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相似文献
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1.
参照已知的L-山梨酮脱氢酶基因序列,合成了两个引物序列,以AcetobacterliqueficiensIF012258的染色体DNA为模板进行PCR反应,克隆得到了L-山梨酮脱氢酶基因,经酶切验证与预期结果相同,序列测定结果也与已知序列一致。采用PCR方法在此基因的两端加上了E.coRI和HindⅢ两个酶切位点,经E.coRI和HindⅢ酶切后去掉了两端的多余序列后,将此片段连接到pKKH上,经诱导无蛋白表达,采用RcaI酶切启动子端,对载体pKKH则采用Mcol酶切,使表达载体的SD序列  相似文献   

2.
参照文献上的2,5-二基-D-葡萄糖酸还原酶Ⅱ基因序列,合成两个引物序列并在两端加上EcoRI和BamHI两个酶切位点,抽提棒状杆菌SCB3058菌株的染色体灯反进行PCR反应,克 得到2,5-DKG还原酶Ⅱ基因,酶切验民预期的结果相符合。将此片段克隆到PGEM-T载体上保存将2,5-DKG还原酶Ⅱ基因用EcoRⅠ和BamHIm内切酶切下,连接到PBV220载体上,构建成表达载体,42℃诱导不能得  相似文献   

3.
采用异硫氰酸胍(GuSCN)和硅藻从B95-8细胞中快速抽摸板DNA。根据EB病毒(EBV)B95-8株DNA全序列及编码EBV胸苷激酶(TK)的开放读框BXLF1的结构,设计合成一对引物,并在引物的5′一端分别引入EcoRI和PstI切点,用PCR技术扩增出一含完整的EBVTK基因的1.843KbDNA片段,NcoI酶切分析鉴定,EcoRI/PstI双酶切PCR产物和载体,使目的基因定向克隆至选  相似文献   

4.
本文介绍利用PCR方法筛选大鼠肌肉cDNA库并特异性扩增出乳酸脱氢酶A基因,经顺序测定表明和文献报道完全一致。为表达研究,我们再次利用PCR方法突变了基因N端,引入内切酶位点EcoRI和NdeI,修改后的基因在没有其他突变的情况下克隆入表达载体pKK223-3和pET3a。在pET3a载体中,分别在22℃和37℃进行了表达研究,表明22℃时活表达比37℃高。对性表达产物的纯化,利用本实验室合成的B  相似文献   

5.
卢一凡 《遗传学报》1999,26(4):281-287
采用PCR方法以正常中国人脐带血提取总DNA为模板,扩增出1.5Kb的粒细胞集落刺激因子(G-CSF)基因组基因,序列分析证实其正确性,将其插入小鼠乳清酸蛋白(WAP)基因的起支密码子ATG臆的KpnI位点,使其受控于2.6kb的WAP调控序列,从而构建乳腺表达载体pWGG。回收经EcoRI酶切后的8.7kb片段用于显微注射,共注射1200枚受精卵,移植至受体34母鼠,产生仔鼠85只,经PCR检测  相似文献   

6.
蚕豆叶绿体atpE基因的克隆,测序和表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
蚕豆叶绿体的atpE和atpB基因在叶绿体DNA KpnI酶切的第九条(约4.0kb)片段上,此片段被克隆到载体pUC18中,构成重组质粒pUK1。用玉米叶绿体atpE基因作探针对pUK1的ClaI、EcoRI等的酶切产物进行杂交,确定了蚕豆叶绿体的atpE在ClaI酶切的约0.9kb的片段上。根据pBulescript KS(+)DNA多聚接头F引物和R引物测序,得到ε亚基基因的完整核苷酸序列。  相似文献   

7.
人乳头瘤病毒16型E7基因的体外扩增及其克隆和序列分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
人乳头瘤病毒16型E7基因是转化基因。作者设计了一对PCR引物,在引物的5′端分别引入EcoRI和HindⅢ酶切序列,以HPV16DNA为模板成功地扩增出E7基因。通过EcoRI和HindⅢ双酶切位点将E7基因定向克隆入pUC18载体,经过PCR、酶切分析和Southern印迹杂交鉴定得到E7重组克隆pHSE7、DNA序列分析表明所克隆的E7基因与已发表的HPV16E7基因序列完全一致且读框正确。  相似文献   

8.
用0.15%乙烯利诱导烟草幼苗后,提取叶片总RNA,并通过反转录及多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出β-1,3-葡聚糖酶基因的cDNA。将其克隆至载体pBluescript SK后,完成了此基因的全序列分析。测序结果表明:所克隆的cDNA除第1008位碱基与所报道的不同外,其它序列完全一致。为制备抗血清,构建了此基因的大肠杆菌表达载体,并在表达宿主菌BL21(DE3)plyS中得到表达,进行了W  相似文献   

9.
采用PCR技术从E.coli基因组片中克隆出碱性磷酸酯酶的启动子和信号肽序列,在PhoA启动子5端设计了EcoRⅠ酶位点,在信号肽编码序列3端设计了HindⅢ酶切位点,将PCR产物酶切后EcoRⅠ-HindⅢ片段克隆至pBR322的EcoRⅠ-HindⅢ倍点,组构出含有PhoA启动子和信号肽序列的分泌表达载体pBM-Pho-,之后将人表皮生长因子的成熟肽基因克隆至该载体,使之有E.coli中获得分  相似文献   

10.
宁晓檬  赵晓岩 《病毒学报》1996,12(4):355-359
提取感染鸡胚成纤维细胞MDV-I弱毒株814病毒DNA为模板,根据RBIB株gB基因5′及3′两端核苷酸离列设计引物,利用PCR技术扩增了我国MDV-I弱毒株814gB基因(2.9kb)将扩增片段平末端克隆到载体pBluescriptSK中EcoRV位点,经BamHI,HindIII酶切鉴定得到不同插入方向的重组质粒。构建圹增片段的酶切图谱及部分序列分析证明与RBIB株gB基因无差异,显示了极高的  相似文献   

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