肿瘤患者CD8+T细胞中CD28表达的研究进展

CD28与B7结合形成的共刺激信号是T细胞激活的第二信号,肿瘤患者CD8^＋T细胞上CD28分子在肿瘤免疫中发挥着重要作用。人体抗肿瘤免疫主要由CD8^＋T细胞介导,根据CD28的表达与否可将CD8^＋T细胞分为细胞毒T细胞（CD8^＋CD28^＋,CTL）和抑制性T细胞（CD8^＋C28^-,Ts）。CTL是体内杀伤肿瘤细胞的主要功能性细胞之一,当该细胞与肿瘤接触时,通过共刺激信号而被激活,发挥其对肿瘤细胞的杀伤作用;Ts在机体的免疫耐受中发挥作用。现就肿瘤患者CD8^＋T细胞上CD28的表达作一综述。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在CD46途径下诱导IL-10生成的研究

目的：炎症抑制因子IL—10在过敏及自身免疫性疾病的发生过程中有着重要意义,补体调节蛋白CD46作为一种新的T细胞活化辅助因子可以诱导CD4^＋T细胞生成IL-10。另外有研究表明,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD^4＋CD25^＋Tregs）作为一种重要的免疫抑制细胞可以通过促进周围细胞分泌IL-10,使其抑制作用得到放大。本研究探讨在CD46辅助刺激途径下,CD4^＋CD25^＋Tregs诱导周围CD4^＋CD25^＋T细胞产生IL-10的能力。方法：分离纯化CD4^＋CD25^＋Tregs和CD4^＋CD25^＋T细胞,采用CD3／CD46或CD3／CD28刺激,分别进行单独培养或按1：10的比例共培养,同时以CD4^＋T细胞组作为比较。用氚标记胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法测定细胞增殖速率,ELISA方法测定各培养组上清IL10的水平。结果：在CD46或CD28刺激下,CD4^＋CD25^＋Tregs／CIM＋CD25^＋T细胞共培养组、CD4^＋T细胞组的几-10水平均显著高于CD4^＋CD25^＋T细胞单独培养组。在CD46刺激下,CD4^＋CD25^＋T细胞组、CD4^＋CD25^＋Tregs／CD4^＋CD25^＋T细胞共培养组、CD4^＋T细胞组IL-10的水平均较CD28刺激下明显增高,各组细胞的增殖能力均较CD28刺激下显著降低。结论：在cD46或CD28刺激下,CD4^＋CD25^＋Tregs均能够诱导CD4^＋CD25^＋T细胞分泌IL-10,CD46作为一种新的T细胞共刺激分子,与传统的CD28分子相比,能够刺激IL-10分泌增加。本文阐述了CD46途径下CD4^＋CD25^＋Tregs诱生IL-10的功能,进一步研究CD46途径下各类免疫细胞的活化反应,对于明确此途径下免疫细胞的功能改变与某些疾病发病机制的关系具有重要意义。     

未经刺激的静止CD4+T细胞与克隆CD4+T细胞在抗原特异的及主要组织相容性抗原限制的无能诱导中的差异及其意义

在体外克隆T细胞中,T细胞无能可在多种条件下诱导产生,但T细胞在体内条件下的无能诱导仍有很多疑问和争议。由于正常动物体内对单一抗原特异应答的T细胞频率太低,从体内新提取未经刺激的T细胞进行无能诱导研究一直存在技术上的困难。本文利用HNT—TCR转基因小鼠高度单一的针对HA多肽抗原的CD4^ T细胞群体,以T细胞增殖反应作为检测方法,比较研究了克隆CD4^ T细胞和新提取未经刺激的CD4^ T细胞对无能诱导的反应。结果表明,经化学交联剂l—ethyl-3-3(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide(ECDI)处理的抗原提呈细胞(APC)与流感病毒血细胞凝集素(HA)多肽诱导在克隆CD4^ T细胞中产生了无能,这种无能是依赖于特异抗原和主要组织相容性抗原(MHC)的;而在同样条件下,新提取未经刺激的CD4^ T细胞则不能被诱导产生无能。结果提示,体内T细胞与克隆T细胞存在功能上的不同,体内T细胞的无能诱导可能需要不同的条件。这对体内T细胞免疫耐受产生的机制研究和临床应用都有重要意义。     

旋毛虫在小鼠体内发育及T淋巴细胞亚群变化的动态观察

目的观察IL-2对感染旋毛虫小鼠免疫功能的影响及旋毛虫在小鼠体内的发育。方法小鼠感染旋毛虫后,分别采用ELISA和流式细胞仪检测小鼠不同时期外周血中IL-2含量、CD4^＋及CD8^＋T淋巴细胞的百分率。取小鼠不同部位肌肉观察旋毛虫的发育和分布。结果小鼠感染旋毛虫后1～5周IL-2的含量较正常组明显增加。小鼠感染旋毛虫后1～6周,CD4^＋T细胞较正常组明显减少,CD8^＋T淋巴细胞明显增多,CD4^＋／CD8^＋比值明显下降。旋毛虫幼虫主要分布在小鼠的膈肌,其次为咬肌,舌肌最少。结论IL-2对感染旋毛虫小鼠早期具有一定的免疫抑制作用,小鼠感染旋毛虫后21d即可检出旋毛虫,35～42d密度达最高。     

口服卡介菌诱导免疫耐受的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞机制研究

目的：研究口服卡介菌诱导免疫耐受对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响。方法：采用口服MPB制备EAE大鼠模型,随机分为BCG组（0.5mg/kg）和EAE模型组（PBS）,每组各15只,连续经口灌服给药14d,同时选取15只健康大鼠作为对照组。分别于免疫后15d、27d流式细胞术检测外周血、胸腺及脾脏中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞百分率,ELISA检测血清IL-6、TGF-β、IgE、IgG含量。结果：与EAE模型组相比,免疫后BCG组大鼠外周血、胸腺及脾脏中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞百分率增加,血清IL-6、TGF-β含量上升,血清IgE、IgG抗体水平下降。结论：口服BCG通过上调淋巴器官中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞比例,抑制效应性T细胞活性,发挥免疫耐受作用。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞免疫抑制功能的影响

目的探讨牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）免疫抑制功能的影响。方法采用酚水法提取Pg ATCC 33277株脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）。免疫磁珠法分离BALB／c小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Tregs并进行体外培养,同时给予不同剂量（0～500ng／ml）Pg—LPS干预,培养48h后收集细胞及上清液。Real-TimePCR法测定培养细胞Foxp3mRNA的表达,ELISA法分别测定细胞上清液中IL-10、TGF-β水平;采用体外淋巴细胞混合培养法对Pg-LPS干预后的CD4^＋CD25^＋Tregs进行功能抑制试验。结果Pg-LPS干预不影响CD4^＋CD25^＋Tregs分泌IL-10和TGF-β,但是能够显著上调CD4^＋CD25^＋TregsFoxp3mRNA的表达,增强其免疫抑制作用;当Ps—LPS浓度低于300ng／m1时,CD4^＋CD25^＋TregsFoxp3mRNA表达以及免疫抑制作用的增强与Ps—LPS浓度之间呈剂量-效应关系。结论Pg-LPS能够增强CD4^＋CD25^＋Tregs的免疫抑制作用,这种免疫抑制增强效应可能与CD4^＋CD25^＋Tregs Foxp3基因表达的上调有关,并且不具有抑制性细胞因子依赖性。     

体内CD8^＋T细胞剔除对无症状期SHIV感染猴的影响

目的 CD8＋T细胞在一些病毒感染疾病的免疫反应中起着重要的作用,但CD8＋T细胞在HIV无症状期的作用尚不明确,本研究通过体内CD8＋T细胞剔除,研究CD8＋T细胞对SHIV感染猴的影响,进一步了解艾滋病的发病机制。方法选择8只SHIV病毒感染的恒河猴,均处于无症状期,随机分成两组,实验组4只恒河猴在0、3、7 d注射抗CD8＋T抗体cM-T807,不同的时间取外周血、腹股沟淋巴结。流式细胞术测定恒河猴外周血和淋巴结中CD8＋T细胞数目,Real-time RT-PCR法测定实验猴血浆病毒载量,并使用IFN-γElispot方法测定其对猴细胞免疫的影响。结果 CD8＋T细胞敲除后,4只猴的病毒载量都转阳,但反应性不一,HIV-1的靶细胞CD4＋T细胞有轻微下降,后反弹,与病毒载量无相关性;CD8敲除猴的感染情况（血浆病毒载量和CD4细胞）比SHIV病毒急性感染轻,这与ELIPOT结果一致。结论 CD8＋T细胞在HIV无症状期发挥重要的作用,但其作用具有个体差别。     

不同电镜分型女性生殖道尖锐湿疣的CD4^＋、CD8^＋的表达

目的：探讨不同电镜分型的女性生殖道尖锐湿疣（CA）的免疫应答状态的异同。方法：将随机抽取的50例女性生殖道尖锐湿疣的活检组织按照扫描电镜和透射电镜下形态学特征分为尖锐型湿疣、结节型湿疣和内生型湿疣三组。以免疫组织化学方法（IHC）研究CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值于不同电镜分型CA中的表达。结果：结节型湿疣的CD4^＋T细胞数及CD4^＋／CD8^＋比值均显著低于尖锐型湿疣,内生型湿疣介于二者之间。结论：CD4^＋／CD8^＋比值在不同类型CA中的表达结果有统计学差异,结节型湿疣免疫应答状态异常,预示三种电镜分型的尖锐湿疣转归不同。CD4^＋／CD8^＋比值可作为判断预后的指标。     

人脐血CD34+细胞在NOD/SCID小鼠免疫重建及其抗HBV作用的初步探讨

目的：探讨NOD／SCID（nonobese diabetic／severe combined immunodeficient）小鼠移植人脐带血（human umbilical cord blood，HUCB）CD34＋细胞后免疫重建的特性。建立hu—NOD／SCID人鼠嵌合模型并观察其人源化免疫细胞在小鼠体内的生长分化特性、存活时间及其对HBV感染的清除作用。方法：1．NOD／SCID小鼠于C0603．5Gy照射后24h内尾静脉输注HUCBCD34＋细胞；2．以流式细胞技术鉴定小鼠外周血中CD45＋，CD3＋，CD19＋，CD56＋等人源化细胞的比例；3．NOD／SCID小鼠于移植后第4wk注射HBV感染者血清并以未移植的NOD／SCID小鼠作为对照，注射同等量的患者血清；4．于感染后1、7、10、15天采血，免疫荧光定量PCR方法分别检测其HBV—DNA含量。结果：1．HUCBCD34＋细胞移植后第2wk，在小鼠外周血中检测出的CD3＋CD8＋T细胞、CD3＋CD4＋T细胞、CD19＋B细胞、CD56＋NK细胞的比例分别为18．6％、16．1％、13．1％和27．8％。各细胞比例随小鼠周龄而变化。所有移植小鼠存活时间均达9wk；2．移植后小鼠感染HBV血清后，病毒仅在感染后第一天检出，随后消失；未移植CD34＋细胞的小鼠外周血HBV—DNA一直维持在103水平：结论：1．NOD／SCID小鼠经射线照射后移植HUCBCD34＋细胞，在不加任何刺激因子的情况下小鼠可以长时间存活并重建免疫；2．hu—NOD／SCID人鼠嵌合模型小鼠免疫成功重建后，对HBV感染有快速的清除作用。     

SIVmac239病毒经不同途径感染恒河猴急性期CD4~＋T细胞数量与其细胞表面CD95表达量的变化关系

目的研究SIVmac239病毒分别通过直肠（rectal infection：IR）及静脉（intravenous infection：IV）感染恒河猴,在感染急性期外周血CD4＋T细胞数量与其细胞表面的死亡受体（CD95）表达量之间的变化关系。方法将SIVmac239经直肠及静脉途径各感染14只恒河猴。监测病毒载量、CD4＋T淋巴细胞数量及CD4＋/CD8＋比值的变化,从而明确感染。同时,在感染急性期内9个时间点采集静脉血,并利用流式细胞术分析CD4＋T细胞表面CD95的表达量。结果静脉组恒河猴CD95表达量于第2天开始升高,第7天达到最高,同时CD4＋T淋巴细胞数降到最低。直肠组恒河猴也于感染后第2天开始升高,但第10天才达到最高值,CD4＋T淋巴细胞数于第17天降到最低。同静脉组相比,直肠组CD95表达量增高及CD4＋T细胞数降低均较晚出现,且其CD4＋T细胞数量降至最低晚于CD95表达量达到峰值一周后出现。结论 SIVmac239经直肠及静脉感染恒河猴后,伴随CD4＋T细胞表面CD95表达的升高,CD4＋T细胞数量逐渐下降。但不同感染途径对CD4＋T细胞表面CD95的表达量与CD4＋T淋巴细胞数的变化不尽相同,这可能由于不同感染途径造成CD95在感染急性期CD4＋T细胞数量降低中发挥的作用不同。     

幽门螺杆菌感染者CD4~+ CD25~+调节性T细胞的检测及其相关性分析

目的检测幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染阳性的胃部疾病患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)的百分含量及转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的水平,探讨CD4+CD25+调节性T细胞在H.pylori感染中的免疫调节作用及意义。方法采用流式细胞术检测H.pylori感染的慢性浅表性胃炎、胃癌前病变和胃癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的含量、CD4+CD25+T细胞中表达FOXP3的细胞比例;并采用ELISA方法检测H.pylori感染者血清中TGF-β1的含量,无H.pylori感染的患者作为阴性对照。结果 H.pylori感染的患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的百分含量及TGF-β1的水平较不伴有H.pylori感染的患者显著升高(P<0.05);H.pylori感染的浅表性胃炎、胃癌前病变及胃癌患者外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞的百分含量及CD4+CD25+T细胞中表达FOXP3的细胞比例随病变严重程度的进展逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);H.pylori感染的患者血清中TGF-β1水平也随病变严重程度的进展逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 H.pylori感染可增加CD4+CD25+调节性T细胞的含量和TGF-β1的水平;随着病变严重程度的进展,CD4+CD25+调节性T细胞的含量和TGF-β1的水平逐渐升高,CD4+CD25+调节性T细胞百分含量和TGF-β1水平可作为临床判断病情进展的指标。     

CD4+CD25+Foxp3hi细胞在夏氏疟原虫感染DBA/2小鼠作用研究

利用调节性T细胞消除的致死型夏氏疟原虫(Plasmodium chabaudi chabaudi AS,P.c chabaudi AS)感染鼠疟模型,探讨DBA/2小鼠对P.c chabaudi AS感染易感性的原因。DBA/2小鼠对P.c chabaudi AS易感,伴随原虫血症增加CD4+CD25+Foxp3+细胞数量明显增加,且以CD4+CD25+Foxp3hi增加更为明显。原虫血症达峰值时CD4+CD25+Foxp3hi细胞数量亦达到峰值。相比,Treg消除鼠的原虫出现时间和疟血症峰值时间均明显延迟,且在疟血症达峰值前(5～8 d)原虫血症水平明显低于对照组。与之相应,CD4+CD25+Foxp3hi细胞数量明显处于低水平。同时,Treg消除鼠生存期明显延长。由此提示,P.c chabaudi AS感染导致Foxp3表达增加,扩增的CD4+CD25+Foxp3hi细胞有利于疟原虫复制和逃避宿主免疫应答,进而影响疟疾感染的进程和最终结局。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与人类获得性免疫缺陷病毒感染

CD4^＋CD25^＋是调节性T细胞中功能最重要的一类。它是一类具有特殊免疫调节功能的T细胞亚群。它能够抑制自身免疫病的发生和发展，参与肿瘤免疫的调节，同时在感染和移植免疫中也发挥着极其重要的作用。T细胞的这一亚群具有免疫调节和免疫抑制的特性，新近发现它亦与爱滋病的发生、发展关系密切。HIV进入人体后，CD4^＋CD25^＋调节性T细胞抑制了机体的免疫效应但它也同时被感染，最终由于细胞毒的作用而死亡。由于调节性T细胞数量的减少不能有效的发挥其抑制作用，HIV持续的过度活化使得T细胞逐渐耗竭说明在HIV发生、发展的不同阶段Treg细胞可能都发挥了免疫抑制作用，但是却对HIV感染与爱滋病发病的进程产生了不同的效应。此外，CD4^＋CD25^＋调节性T细胞还与HIV病毒的持续存在密切相关。本文就CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与人类获得性免疫缺陷病毒（HIV）感染之间关系进行初步的探讨。     

IFN-gamma and CD8+ T cells restore host defenses against Pneumocystis carinii in mice depleted of CD4+ T cells

Host defenses against infection are profoundly compromised in HIV-infected hosts due to progressive depletion of CD4+ T lymphocytes and defective cell-mediated immunity. Although recent advances in antiretroviral therapy can dramatically lower HIV viral load, blood CD4+ T lymphocytes are not restored to normal levels. Therefore, we investigated mechanisms of host defense other than those involving CD4+ T lymphocytes against a common HIV-related opportunistic infection, Pneumocystis carinii (PC) pneumonia. Using CD4-depleted mice, which are permissive for chronic PC infection, we show that up-regulation of murine IFN-gamma by gene transfer into the lung tissue results in clearance of PC from the lungs in the absence of CD4+ lymphocytes. This resolution of infection was associated with a >4-fold increase in recruited CD8+ T lymphocytes and NK cells into the lungs. The role of CD8+ T cells as effector cells in this model was further confirmed by a lack of an effect of IFN-gamma gene transfer in scid mice or mice depleted of both CD4+ and CD8+ T cells. Cytokine mRNA analysis revealed that recruited, lung-derived CD8+ T cells had greater expression of IFN-gamma message in animals treated with the IFN-gamma gene. These results indicate that CD8+ T cells are capable of clearing PC pneumonia in the absence of CD4+ T cells and that this host defense function of CD8+ T cells, as well as their cytokine repertoire, can be up-regulated through cytokine gene transfer.     

艾滋病合并马尔尼菲青霉病256例临床研究

目的探讨艾滋病合并马尔尼菲青霉病的流行病学、临床特点、早期确诊方法及治疗方案。方法对2007年1月-2008年12月我院收治的256例艾滋病合并马尔尼菲青霉病患者的临床资料进行回顾性分析。结果1 404例艾滋病患者中合并马尔尼菲青霉病者共256例,发生率为18.2%,患者以发热、消瘦、贫血、咳嗽、咳痰、皮疹、淋巴结肿大为主要表现,外周血CD4＋T淋巴细胞平均值为19×10^6/L,患者往往还合并其他多种机会性感染,以口腔念珠菌病、耶氏肺孢子菌肺炎、结核病等多见。两性霉素B治疗组临床疗效优于氟康唑治疗组,伴有皮疹者和无皮疹者病死率差异有统计学意义（P〈0.001）。结论马尔尼菲青霉病是广西艾滋病患者常见的机会性感染之一,主要发生于CD4＋T淋巴细胞〈50×10^6/L的患者。血培养是早期确诊马尔尼菲青霉病的最有效方法,治疗上首选两性霉素B。     

Clearance of Pneumocystis carinii in mice is dependent on B cells but not on P carinii-specific antibody

Both CD4(+) T cells and B cells are critical for defense against Pneumocystis carinii infection; however, the mechanism by which B cells mediate protection is unknown. We show that P. carinii-specific IgM is not sufficient to mediate clearance of P. carinii from the lungs since CD40-deficient mice produced normal levels of specific IgM, but were unable to clear the organisms. Using chimeric mice in which the B cells were deficient in CD40 (CD40KO chimeras) we found that clearance of P. carinii infection is delayed compared with wild-type controls. These CD40KO chimeric mice produced normal levels of P. carinii-specific IgM, but did not produce class-switched IgG or IgA. Similarly, clearance of P. carinii was delayed in mice deficient in FcgammaRI and III (FcgammaRKO), indicating that P. carinii-specific IgG partially mediates opsonization and clearance of P. carinii. Opsonization of organisms by complement did not compensate for the lack of specific IgG or FcgammaR, since C3-deficient and C3-depleted FcgammaRKO mice were still able to clear P. carinii. Finally, micro MT and CD40KO chimeric mice had reduced numbers of activated CD4(+) T cells in the lungs and lymph nodes compared with wild-type mice, suggesting that B cells are important for activation of T cells in response to P. carinii. Together these data indicate that P. carinii-specific IgG plays an important, but not critical, role in defense against P. carinii. Moreover, these data suggest that B cells also mediate host defense against P. carinii by facilitating CD4(+) T cell activation or expansion.     

CD4^＋T细胞在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的通过大鼠心肌缺血再灌注损伤的动物模型,分析CD4^＋T细胞在心肌组织损伤中的作用。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支45min,随后恢复再灌的方法,制作缺血再灌损伤的动物模型,随机分为再灌注0、2、6、9、12h组及相应的对照组。II导联心电图及TTC确定模型,组织病理学观察心肌细胞的损伤情况,免疫荧光染色计数浸润的炎性细胞,半定量PCR进一步验证各型T细胞的表达。结果心肌的梗死面积与心肌缺血再灌时间成正相关,至观察结束未出现峰值;组织中浸润的中型粒细胞和T细胞分别在2h和12h有峰值出现,但CD4^＋T/CD3^＋T的比率几乎保持不变;观察所见CD4^＋T细胞是组织中存在最多的T细胞。结论大鼠缺血再灌注损伤中,心肌组织中浸润的CD4^＋T细胞作为主要的效应细胞,参与了持续稳定的心肌损伤过程。