RP-HPLC法测定酸枣仁汤中甘草苷的含量

目的：建立测定酸枣仁汤中甘草苷含量的反相高效液相色谱分析方法。方法：色谱柱：WatersC18（250nm×4．6mm,5wm）;流动相：乙腈一0．1％磷酸水溶液,梯度洗脱;流速：1．0ml／min,检测波长：276nm。结果：芒果苷在0．093μg·0．744μg范围内与峰面积线性关系良好（r==0．9999）,平均加样回收率为98．04％,RSD为0．41％。结论：本方法简便、准确、可靠、重复性好,可作为酸枣仁汤中甘草苷的含量测定方法。     

广西十个不同产地的两面针中活性成分的分析

采用HPLC法对广西十个不同产地的两面针中具有抗肿瘤活性的氯化两面针碱和具有镇痛活性的 L-芝麻脂素的含量进行了分析和比较。发现在不同产地的两面针中氯化两面针碱和L-芝麻脂素的含量差别 都较大,广西百色的两面针中氯化两面针碱含量和L-芝麻脂素的含量均最高,氯化两面针碱0．467％,L-芝麻 脂素0．160％;广西金秀的两面针中氯化两面针碱含量和L-芝麻脂素的含量均最低,氯化两面针碱0．0490％, L-芝麻脂素0．0370％。分析的色谱柱为HYPERSIL BDS C18,测定氯化两面针碱的条件为,流动相乙腈: 0．02 mol／L KH2PO4溶液(34:66),流速为1．0 mL／min,柱温40℃,检测波长329 nm,进样量为20μL;测定 L-芝麻脂素的条件为,流动相乙腈:水(50:50),流速为1．0 mL／min,柱温40℃,检测波长287 nm,进样量为 20μL。该研究为两面针在抗肿瘤药物和镇痛等方面的开发利用提供了可靠的理论依据,具有重要应用价值。     

1980—1999年大兴安岭灌木、草本和地被物林火碳释放估算

应用排放因子法,对大兴安岭林区1980-1999年间主要森林类型中灌木、草本和地被物因森林火灾释放的碳量及主要含碳温室气体量进行了估算．结果表明：不同森林类型灌木、草本和地被物的排放因子不同,以杜香-兴安落叶松林的灌木、草本和地被物层CO2排放因子最大,为93．08％,樟子松林最小,为82．56％;樟子松林CO和CxHy排放因子最大,分别为10．25％和0．84％,杜香-兴安落叶松林最小,分别为6．55％和0．30％．结合灌木、草本和地被物层生物量和碳储量数据,得出20年间大兴安岭典型森林类型灌木、草本和地被物层因森林火灾释放的总碳量为6．56Tg,年平均0．33Tg,约占全国森林火灾碳释放量的11．55％～16．30％;直接释放的含碳温室气体22．03Tg,其中CO2的释放量占总释放量的85．20％,CO占总释放量的14．21％,CxHy占总释放量的0．59％．     

荧光素酶基因luc在大肠杆菌中表达条件优化

对重组荧光素酶大肠杆菌菌株M15／pQE30-luc进行了表达条件的优化研究。单因素结果表明：在初始pH值7．0,装液量为20％,2％的接种量,终浓度为0．5mmol／L的IPTG,添加10—30mmol／L的Mg^2＋,摇床转速为200r／min,37℃诱导3．5h酶的表达量最高。正交试验结果表明：初始pH值为7．0,添加40mmol／LMg^2=,接种量2％,装液量为20％时表达量最高,比酶活达1．63×10^8RFU／mg蛋白。     

甘草亲缘关系的RAPD鉴定

以不同地区的3种15组甘草(Glycyrrhiza uralensis、G．infleta、G．glebra)种子为材料,探讨RAPD分子标记在研究、鉴定甘草亲缘关系中的可行性。从50个随机引物中筛选出9个有效引物,9个引物共扩增出961条DNA带,其中多态性条带811条,占总扩增条带的84．4％。对扩增出来的961条DNA带进行分析,结果表明：15组甘草植物的平均遗传距离为0．41,其中采自甘肃民勤野生甘草与采自新疆布尔津乌拉尔野生甘草遗传距离最小,为0．26;而采自内蒙古杭锦旗上海升袖的野生甘草与采自青海贵德的乌拉尔野生甘草遗传距离最大,为0．63。由RAPD聚类分析结果得出15组甘草植物之间的亲缘关系与形态学分类结果存在差异。     

猕猴桃套袋技术的生态效应

提出了猕猴桃套袋技术,并在田间系统研究了套袋对猕猴桃生长发育、温湿度效应及对病虫的控制效果,室内测定分析了套袋猕猴桃的营养物含量及农药残留量。结果表明,袋型不同,其生态效应差异明显,套膜袋能显著改变温湿度条件,袋内温度升高0．7～0．9℃,相对湿度增大10．8％～11．8％．果重增加25．7％～37．7％,商品果率提高20．4％～30．1％,病虫危害率降低87．5％～90．2％,贮藏性能好,化学农药使用量减少72．2％,果实中农药残留量仅为0．31mg·kg^-1,降低90．5％,减轻了化学农药对生态环境及猕猴桃果实的污染,为绿色果品的生产开辟了新途径,具有广阔的推广应用前景,套纸袋负效应明显,果色发黄,品质差,不宜推广应用。     

籼稻转反义蜡质基因后代的直链淀粉含量测定和纯系选育

通过根癌农杆菌介导将反义蜡质基因导入籼型雄性不育保持系龙特甫B中,获得30个PCR检测为阳性的转基因植株,其中,28个为Southern检测阳性。T1种子直链淀粉含量测定结果表明,有21个转基因植株比龙特甫B明显下降,下降幅度为3％-13％,并在部分转基因植株的种子中观察到蜡质状籽粒;对6个转基因植株进行了不同世代的直链淀粉含量测定,在L3和L5的T4代中,选择到直链淀粉含量分别为15．9％和8．4％的纯合株系,经凝胶电泳测定,WX蛋白量明显降低,并与直链淀粉含量下降表现一致。以L3-1-1-1(15．9％)和L5-8-2-1(8．4％)纯合株系为亲本,分别与龙特甫A进行成对杂交和回交,并测定了F1和B1F1种子直链淀粉含量,以L3-1-1-1作亲本的F1为21．4％,B1F1为17．1％;以L5-8-2-1作亲本的F1为13．6％,B1F1为9．3％,结果表明：在不育系的转育过程中,以中低直链淀粉含量的转基因纯合株系为亲本,能有效降低F1和B1F1的种子直链淀粉含量。     

比色法测定苦瓜中的总皂甙

本试验通过对高氯酸和硫酸体系进行比较,选择香草醛-冰醋酸-高氯酸体系作为测定苦瓜皂甙的合适显色条件,并对体系中各个因素逐一考察,确定比色法测定苦瓜皂甙的条件为：0．2mL冰醋酸,0．8mL高氯酸,5％香草醛．冰醋酸溶液,70℃条件下反应20min。试验以苦瓜皂甙建立了苦瓜皂甙测定回归曲线,线性和稳定性可靠,平均加标回收率100．78％,变异系数为1．910％。     

薄层层析-紫外分光光度法测定十全大补胶囊中芍药苷含量

目的 建立薄层层析-紫外分光光度法测定十全大补胶囊中芍药苷含量的方法。方法 使用硅胶GF254薄层板,醋酸乙酯：甲酸：冰醋酸：水(30：2：2：4)为展开剂,在紫外光灯(254nm)下定位,230nm波长处检测。结果 点样量在25～125μg范围内呈现良好的线性关系,其回归方程为Y=0．004658C-0．01959,r=0．9994,平均回收率为99．20％,RSD=1．19％。结论 本法准确,适用于该药的质量控制。     

纸层析－分光光度法检测茶氨酸

为了满足普通实验室对茶中茶氨酸测定的需要,研究了茶氨酸的纸层析-分光光度检测方法。结果表明,用茚三酮．乙醇水溶液做展层剂,对茶苗根、芽叶和茶叶的水浸提液进行纸层析,能够有效地将茶氨酸与其它氨基酸分离,紫色色斑清晰而均匀。用乙醇溶液洗脱色斑后用分光光度计在570nm比色,在20～70此茶氨酸溶液点样量范围内其含量与吸光度呈线性关系。本方法检出限为0．0057mg·mL-1,测定下限为0．0191mg·mL-1,平均回收率90．28％～115．38％,平均相对标准差1．51％,具有安全、药品种类少和操作步骤简单等特点。     

刺果甘草中黄酮类化合物的提取与分析

With three different methods, the total flavonoids from the roots of cultivated Gtycyrrhiza pallidiflora Maxim. were determined and compared by ultraviolet-visible spectrophotometry. The results showed that the extract yield of total flavonoids in crude extracts was 4.54% by direct determination method, 4.27% by AI（ NO3）3 colorimetry method and 2.09% by AlCl3 colorimetry method. The content of total flavonoids in roots of cultivated G. pallidiflora was only 0.05%. The cultivated G. pallidiflora in Lanzhou is not unfit for the medicine source of flavonoids.     

新疆胀果甘草总黄酮的细胞毒活性研究

为了探讨新疆胀果甘草总黄酮(general flavonoids,GFs)对宫颈癌细胞的细胞毒活性,自制备胀果甘草GFs,通过离子阱喷雾式质谱技术分析,建立GFs组分的指纹图谱;并且对SiHa宫颈癌细胞进行GFs药物干预,应用MTT法和流式细胞技术分别鉴定细胞活力和细胞凋亡率。获得了新疆胀果甘草GFs组分的特征性指纹图谱,提取物中GFs含量可达35.40%;发现在0～500μg/mL GFs浓度范围内,GFs药物干预引起细胞活力梯度性下降,其MTT法检出的最低值为12%;在0～1000μg/mL GFs浓度范围内,GFs诱导的细胞凋亡率呈现梯度性上升趋势,其流式细胞仪检出的最高值为78%。结果表明新疆胀果甘草GFs具有较强的细胞毒活性,能够抑制宫颈癌细胞生长与活力,并诱导细胞凋亡。     

甘草毛状根培养系统的建立及化学成分分析

利用发根农杆菌转化甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.)外植体获得毛状根,经PCR法检测,表明已转化成功。应用均匀设计法与比较法,建立了适合甘草毛状根的培养系统。化学成分分析结果表明,甘草毛状根含半胱亚磺酸,不含胱氨酸,商品甘草却含胱氨酸而不含半胱亚磺酸;甘草毛状根能合成多种黄酮成分,其中甘草查尔酮A的含量高达干生的0.18％。     

黑龙江省西部乌拉尔甘草总黄酮含量的动态变化研究

采用超声提取和分光光度法对黑龙江省西部地区乌拉尔甘草不同部位的总黄酮含量进行测定,并对其季节变化进行了分析,研究结果表明:采用50%甲醇溶液提取,超声45 min对甘草总黄酮提取效果较好,适于进行大批量样品的提取测定.无论是野生甘草还是栽培甘草,在一个生长季中,叶的总黄酮含量最高,而地下部分含量则相对较低.在5～10月期间,叶的总黄酮含量逐渐下降,而地下部分总黄酮含量如根和根茎具有上升的趋势.甘草各部位总黄酮含量在不同生长季存在波动现象,尤其在具有运输功能的部位如复叶柄、地上茎表现更为明显.野生甘草不同部位的总黄酮含量的波动可能与有性繁殖有关,而栽培甘草的总黄酮含量的波动可能与无性生殖有关.     

离子注入介导麻黄和甘草总DNA转化苜蓿的初步研究

目的:探索离子注入介导麻黄和甘草总DNA转化苜蓿的方法与效果。方法:氩离子(Ar )注入介导麻黄和甘草总DNA在2个品种的苜蓿中转化,对种子发育正常的T1代苜蓿单株进行生物碱类、黄酮类和皂苷类物质进行定性检识。结果:苜蓿种子经离子注入介导转基因处理后,T1代结荚率很低,复合DNA处理的183和283的结荚率分别为6.40%和8.33%,正常发育的种子分别为2.40%和5.83%。获得了种子发育良好的苜蓿T1代单株50株,其中6个单株根或茎的天然产物定性检识呈阳性。结论:Ar 注入介导外源DNA大分子的转化对苜蓿种子的发育具有很大影响,获得的转基因苜蓿T1代种子,为进一步开展相关化学证据和分子证据的研究提供了宝贵的材料。     

胀果甘草悬浮培养细胞合成甘草总黄酮

比较了胀果甘草(Glycyrrhiza inflata)悬浮细胞在逐级放大摇瓶中的生长、黄酮产量以及营养消耗过程,以便了解其放大规律。结果表明,在250和500mL摇瓶中,细胞的最大生物量、黄酮产量以及最大比生长速率没有显著性差异,但是在1L的摇瓶中,这三种参数都显著地降低,分别比250mL摇瓶中降低了27%,30%和27%。在逐级放大的摇瓶中,氮、磷、铵浓度都随着培养时间延长而逐渐降低,尽管在1L的摇瓶中磷消耗得最慢,但三种摇瓶中磷在细胞生长对数期基本都被消耗尽了。此外,硝态氮在第18天时基本被消耗完,而铵态氮在细胞收获时仍能维持在100mg/L。因此在反应器中培养时,主要的培养条件还需进一步优化。     

四种前体对胀果甘草细胞悬浮培养生产甘草黄酮的调控效果评价

在胀果甘草细胞悬浮体系中加入苯丙氨酸、酪氨酸、肉桂酸和乙酸钠来研究前体对甘草细胞生产甘草黄酮的影响。结果显示,4种前体在合适的浓度下对细胞的生长没有明显的抑制作用,而且均能促进细胞内甘草黄酮的生物合成,但高浓度的肉桂酸对细胞的生长有一定的抑制作用。苯丙氨酸的最佳添加浓度为20 mg/L,酪氨酸、肉桂酸、乙酸钠的最佳添加浓度都是5 mg/L。此时,均可使培养体系的甘草黄酮产量高达100 mg/L以上,其中酪氨酸的添加使得产量高达对照的1.43倍。苯丙氨酸、肉桂酸和乙酸钠3种前体的添加时间均以第10天为宜,酪氨酸添加时间以第5天为最佳。而且,在添加苯丙氨酸和乙酸钠后的第3天收获细胞,此时细胞的生物量和甘草黄酮产量最大。此外,苯丙氨酸、乙酸钠的添加可以增加黄酮合成的关键酶之一——苯丙氨酸裂解酶的活性。酪氨酸对苯丙氨酸裂解酶影响不大,而肉桂酸的添加却导致其活性显著降低。     

Chemical Constituents of Glycyrrhiza inflata Bat

There are six species of the genus Glycyrrhiza, growing in China. Along with G. uralensis, the species G. inflata is one of the widely distributed in Gansu province and Xinjang autonomous region. This species has been used in medical practice for a long time and recorded in the Chinese Pharmacopoeia of 1977 edition. The chemical constituents of G. inflata has not been reported in detail. This paper reports the isolation and identification of twelve compounds including eight flavonoids, three triterpenoids and a phytosterol from the roots of G. inflata gathered from Jinta county, Gansu province. On the basis of chemical and spectroscopic data, their structures were identified as licocha-lcone A and B, licoflavone, liquiritin, liquiritigenin, isoliquiritigenin, 4′,7-dihydrox-yflavone, ononin, glycyrrhizic acid, glycyrrhetinic acid, ll-deoxyglycyrrhetinic acid and β-sitosterol respectively. Licochalcone A was the major component among the flavonoids. It's 13C NMR data were recorded and their assignments were given for first time.The 4,7-dihydroxyflavone and ononin were isolated from the genus Glycyrrhiza for the first time.     

Flavonoids from Glycyrrhiza pallidiflora hairy root cultures

Three flavonoids named licoagrosides D, E and F together with four known flavonoids, medicarpin 3-O-glucoside, calycosin 7-O-glucoside, formononetin 7-O-(6"-malonylglucoside) and 2'-hydroxyformononetin 7-O-glucoside were isolated from Glycyrrhiza pallidiflora hairy root cultures. Their structures were determined on the basis of spectroscopic evidence. Licoagrosides E and F are the first examples of a 6a-hydroxypterocarpan glycoside and an alpha-O-glycosidic alpha-hydroxydihydrochalcone, respectively.