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1.
以鸡传染性法氏囊病病毒内蒙古毒株(IBDV-NM)dsRNA为模板,用RT-PCR法扩增其主要寄主保护抗原VP2基因的全长cDNA,克隆于pUC19的XbaI/KpnI位点,进行了全序列分析。序列比较发现IBDV-NM毒株VP2基因与已报道的其它7个IBDVCJ801bkf、Cu1、PBG98、52/70、002—73、STC及VariantE毒株之间高度同源,其核苷酸序列的同源率为91.6%~96.2%,推测的氨基酸序列的同源率为96.2%~98.6%。IBDV-NM毒株VP2高变异区的第一个亲水区氨基酸序列与CJ801bkf、Cu1、PBG98、52/70、STC、002—73比较,有一个氨基酸差异,第二个亲水区氨基酸序列与上述6个毒株完全相同。而与VariantE比较,两个亲水区内各有两个氨基酸差异。此外,IBDV-NM毒株VP2具有强毒株所特有的7肽保守区:SWSASGS。这些结果表明,IBDV-NM毒株为标准血清Ⅰ型IBDV强毒株。  相似文献   

2.
采用逆转录-PCR方法,用3对引物分3个片段扩增强毒克隆(A9v)及弱毒克隆(A3%)的M基因片段cDNA,并克隆入pGEM-T载体中。采用Sanger双脱氧法测定了A39s、A9v病毒G1糖蛋白编码区的全序列,发现二者均由1978个核苷酸组成,比76/118株少6个核苷酸,并发现A39s在G1编码区有33个碱基及8个氨基酸与A9v不同。进一步与76/118、HV114的相关序列比较,发现G1编码区的第606、614位氨基酸的变异同A39s病毒的减毒有一定相关。从A39s、A9v、76/118及HV1144株病毒G1糖蛋白编码区推导的氨基酸序列亲疏水性资料显示,在位于G1糖蛋白C末端的最大亲水区域的600~620位氨基酸区域,弱毒株A39s同强毒株A9v、76/118、HV114的亲水性有明显不同,而这一差异又主要由第614位氨基酸的变异所引起。因此推测,G1糖蛋白C端亲水区域同汉滩病毒毒力相关,而第614位的精氨酸被谷氨酰胺取代,同A39s病毒毒力的减弱可能有关。  相似文献   

3.
应用亲和层析法是纯鸡马立克氏病病毒PP38基因重组产物   总被引:3,自引:0,他引:3  
利用鸡马立氏病病毒(MDV)I型特异单克隆抗体H19致敏Sepharose4B-CNBr,从感染重组病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞中提纯鸡马立克氏病毒PP38基因重组产物,获得良好效果,提纯的蛋白质的SDS-PAGE中表现出一条分子量约为38kDa的蛋白质条带,在免疫印迹试验中该蛋白质带也能被单克隆抗体H19识别。利用该提纯的重组PP38免疫小鼠,所制备的小鼠抗血清在免疫荧光染色试验中不仅能与感染重组病  相似文献   

4.
用细胞病变阳性(positive cytopathogenic effect,CPE+ )病毒马立克氏病毒(Marek'sdisease virus, MDV)血清1,2,3 型以及细胞病变阴性(negative cytopathogenic effect,CPE- )病毒猪瘟病毒(Hog cholera virus,HCV)强毒与弱毒和鸡新城疫病毒(New castle diseasevirus. NDV)Lasota 毒株及其对应的异硫氢酸荧光素(FITC)标记的特异抗体为试验材料,以免疫荧光抗体技术(FA)为基础、并加以改进,建立了标记抗体染色病毒空斑计数技术. 该技术不仅能克服常规病毒空斑计数技术不能计数细胞病变阴性病毒和一种样品含有两种或两种以上病毒的各自空斑数的缺点,能迅速准确计数出CPE- 病毒和多病毒样品中病毒各自空斑数及其空斑总数,具较高敏感性、良好的可重复性.  相似文献   

5.
以马传染性贫血病毒(ELAV)驴白细胞弱毒疫苗株(DLA)病毒基因组RNA为材料,用RT-PCR方法扩增出EIAV gag基因,以平端针其克隆到质粒载体pUC19中,由于疫苗不是克隆株,因此通过5次单独克隆与测序,推导出EIAV-DLA gag基因的优势序列。gag基因全长1458个碱基,编码一486个氨基酸残基的前体蛋白。与美国EIAV Wyoming1369株比较,核苷酸同源性为80%,氨基酸  相似文献   

6.
猪瘟病毒石门株与兔化弱毒株gp55基因的克隆与序列分析   总被引:8,自引:0,他引:8  
李红卫  涂长春 《病毒学报》1998,14(3):257-261
猪瘟病毒石门系强毒株及兔化弱毒疫苗株(HCLV株)是我国的标准毒株,囊膜糖蛋白gp55(又称E1)是该病毒最重要的保护性抗原。本实验采用反转录PCR扩增了这两个毒株的gp55基因。序列分析结果表明:1.石门株和兔化弱毒株糖蛋白E1的氨基酸序列含有15个半胱氨酸残基(Cys),其数量及位置与国外4株猪瘟病毒(Alfort、Brescia、ALD和GPE^-)完全一样。E1中Cys的数量及位置的保守性  相似文献   

7.
特超强毒型648A株马立克病病毒(MDV)的囊膜糖蛋白I(gI)基因经PCR扩增后克 进pUC18质粒载体,并对其ORF完成了DNA测序。与已发表的其它室致病型毒株的糖蛋白I的DNA和氨基酸序列比较表明,648A株的gI基因序列与超强毒RBIB株已发表的ORF5’端761个碱基完全相同。查是在该基因中完整ORF的1068个碱基中,648A与强毒GA株间有8个碱基变异并导致7个氨基酸的变化,且这一变  相似文献   

8.
用双脱氧未端经终止法对侵染性烟草共现毒普通株中国分离物(TMV-virlgar,Chinese lsoblate,TMV-Cv)和番茄株弱毒轩TMV-N14(Attenuated TMV vaccine strain)基因组cDNAs的核苷酸全序列进行了测定,并分析和比较了其基因组的结构和特征。结果表明:普通株基因组(Genbank接收号:AF165190)为6395个核苷酸:4个功能性开放阅读框  相似文献   

9.
传染性法氏囊病病毒CJ-801bkf毒株VP2 cDNA基因结构的分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
以传染性法氏囊病病毒(IBDN)中国毒株CJ-801bkf的基因组A片段dsRMA为模板,经反向转录和PCR扩增,克隆了保护性抗原VP2cDNA基因。经Sanger法测序,确定了VP2cDNA基因有1484个核苷酸,推测了VP2氨基酸的顺序,与已报导的6株IBDV毒株CuI、PBG98、52/70、002-73、STC和VariantE的VP2区做了比较,证明:克隆的CJ-801bkfVP2cDNA基因是全长的,含有正确的起始密码子ATG;CJ-801bkf与毒株Cul和pBG98同源性最高;CJ-801bkfVP2高可变区内两个亲水区的氨基酸顺序与CuI、PBG98、52/70、002-73和STC完全相同;7肽区内第三个丝氨酸残基则变异为精氨酸。这些结果提示,中国CJ-801bkf毒株应属标准血清I型IBDV弱毒株。  相似文献   

10.
邱建明  杭长寿 《病毒学报》1996,12(3):212-219
采用逆转录-PCR方法,用3对引物分3个片段扩增强毒克隆(A9v)及弱毒克隆(A39s)的M基因片段cDNA并克隆入pGEM-T载体中,采用Sanger双脱氧法测定了A39s,A9v病毒G1糖蛋白编码区的全序列,发现二者均由1978个核苷酸组成,比76/118株少6个核苷酸,并发现A39s在G1编码区有33个碱基及8个氨基酸与A9v不同,进一步与76/118,HV114的相关序列比较,发现G1编码  相似文献   

11.
DNA sequencing analysis in 38 kd phosphorylated protein (pp38) ORF of Marek's disease viruses (MDV) indicated that all tested 10 virulent strains with different pathotypes had 'A' at base #320 and glutamine at aa#107 while reacted with monoclonal antibody (Mab) H19 in indirect fluorescence antibody test (IFA). However, vaccine strain CVI988 had 'G' at base#320 and arginine at aa#107 instead, when it was negative in IFA with Mab H19. Some strains were also reactive with Mab T65 in IFA while there was 'G' at base #326 and glycine at aa#109, but the other strains, which had 'A' at base #326 and glutamic acid at aa#109, did not react with Mab T65. By comparison of CVI988 to its point mutants CVI/rpp38(AG) and CVI/rpp38(AA) with 1 or 2 base(s) changes at bases #320 and /or #326 of pp38 gene for their reactivity with Mab H19 and T65, it was confirmed that the glutamine at aa#107 and glycine at aa#109 were critical to epi-topes H19 and T65 respectively. Immuno-reactions to MDV were compared in SPF chickens ino  相似文献   

12.
DNA sequencing analysis in 38 kd phosphorylated protein (pp38) ORF of Marek’s disease viruses (MDV) indicated that all tested 10 virulent strains with different pathotypes had ‘A’ at base #320 and glutamine at aa#107 while reacted with monoclonal antibody (Mab) H19 in indirect fluorescence antibody test (IFA). However, vaccine strain CVI988 had ‘G’ at base#320 and arginine at aa#107 instead, when it was negative in IFA with Mab H19. Some strains were also reactive with Mab T65 in IFA while there was ‘G’ at base #326 and glycine at aa#109, but the other strains, which had ‘A’ at base #326 and glutamic acid at aa#109, did not react with Mab T65. By comparison of CVI988 to its point mutants CVI/rpp38(AG) and CVI/rpp38(AA) with 1 or 2 base(s) changes at bases #320 and /or #326 of pp38 gene for their reactivity with Mab H19 and T65, it was confirmed that the glutamine at aa#107 and glycine at aa#109 were critical to epitopes H19 and T65 respectively. Immuno-reactions to MDV were compared in SPF chickens inoculated with cloned CVI988 and its mutant CVI/rpp38(AG). It was found that antibody responses to MDV in chickens inoculated with CVI/rpp38(AG) were delayed and significantly lower than that in chickens inoculated with the native CVI988. By differential comparison of antibody titers to different antigens, a third epitope specific to CVI988 and dependent on arginine at aa#107 was suggested to be responsible for the big difference in antibody responses induced by native CVI988 and its mutant.  相似文献   

13.
将禽流感病毒M2基因克隆于真核表达质粒pIRES-EGFP中,使其位于pCMV启动子的调控下,并与绿色荧光蛋白基因(EGFP)串联后,将上述串联基因插入到含MDV CVI988的非必需区US基因的重组质粒pUS2中,构建带标记的重组质粒,然后将此重组质粒转染感染了MDV CVI988的鸡胚成纤维细胞,利用同源重组的方法,筛选了表达禽流感病毒M2基因的重组病毒MDV1。经PCR、Dot-blotting,Western-blotting等实验的结果表明,禽流感病毒M2基因的确插入到MDV1(CVI988)基因组中并获得表达。重组MDV1免疫1日龄SPF鸡21天后,用ELISA可检测到M2蛋白的特异性抗体。接种了重组病毒rMDV的鸡体内针对H9N2疫苗血凝素的抗体滴度(p<0.05)明显提高,以禽流感病毒AIV A/Chicken/Guangdong/00(H9N2)攻毒后进行病毒重分离试验的结果发现,重组病毒能有效地降低病毒的排出量(p<0.01),说明该重组病毒可以用于防制禽流感的免疫。  相似文献   

14.
目的:预防马立克氏病病毒(MDV)和新城疫病毒(NDV)混合感染鸡引起的疾病,构建表达NDV F蛋白的MDV疫苗株CVI988 BAC重组载体,并包装成重组病毒,为疫苗免疫提供更多的重组疫苗选择。方法:首先利用PCR扩增带有卡那霉素(Kanamycin,Kana)抗性基因片段的F基因,采用同源重组的方法将其整合到CVI988 BAC上,进一步诱导I-SceI表达敲除Kana基因而获得重组质粒CVI988 BAC-F。通过磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞获得重组病毒。结果:Western blot和间接免疫荧光实验证实重组病毒能够表达F蛋白。病毒生长曲线和蚀斑大小测定结果表明,F基因的插入不影响病毒的体外增殖。结论:利用BAC技术成功构建了整合F基因的重组MDV病毒CVI988 BAC-F,为MDV重组疫苗研发,防控NDV与MDV共感染奠定了基础。  相似文献   

15.
鸡马立克病病毒(MDV)38kd磷蛋白(pp38)基因中包括起始密码子和终止密码子的完整编码序列被整合进杆状病毒AcNPV的转移载体质粒pVL1392,用所得的含pp38基因的重组转移载体质粒pVLpp38I与野生型杆状病毒AcNPV的DNA共转染昆虫传代细胞系Sf9细胞后,用荧光抗体法以抗MDV单克隆抗体H_(19)筛选到能表达MDVpp38的重组杆状病毒克隆BP38 I。免疫印迹试验表明,在重组病毒BP38 I感染的Sf9细胞溶解物中,可表现一条分子量约为35—36kd的为单克隆抗体H_(19)识别的MDV特异性蛋白带。  相似文献   

16.
1日龄非免疫鸡分别接 马立克氏病病毒(MDV)Ⅰ强毒GA株、Ⅰ型MDV疫苗毒CVI988株和Ⅲ型火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗株后第4日起,定期采血并和抗MDV囊膜糖蛋白B(gB)单克隆抗体介导的间接免疫荧光试验检测MDV在外周因液单核细胞(PBMCs)中的感染状况。结果发现,自接种Ⅰ型强毒GA株后第4日至鸡发病死亡前,都能检出GA株引起的病毒血症,并于2周左右达到高峰;自接种CVI988株后第4日至第20日止,能检出病毒血症,并于第8天左右达到高峰;自接种HVT后第4日至第16日止,能检出病毒血症,并于第6天左右达到高峰。与此同时,将GA株病毒血症的IFA检测结果与细胞培养上病毒空班计数试验结果比较,发现IFA试验比空斑计数试验更为敏感。本试验既可用于判断对鸡作MDV疫苗免疫的接种效果,又可用于检测MDV野毒感染状态。  相似文献   

17.
利用鸡马立克氏病病毒(MDV)Ⅰ型特异单克隆抗体H_(19)致敏Sepharose 4B-CNBr,从感染重组病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞中提纯鸡马立克氏病毒pp38基因重组产物,获得良好效果。提纯的蛋白质在SDS-PAGE中表现出一条分子量约为38kDa的蛋白质条带,在免疫印迹试验中该蛋白质条带也能被单克隆抗体H_(19)识别。利用该提纯的重组pp38免疫小鼠,所制备的小鼠抗血清在免疫荧光染色试验中不仅能与感染重组病毒的昆虫细胞Sf9反应,也能和Ⅰ型MDV型感染的鸡胚成纤维细胞反应。  相似文献   

18.
接种不同毒力的马立克氏病病毒后鸡病毒血症的动态比较   总被引:2,自引:0,他引:2  
1日龄非免疫鸡分别接种马立克氏病病毒(MDV)I型强毒GA株、I型MDV疫苗毒CVI988株和III型火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗株后第4日起,定期采血并用抗MDV囊膜糖蛋白B(gB)单克隆抗体介导的间接免疫荧光试验检测MDV在外周血液单核细胞(PBMC  相似文献   

19.
将增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP)与鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的VP2基因融合,插入马立克氏病毒(MDV)CVI988/Rispens的非必需区US10片段中,成功构建表达VP2融合蛋白的MDVCVI988转移载体pUC18-US10-VP2。将转移载体质粒与CVI988/Rispens疫苗毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),筛选获得表达VP2融合蛋白的重组MDV(rMDV)。聚合酶链式反应(PCR)和间接免疫荧光实验(IFA)证明,rMDV传至第31代仍能稳定表达VP2融合蛋白。用rMDV免疫SPF鸡,进行IBDV攻毒保护试验,1日龄SPF鸡分别用1000PFU、2000PFU、5000PFU的rMDV进行免疫,33日龄用100LD50的IBDVJS超强毒进行攻毒,鸡的免疫保护率分别为50%、60%、80%。值得注意的是,5000PFU的rMDV一次免疫1日龄SPF鸡,其法氏囊组织病理损伤等级与IBD中等毒力活疫苗常规二次免疫相当(2·0/1·5),其保护效果无显著差异(p>0·05),而与非重组病毒免疫组相比较,保护效果差异显著(P<0·01),这表明构建的表达IBDVVP2融合蛋白的rMDV可以有效地为SPF鸡提供免疫保护作用。  相似文献   

20.
Fowlpox virus (FPV) recombinants expressing the glycoprotein B and the phosphorylated protein (pp38) of the GA strain of Marek's disease virus (MDV) were assayed for their ability to protect chickens against challenge with virulent MDV. The recombinant FPV expressing the glycoprotein B gene elicited neutralizing antibodies against MDV, significantly reduced the level of cell-associated viremia, and, similar to the conventional herpesvirus of turkeys, protected chickens against challenge with the GA strain and the highly virulent RB1B and Md5 strains of MDV. The recombinant FPV expressing the pp38 gene failed to either elicit neutralizing antibodies against MDV or protect the vaccinated chickens against challenge with MDV.  相似文献   

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