞仪测定细胞增殖周期;Western Blot技术检测cyclin B1和Cdk1蛋白,并利用电泳凝胶成像分析软件对其结果进行量化分析;采用SPSS11.5统计软件对结果进行统计学分析.结果 Genistein对SACC-83细胞生长有抑制作用,且当其作用到一定时间达到一定的浓度后,该作用与剂量及时间呈依赖关系;Genistein作用的细胞与对照细胞比较,G0/G1期细胞数减少, G2/M期细胞数增多,cyclin B1和Cdk1蛋白水平降低.结论 Genistein对SACC-83细胞生长的抑制作用与其调节cyclin B1和Cdk1蛋白表达和细胞增殖周期有关.    

15.  溴化乙锭诱导无线粒体DNA宫颈癌HeLa细胞系的构建和鉴定  
   普元倩  李彬  王唯斯  严长宝  赵妤  张若鹏  熊伟《生物技术》,2019年第1期
   [目的]构建和鉴定由溴化乙锭(EB)诱导的无线粒体DNA(mtDNA)宫颈癌ρ~0HeLa细胞系,探讨mtDNA与宫颈癌发生的关系。[方法]采用含50ng/ml溴化乙锭、100μg/ml丙酮酸钠和50μg/ml尿嘧啶核苷的高糖DMEM完全培养基中传代培养HeLa细胞。低剂量EB连续诱导60d后,采用营养缺陷鉴定、PCR和WesternBlot鉴定无mtDNA的ρ~0HeLa细胞系;采用透射电子显微镜观察ρ~0HeLa细胞内线粒体形态变化;采用CCK8法测定ρ~0HeLa细胞增殖曲线。[结果]经溴化乙锭诱导60d,可以培养出具有尿嘧啶核苷依赖性的无mtDNA宫颈癌HeLa细胞系。普通PCR和qPCR结果均显示,低剂量EB诱导60d的ρ~0HeLa细胞中mtDNA完全缺失。WesternBlot结果显示,HeLa细胞中能表达核编码的NDUFA9蛋白,也能表达线粒体编码MT-ND1蛋白。而ρ~0HeLa细胞中已无MT-ND1蛋白表达,但核编码的NDUFA9蛋白能够正常表达。透射电子显微镜观察显示,ρ~0HeLa细胞内部分出现空泡改变,线粒体嵴被破坏。CCK8细胞增殖实验结果显示,ρ~0HeLa细胞系生长速度显著低于正常HeLa细胞系,且差异有统计学意义(P0.05)。[结论]无mtDNA的宫颈癌HeLa细胞系的建立,为后续研究mtDNA突变和线粒体功能在宫颈癌发生发展中的作用及机制奠定了基础。    

16.  5-氟尿嘧啶增强HeLa细胞对自然杀伤细胞敏感性研究  
   张妍  魏广智  赵敬湘  罗丹  王字玲《国外医学:分子生物学分册》,2009年第4期
   目的用5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)处理HeLa细胞,检测其NKG2D配体MICA的表达及其对NK92细胞杀伤敏感性的变化。方法不同浓度的5-Fu处理HeLa细胞,在不同时间点用半定量PCR及流式细胞术检测HeLa细胞表面的NKG2D配体MICA在RNA及蛋白水平的表达变化情况,用MTT法检测NKG2D抗体封闭NK92细胞的NKG2D受体前后,NK92细胞对HeLa细胞的杀伤作用。结果不同浓度的5.Fu作用于HeLa细胞后,半定量RT—PCR结果显示MICA表达随5-Fu作用浓度增加逐渐增高。而且40μg/ml5.Fu作用于HeLa细胞后随着作用时间的延长(0、8、16、24h)MICA表达增加,流式细胞术检测结果表明,MICA表达的增加主要依赖于未凋亡细胞的MICA表达。在40μg/ml5-FU作用24h,效靶比为2.5:1,5:1,10:1,20:1时都检测到NK92细胞对HeLa细胞的杀伤增强,杀伤作用可部分被NKG2D抗体抑制。结论5-FU能够上调HeLa细胞表面NKG2D配体MICA的表达,增强HeLa细胞对NK92细胞的敏感性,提示化疗联合NK细胞免疫治疗宫颈癌可产生协同作用,提高治疗效果。    

17.  MCP-1通过p38和ERK/MAPK途径在人单核细胞中诱导Stat3丝氨酸磷酸化  
   谭运年  金亚平《中国生物化学与分子生物学报》,2009年第25卷第5期
   为了探讨人单核细胞中,人单核细胞趋化因子1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)诱导信号转导激活转录因子3(signal transducers and activators of transcription 3,Stat3)磷酸化以及导致磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路途径在其中的作用,首先采用针对Stat3 705位酪氨酸和727位丝氨酸特异性抗体进行磷酸化时间和剂量的检测,发现MCP-1仅导致Stat3 丝氨酸磷酸化并且呈剂量和时间依赖性,而酪氨酸并没有磷酸化.在此基础上,采用不同时间点的方法对MAPK途径成员细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、p38、JNK进行检测,发现MCP-1在人单核细胞中仅诱导ERK、p38活化并呈时间依赖性,而不能诱导激活JNK途径.为了确证ERK、p38途径在人单核细胞中参与MCP-1诱导的Stat3 丝氨酸磷酸化,采用ERK、p38途径活化的小分子抑制化合物不同浓度处理单核细胞,对Stat3 丝氨酸磷酸化检测发现,MCP-1通过ERK、p38两条途径参与Stat3 丝氨酸磷酸化.这些结果表明,MCP-1在人单核细胞中仅诱导Stat3 丝氨酸磷酸化而不是酪氨酸磷酸化;MAPK成员中ERK、p38两条途径均参与MCP-1诱导的Stat3 丝氨酸磷酸化,而JNK途径没有活化参与Stat3 丝氨酸磷酸化.    

18.  Bruton酪氨酸激酶在昆虫细胞中表达的初步研究  
   韩苇  药立波  T.Kawakami《中国生物化学与分子生物学报》,1998年第14卷第3期
    用杆状病毒表达载体系统表达小鼠Bruton酪氨酸激酶(Brutontyrosinekinase,Btk).构建重组转染载体时,于Btk起始码的上游插入了一段H902序列.用重组转染载体、苜蓿夜蛾核型多角体病毒线性DNA和质脂体共转染Sf9昆虫细胞,经过对重组杆状病毒三轮扩增后,用H902抗体检测表明,昆虫细胞中Btk的表达已达最高水平.对表达后Btk自身磷酸化检测表明,该激酶具有自身磷酸化活性.从而证实Btk在昆虫细胞中的表达获得了成功    

19.  全反式维甲酸下调肝癌细胞HepG2内AFP结合蛋白的表达  
   蒋卫  李朝英  王珊珊  李慧  刘忠民  张超  李刚《中国生物化学与分子生物学报》,2010年第26卷第11期
   当成人肝细胞发生癌变,甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)在血清中的含量会急剧增加.AFP可与细胞表面AFP结合蛋白(AFP binding protein, ABP)结合促使细胞增殖分化.全反式维甲酸(al1-trans retinoic acid, ATRA)通过与特异性维甲酸受体(retinoic acid receptor, RAR)结合发挥抑制肿瘤生长的作用.Western印迹检测肝癌细胞HepG2和HLE中ABP的表达.结果显示,ABP在HepG2细胞中高表达,在HLE细胞中无明显表达.这一结果与2种细胞AFP的表达情况一致.激光扫描共聚焦显微镜定位分析显示,ABP存在于HepG2细胞胞膜和胞浆,用80 μmol/L ATRA处理HepG2细胞4 h,可导致RAR入核增加.用不同浓度(20~160 μmol/L)ATRA处理HepG2细胞后培养36 h. Western印迹结果表明,细胞ABP的表达随着ATRA浓度的增高而越少,ATRA浓度达80 μmol/L时,HepG2细胞的ABP表达减少,ATRA浓度为160 μmol/L时,ABP几乎无表达; 加入80 μmol/L ATRA后,随着作用时间延长,HepG2细胞ABP表达逐渐减少,当作用时间为12 h时,ABP表达明显减少.结果表明,ABP的表达对ATRA的反应呈剂量和时间依赖性.免疫共沉淀结果表明,AFP、ABP及RAR这3种蛋白质具有互相结合的作用.这些结果为进一步深入研究AFP在肝癌发生过程中的作用机制提供了依据.    

20.  细胞周期蛋白依赖激酶Roscovitine诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡及其机制的研究  
   张海华  孟瑾  张峰《生物磁学》,2011年第20期
   目的:探讨细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)抑制剂Roseovitine(Ros)诱导非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞凋亡及其作用机制。方法:以不同浓度Ros(101.1M、20yM、40μM)处理细胞24h,采用AnnexinV-PI染色以流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot法检测胞浆中和线粒体促凋亡蛋白Bax和Bad的表达,流式细胞仪检测线粒体膜电位(脚)变化。结果:Ros以剂量依赖的方式诱导A549细胞凋亡,同时Bad和Bax在胞浆的含量随着Ros剂量的增加而减少,而在线粒体中却出现相反的结果,线粒体膜电位随Ros剂量的增大而降低。结论:Ros可通过促进Bax和Bad由胞浆向线粒体易位,诱导NSCLCA549细胞由线粒体途径发生凋亡。    

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