首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到10条相似文献,搜索用时 15 毫秒
1.
目的:研究spautin-1(一种自噬抑制剂)是否能抑制舒尼替尼诱导的肾癌细胞的自噬以及对舒尼替尼诱导的肾癌细胞凋亡的影响。方法:以肾癌细胞系786-O细胞为模型,Western Blot检测spautin-1对舒尼替尼诱导786-O细胞自噬的影响;Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测spautin-1和舒尼替尼对786-O细胞增殖的影响;应用流式细胞术,检测spautin-1对舒尼替尼诱导的786-O细胞凋亡的影响;Western Blot检测spautin-1的促凋亡作用与PI3K/AKT/GSK3β信号通路及抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的关系。结果:与舒尼替尼单独处理组相比,spautin-1能通过降低Beclin-1的表达显著抑制舒尼替尼在786-O细胞中诱导的自噬;Spautin-1和舒尼替尼联合作用明显增强舒尼替尼对786-O细胞增殖的抑制作用;Spautin-1能进一步增强舒尼替尼诱导的786-O细胞的凋亡;Spautin-1和舒尼替尼联合处理786-O细胞时,可以显著降低p-AKTSer473和p-GSK3βSer9的蛋白表达水平,增强GSK3β的活性,进而下调Bcl-2、Mcl-1的表达。结论:Spautin-1能通过抑制AKT活性并活化GSK3β,进一步降低抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1的表达,增强舒尼替尼诱导的肾癌细胞凋亡。  相似文献   

2.
探讨PKM2在白血病NB4细胞中的分布情况及对c-Myc蛋白的影响。免疫荧光技术检测PKM2在NB4细胞中的分布情况。将含靶点序列的GV248载体、包装质粒Helper 1.0和Helper 2.0共转染293T细胞,包装慢病毒。收集病毒上清,浓缩纯化后感染NB4细胞,荧光显微镜观察感染效率,Western blotting检测PKM2和c-Myc蛋白的表达变化。CCK-8实验检测细胞增殖情况。结果显示,PKM2在NB4细胞核及细胞质中均有表达,细胞核中比例较大。成功构建LV-PKM2-RNAi病毒,感染的细胞PKM2和c-Myc表达下调(p0.05),细胞增殖能力降低(p0.05)。这些结果表明PKM2主要分布在NB4细胞核,抑制PKM2表达可明显抑制NB4细胞增殖,并抑制c-Myc蛋白表达。  相似文献   

3.
该文探讨了拉帕替尼对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖和凋亡的影响及相关分子机制。用p38MAPK抑制剂和不同浓度的拉帕替尼处理NB4细胞24 h,CCK-8(cell counting kit-8)实验检测细胞增殖,FITC-Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡,光学显微镜和Hoechst 33258染色观察细胞形态,Western blot检测Bcl-2(B cell leukemia-2)、Bax(Bcl-2 associated X protein)、caspase-3、PARP(poly-ADP-ribose polymerase)、PML-RARα(promyelocytic leukemia-retinoic acid receptor alpha)、p38MAPK(p38 mitongen-activated protein kinase)和p-p38MAPK(phosphorylated p38 mitongen-activated protein kinase)等蛋白质水平。结果显示,随着拉帕替尼药物浓度的增加,细胞增殖率显著降低,细胞凋亡数量明显增加,Hoechst 33258染色可见染色质浓缩、碎裂等凋亡现象。同时,拉帕替尼能降低Bcl-2和PML-RARα蛋白质水平,增加Bax、cleaved caspase-3、cleaved PARP和p-p38MAPK等蛋白质水平。用p38MAPK抑制剂预处理后,细胞增殖率升高,凋亡率降低,p-p38MAPK、Bax、cleaved caspase-3和cleaved PARP等蛋白质水平降低。该文结果提示,拉帕替尼能够抑制NB4细胞增殖并促进细胞凋亡,并且p38MAPK信号通路可能参与这些过程。  相似文献   

4.
该文研究了表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)诱导NB4细胞凋亡的可能分子机制。不同浓度梯度EGCG处理NB4细胞,或预先用p38α抑制剂PD169316处理NB4细胞,再用EGCG处理。用CCK-8(cell counting kit-8)方法检测细胞增殖情况,用FITC-Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况,用Western blot检测p38α、P-p38α、Bcl-2和Bax蛋白质表达水平。结果显示,随着EGCG浓度的升高,NB4细胞增殖率逐渐降低,细胞凋亡率明显升高。P-p38α和Bax蛋白质表达水平升高,与EGCG浓度呈正相关;而Bcl-2蛋白质表达水平降低。p38α抑制剂处理后,NB4细胞增殖率升高,凋亡率降低,Bax蛋白质表达水平降低,而Bcl-2蛋白质表达水平无明显变化。以上结果表明,EGCG可能通过活化p38α诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞凋亡。  相似文献   

5.
该文旨在探讨抑制TGF-β信号通路对人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞体外增殖、凋亡和侵袭能力的影响。使用不同浓度TGF-β信号通路抑制剂LY364947处理AML细胞系(KG1a、OCI-AML3)后,采用CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡情况; Western blot检测细胞周期调控因子Cyclin D1/p21、凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax以及上皮细胞间质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和vimentin的表达; Transwell实验测定AML细胞迁移及侵袭能力的变化。结果显示:LY364947作用后,白血病细胞生长明显受抑制;细胞周期阻滞在G1期,伴有Cyclin D1表达下调和p21表达上调;细胞凋亡率增加,同时细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平下降,促凋亡蛋白Bax表达增高;细胞体外迁移和侵袭能力减弱。此外, E-cadherin表达增高, N-cadherin和vimentin表达下降。该研究结果提示,抑制TGF-β信号通路能够抑制白血病细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移及侵袭能力。  相似文献   

6.
为了探讨阿糖胞苷(Ara-C)通过组蛋白乙酰化酶6(HDAC6)影响人红白血病K562细胞株凋亡作用及可能的机制。采用CCK-8法检测不同浓度的Ara-C作用24h后检测细胞活力;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;Hoechest染色观察细胞核染色质的形态;RT-PCR检测HDAC1-6基因的表达变化;Western blotting检测HDAC6、p38和p-p38的蛋白表达。CCK-8检测显示不同浓度的Ara-C能抑制K562细胞的活力,并呈浓度依赖性;FCM检测显示Ara-C能增加细胞的凋亡率;Hoechest染色发现Ara-C组细胞呈凋亡形态学改变;RT-PCR检测显示Ara-C能降低HDAC1、HDAC2和HDAC6的表达;FCM和Hoechest染色发现HDAC抑制能增强Ara-C诱导K562细胞凋亡;Western blotting检测发现Ara-C能降低HDAC6,增加磷酸化p38和激活型Caspase-3表达。可见Ara-C能够通过抑制HDAC6激活p38,诱导K562细胞发生凋亡。  相似文献   

7.
探讨ACTL6A在人类白血病NB4细胞分化中的作用及其相关机制。我们用ATRA人为诱导NB4细胞分化,Western blotting检测ACTL6A和CD11b的表达水平变化;敲低ACTL6A,通过瑞氏染色观察NB4细胞的形态学改变,Western blotting检测ACTL6A和CD11b的表达水平变化及其相关蛋白的表达水平;敲低同时用ATRA处理NB4细胞,用流式细胞术检测分化标志物CD11b的阳性率;免疫荧光检测ACTL6A在NB4细胞中的空间定位;结果显示NB4经敲低ACTL6A后,CD11b的蛋白水平表达升高;瑞氏染色观察到分化改变;免疫荧光检测到ACTL6A主要分布于细胞核; Western blotting检测到Notch1,Hes1,Sox2蛋白表达水平明显下调。研究表明,敲低ACTL6A可以促进人类白血病NB4细胞分化;其机制涉及Notch1信号通路的抑制。  相似文献   

8.
该文研究葡萄籽原花青素(grape seed procyanidins,GSP)对人骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡的影响及其机制。用不同剂量GSP处理骨肉瘤143B细胞,结晶紫染色和集落形成试验分别用于检测细胞增殖和集落形成能力的变化;流式细胞术检测细胞周期与凋亡,Western blot法检测周期和凋亡相关蛋白;RT-PCR和Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的变化;采用腺病毒Adβ-catenin感染以过表达β-catenin,探讨GSP抑制143B细胞增殖的作用是否与Wnt/β-catenin信号通路相关。结果显示,GSP在20~60μg/m L剂量范围内呈剂量和时间依赖性抑制143B细胞增殖活力和降低细胞克隆形成能力;GSP引起G0/G1周期阻滞和周期相关蛋白cyclin D1下调,还使细胞凋亡率明显增高,并伴有活化的凋亡相关蛋白cleaved PARP(poly ADP-ribose polymerase)和cleaved caspase-8的水平增高;GSP降低143B细胞中β-catenin m RNA水平及核内与总β-catenin蛋白质水平,抑制GSK3β磷酸化并上调GSK3β蛋白质水平;过表达β-catenin可部分减弱GSP对该细胞增殖活性的抑制作用。结果表明,GSP抑制骨肉瘤143B细胞的增殖和促进其凋亡,其机制涉及Wnt/β-catenin信号通路的抑制。  相似文献   

9.
本文探讨吉祥草活性单体RCE-4对宫颈癌Ca Ski细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制。采用MTT法和克隆形成实验检测RCE-4对Ca Ski细胞增殖的影响,划痕实验及Transwell小室实验研究RCE-4对Ca Ski细胞的迁移和侵袭的影响,间接免疫荧光实验和Western blot法检测RCE-4对β-catenin和YAP/TAZ蛋白入核转运的影响,采用Western blot法检测RCE-4对Wnt/β-catenin、Hippo/YAP信号路通及下游靶蛋白表达的影响。结果显示,RCE-4可以显著抑制Ca Ski细胞的增殖、迁移和侵袭;RCE-4处理后,β-catenin和YAP/TAZ蛋白入核减弱,GSK3β、p-β-catenin、p-YAP、p-LATS1的蛋白表达量增加,PAK4、p-GSK3β、β-catenin、MST1、LATS1、NUAK2、YAP/TAZ、YAP的蛋白表达量减少,下游靶蛋白MMPs、c-Myc、SOX2、CYR61、VCAM-1、ICAM-1的表达被抑制,提示RCE-4体外可能通过对Wnt/β-catenin和Hippo/YAP信号通路的调控发挥其抗Ca Ski细胞侵袭和迁移的作用。  相似文献   

10.
《生命科学研究》2016,(2):145-152
心血管疾病严重危害人类健康,其致病机制主要是氧化应激诱导的内皮细胞凋亡,保护内皮细胞免受氧化应激损伤是防治心血管疾病的关键。为了探讨罗布麻总黄酮(total flavonoids of Folium Apocyni Veneti,TFF)抑制过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导的EA.hy926细胞凋亡的机制,采用不同浓度TFF处理EA.hy926细胞,一定浓度的H_2O_2造模,通过MTT法、Hoechst33342/PI荧光双染、流式细胞术检测各组的细胞凋亡情况,并用Western-blot和荧光定量PCR检测相关蛋白及m RNA的表达水平。研究发现,H_2O_2能明显诱导EA.hy926细胞凋亡,而TFF可降低H_2O_2引起的内皮细胞凋亡,表现为凋亡率降低、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)增加、裂解的半胱天冬酶-3,-9(cleaved caspase-3,-9)表达减少、髓细胞白血病因子-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)表达增加、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/glycogen synthase kinase-3β,PI3K/Akt/GSK3β)通路中Akt、GSK3β蛋白的磷酸化水平升高。上述结果表明,TFF主要是通过激活PI3K/Akt/GSK3β通路,调节Mcl-1的表达,保护MMP,进而抑制caspase蛋白的剪切活化,抑制H_2O_2诱导的EA.hy926凋亡。  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号