北方山溪鲵精子发生不同阶段的显微与超微结构

用光镜和电镜观察了北方山溪鲵(Batrachuperus tibetanus)精子发生过程中各种类型生精细胞的显微与超微结构变化。结果显示,北方山溪鲵在4~8月时处于精子发生期,精子形成在7~8月。成熟精子的结构具有小鲵科精子的一些共同特征,如顶体前端呈三叶草状,尾部由轴纤维、波动膜、轴丝及轴丝旁纤维构成,轴纤维粗大呈圆柱形,尾部无线粒体等。比较分析认为,在两栖类的系统发育中,轴纤维、波动膜和轴丝旁纤维的消失为近裔性状。     

北方山溪鲵精巢生精小叶与间质区在繁殖周期中显微结构的变化

观察北方山溪鲵(Batrachuperus tibetanus)精巢生精小叶和间质区在繁殖周期的显微结构,并测量了生精小叶的直径、生精小叶和间质区的体密度。结果显示,在精子排空期,精巢中排空区内间质细胞最发达,体密度达到最大值。在精子形成期和成熟期,间质区体密度比增殖期和成熟分裂期明显增大。说明间质区体密度的增大与精子形成以及繁殖活动密切相关,排空小叶中的支持细胞可能对间质区的间质细胞发育起重要作用。     

北方山溪鲵精巢显微结构的年周期变化

2001、2003年1～12月自秦岭北坡的溪流中,共采集北方山溪鲵(Batrachuperus tibetanus)38尾(体重27～38g)做精巢切片,在光镜下观察精巢显微结构的年周期变化。结果表明：北方山溪鲵为非连续型精子发生,精原细胞增生有两个高峰期,分别在9～11月和翌年的3～5月,初级精母细胞的成熟分裂期在6月末至7月,精子形成期在7月末至8月。每个精巢小叶可明显地分为深层的非成熟区和浅层的成熟区。非成熟区为精原细胞的贮存区,可增殖并延伸为增殖区。增殖区再发育为成熟区,为精子形成和存储的区域。在精子排出后,成熟区转变为排空区,后者被新的增殖区更替。北方山溪鲵精巢所有小叶同步发育,无精子成熟波。     

Polycomb基因家族在大鼠精子发生过程中的表达

目的检测大鼠精子发生不同阶段细胞中Polycomb-group（Pc-G）家族在mRNA水平上表达是否有差异。方法提纯大鼠精子发生过程中的精原细胞、精母细胞、圆形精子细胞以及支持细胞,用荧光定量PCR方法检测Pc-G家族基因mRNA表达量。结果Pc-G基因家族中Ezh2、Eed、Bmi-1在精子发生中后期高表达;在各生精细胞中,YY1基因表达量低于支持细胞。结论Pc-G基因家族在精子发生各阶段细胞中特征性表达,与精子发生具有相关性,可能对精子发生分化和维持遗传稳定性都有重要的作用。     

蛋白质组学在哺乳动物睾丸和精子发生中的应用

“蛋白质组学”一词由Wilkins在1994年提出,被称作后基因组时代一个新兴的研究手段.它从整体水平上对组织或者细胞的蛋白质表达、功能、相互作用进行研究,现在成为生命科学未来发展的主要分支之一.睾丸是哺乳动物雄性生殖系统中的一个重要的器官,由曲精小管和间质细胞组成.蛋白质组学在睾丸和精子发生研究上的应用及其技术手段的不断创新,对睾丸功能、生殖机理、生殖疾病的研究起到了极其重要的作用.所以,从蛋白质水平对睾丸和精子发生进行研究,为更好地理解雄性哺乳动物的生殖机理和疾病提供了一个新思路.     

DNA甲基化在精子发生中的作用

精子发生(spermatogenesis)是一个高度特化的细胞复杂分化过程,其中DNA二核苷酸CpG甲基化变化与基因转录激活、染色质改构以及遗传印记相关,并且该甲基化与基因表达之间的关系是非直接的,其可通过染色质结构的改变或DNA与蛋白质的相互作用来介导。本文着重介绍精子发生过程中DNA甲基化及其跨代遗传风险、DNA甲基转移酶的调控机制以及DNA甲基化与男性不育之间的关系等,为不育症的防治、精子表观遗传质量评价以及降低辅助生殖技术后代表观遗传疾病风险等提供基础资料。     

BDNF 和 IL-1α 免疫组织化学阳性细胞在商城肥鲵脊神经节中的表达

采用了组织学和免疫组织化学的方法对商城肥鲵的脊髓和脊神经节的石蜡切片进行了研究。结果显示,商城肥鲵的脊髓可分为灰质和白质;白质外有3层膜包围,由外向内依次是硬脊膜、蛛网膜和软脊膜。常规染色显示脊神经节位于脊神经后根,外包被膜,呈不规则的卵圆形,神经节内的细胞有两种,一种为节细胞,胞体圆形或者卵圆形,大小不等,根据胞体的大小又可分为大脊神经节细胞和小脊神经节细胞;另一种细胞叫做卫星细胞,包裹在脊神经节细胞的周围。BDNF和IL-1α一抗均显示脊神经节细胞呈阳性,卫星细胞呈阴性,前者大神经节细胞阳性明显强于小神经节细胞,后者两种神经节细胞的阳性强度无显著差异。     

中心体蛋白Cenexin在大鼠精子发生过程中的表达特征

中心体蛋白Cenexin是成熟中心粒的唯一标志分子。为阐明中心粒在大鼠精子发生中的成熟以及功能,我们首先通过RT－PCR技术从大鼠睾丸组织中扩增出了Cenexin cDNA片段,原核表达重组蛋白后,用其免疫小鼠制备了高滴度的抗Cenexin的多克隆抗体,然后利用免疫荧光染色、Western Blot和半定量RT－PCR方法,研究了大鼠精子发生过程中Cenexin蛋白和基因的表达特征。结果显示Cenexin mRNA水平在精原细胞和精母细胞中较高,随后表达水平下降,而蛋白质分子在精原细胞到精子细胞中都定位于细胞的一个中心粒上,表示有成熟中心粒的存在,在长形精子细胞中该蛋白位于鞭毛的基体部。附睾的绝大多数成熟精子中Cenexin免疫染色消失。中心体蛋白Cenexin在精子变态期的表达变化可能与精子鞭毛形成的起始有关。     

中国大鲵繁殖生物学研究进展

中国大鲵（Amndrias davidiamus Blanchard）是我国特有濒危的两栖物种,是研究生物进化、生物多样性、性别决定分子机制等的好材料,对于科学研究具有巨大的潜在贡献。近年来人们对它的研究力度不断加大,本文综述厂大鲵的繁殖生物学的近期研究工作,也简要探讨了大鲵繁殖生物学今后研究的主要工作,以期为大鲵繁殖生物学及繁殖技术的进一步的研究提供有价值的参考。     

Differential Expression of c-myc and N-myc during Oral Organogenesis of the Mouse Embryo

The expressions of the c- and N- myc proto-oncogenes during oral development of midgestational mouse embryos were examined by in situ hybridization in order to analyze their roles. In the mandibular rudiment, c- myc RNA was strongly expressed in the mesenchymal condensation around the ossification center in which high-level expression of 2 ar (osteopontin) was detected. In tooth germs, c- myc was strongly expressed in the epithelia at the bud stage, and its expression gradually became restricted to the inner enamel epithelia from the cap to bell stages. In contrast, N- myc expression was detected in the undifferentiated mesenchymal cells of the dental papilla. Incorporation of BrdU was examined immunohistochemically to study the relationship between the expressions of c- and N- myc and cell proliferation. Unexpectedly, the distribution of BrdU labelled regions was not coincident with the expressions of c- and N- myc . These results suggest that the level of myc expression is not necessarily related to cell proliferation.     

山溪鲵卵黄发生的显微与超微结构

用光镜和透射电镜观察了山溪鲵（Batrachuperus pinchonii)不同发育时期卵母细胞的显微与超微结构,特别注意了与卵黄发生相关的细胞器变化。结果表明,类核周体为线粒体、高尔基体、内质网等膜性细胞器聚集的场所;线粒体自身也可演变成卵黄前颗粒,参与构成卵黄小板的成分;吞饮泡和髓样小体是卵母细胞利用外源卵黄物质的中间媒介。经过与其他动物卵黄发生过程相比较,认为非哺乳脊椎动物卵黄发生是卵母细胞在多种细胞器参与下整体活动的结果,不是经由单一的模式或途径形成,因此呈现发生上的多元化;不同物种在卵黄发生中分别采取与各自相适应的模式或途径。     

扩张莫尼茨绦虫(圆叶目:裸头科)精细胞分化、精子形成及精子形态

本项研究应用光学显微镜、扫描和透射电子显微镜,观察了扩张莫尼茨绦虫的精细胞分化、精子形成全过程及精子的精细结构。扩张莫尼茨绦虫的精细胞分化过程为：1)初级精原细胞主要发生于幼节的睾丸滤泡中;2)次级精原细胞发生不完全分裂形成16个细胞一簇的初级精母细胞群,以共同的中央细胞质相连;3)初级精母细胞的特征为细胞核中出现联会复合体结构;4)紧接着的第二次成熟分裂,产生64个由中央细胞质相连的细胞核较小的精细胞。精子形成始于精细胞中分化区的形成,成熟精子缺乏线粒体,具有质膜和冠状体、1—4个领域排布的质膜下皮层微管,细胞质中存在电子致密的颗粒状物质,具一个不规则形态的细胞核,具有“9 1”类型的轴丝构造,缺乏轴丝周围鞘。从精子的纵切面上可将精子区分为5个区段(Ⅰ一Ⅴ区)。在精子形成过程中,中心粒基部出现螺旋形小根结构在寄生虫中为首次报导;成熟精子具有游离鞭毛,在绦虫中为首次发现[动物学报49(3)：370—379,2003]。     

Endothelins Stimulate c-fos and Nerve Growth Factor Expression in Astrocytes and Astrocytoma

Abstract: Endothelin receptors have been identified on astrocytes and astrocytoma, but their physiological significance has remained elusive. It is shown here that endothelins induce c- fos in primary cultures of mouse embryo astrocytes, as well as in two subclones of rat astrocytoma C6 cells, although with different kinetics. In addition, nerve growth factor expression is stimulated, as seen by mRNA accumulation and protein secretion, in primary astrocytes and one of the two C6 subclones, with an apparent correlation with the transience of c- fos induction. The activation of protein kinase C appears as an obligatory step during these processes, because (a) inhibition of protein kinase C by staurosporine blocks the induction by endothelin or phorbol esters of both c- fos and nerve growth factor, and (b) phorbol esterevoked down-regulation of protein kinase C completely abolishes the c- fos induction by endothelin, but not that by the β-adrenergic agonist isoproterenol, a known activator of the cyclic AMP-dependent pathway. Our results support the hypothesis that c- fos product might be implicated in nerve growth factor expression by astrocytes, and also suggest that endothelins may participate in vivo in the modulation of the glial neurotrophic activity during brain development or wound healing.     

蛋白激酶C对鼻咽癌细胞c－myc，c－fos表达的影响

用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ,抑制催化亚基）与Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ,抑制调节亚基）处理人鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－２Ｚ,经点印迹后扫描定量和免疫细胞化学检测ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ表达及其分布。结果发现：（１）ｃ－ｍｙｃ蛋白：主要分布于胞浆,４０．７％的细胞核与胞浆均为阳性;经ＳＳ或ＳＴ处理后,表达明显减弱,且核阳性率分别为１７．３％与２３．３％。扫描定量在ＳＳ组为对照组的６０％±２５．７％（Ｐ＜０．０５）,ＳＴ组为对照组的５５％±２５．９％（Ｐ＜０．０５）。（２）Ｃ－ｆｏｓ蛋白：主要分布于胞浆,２９．４％的细胞核与胞浆均为阳性,经ＳＳ或ＳＴ处理后,表达明显减弱,且核阳性率分别为９％与１０．２％。扫描定量ＳＳ组为对照组的５８．６％±２５％（Ｐ＜０．０５）,ＳＴ组为对照组的５９．７％±２６．２％（Ｐ＜０．０５）。结果表明：使用ＰＫＣ抑制剂后,两种核癌基因产物量均有不同程度的减少,并且存在细胞内分布的改变,特别是其发挥效应的核内表达明显减少。结合我们以前所发现的ＰＫＣ抑制剂明显抑制ＣＮＥ—２Ｚ细胞生长的结果,提示这些癌基因可能参与了ＰＫＣ对ＣＮＥ—２Ｚ细胞生长的调节。     

Immortalization of bovine germ line stem cells by c-myc and hTERT

The limited life span of bovine germ line stem cells in vitro is one of the obstacles to spermatogenesis analysis, genetic manipulation and generating transgenic animal. The aim of this study is to establish immortalized bovine germ line stem cells by c-myc or hTERT. We constructed pEMY and pETE expression vectors and transfected germ line cells from 5-month-old bovine. After G418 screening, four types of positive clones were obtained. The results showed that they expressed exogenous genes c-myc or hTERT at mRNA and protein level by RT-PCR and Western blotting detection. Presumable cell lines GM7, GT3, GMT5 all expressed germ-line-stem-cell-specific makers by immunocytochemical analysis, such as c-kit, Oct-4 and GFR-1. The putative cell lines also had higher capacity of proliferation than freshly isolated bovine spermatogonial stem cells. So we can conclude that exogenous genes c-myc or hTERT have integrated into the genome of bovine germ cells and upregulated the expression of telomerase.